乙型肝炎和丙型肝炎患者血清抗肝特異性抗體測(cè)定

趙明才，陳 瓊，羅光成，王 梓，王 強(qiáng)，陳 悅

(1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;2.川北醫(yī)學(xué)院風(fēng)濕免疫研究所，四川 南充 637000)

病毒性肝炎是由多種肝炎病毒所引起的，以肝 病變?yōu)橹鞯娜硇詡魅静　Ｆ渲幸倚透窝撞《?hepantitis B virus，HBV)在我國(guó)一般人群中的感染率高達(dá)60%左右，丙型肝炎病毒(hepantitis C virus，HCV)感染率為3.2%。機(jī)體的免疫系統(tǒng)根據(jù)病毒和細(xì)胞相互作用的不同過(guò)程與結(jié)果導(dǎo)致免疫保護(hù)和免疫損傷，機(jī)體將可能通過(guò)分子模擬機(jī)制或超抗原等激發(fā)免疫反應(yīng)，導(dǎo)致T細(xì)胞過(guò)度激活或破壞，產(chǎn)生自身抗體，其程度可能與感染者肝功能損害和病毒復(fù)制水平有密切關(guān)系［3］。慢性病毒性肝炎患者體內(nèi)常檢測(cè)出多種自身抗體，自身抗體的出現(xiàn)引發(fā)機(jī)體多種組織器官功能的紊亂和病理?yè)p傷，加重肝炎病毒感染患者的肝功能障礙。本文對(duì)HBV、HCV患者及健康體檢者的肝細(xì)胞膜特異性脂蛋白(liver specific lipoprotein，LSP)和去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotin receptor，ASGPR)血清水平進(jìn)行檢測(cè)，觀察肝炎病毒感染患者的肝組織損傷細(xì)胞水平表現(xiàn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集了川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2011年1月至2011年10月期間住院患者，HBV感染患者51例，HCV感染患者55例的血清標(biāo)本，35例健康體檢者為正常對(duì)照組，血清標(biāo)本－80℃保存;全自動(dòng)生化儀7170檢測(cè)血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alannine aminotransferase，ALT)和總膽紅素(total bilirubin，TB)水平。采用上海源越公司生產(chǎn)的anti-LSP和anti-ASGPR ELISA試劑盒，通過(guò)雙抗一步法進(jìn)行測(cè)定。

1.2 分組情況

根據(jù)患者ALT＞40 U/mL水平將其分為ALT升高組(H)和ALT正常組(N)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)結(jié)果采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，使用ANOVA檢驗(yàn)，Dunnett(2-sided)a與正常對(duì)照組比較，HBV與HCV組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，采用Spearman相關(guān)性分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV感染組實(shí)驗(yàn)結(jié)果

HBV患者與健康對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果和AVONA統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表1，通過(guò) Dunnett(2-sided)a比較HBV(H)與健康對(duì)照組anti-LSP和anti-ASGPR比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P 值分別為 0.04、0.01。通過(guò)Spearman相關(guān)性分析anti-ASGPR與ALT具有相關(guān)性(r:0.47，P:0.02)。

表1 HBV實(shí)驗(yàn)組與健康對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 HCV感染組實(shí)驗(yàn)結(jié)果

HCV患者與健康對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果和AVONA統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表2，通過(guò)Dunnett(2-sided)a比較HCV(H)與健康對(duì)照組anti-LSP比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P值分別為0.04。通過(guò)Spearman相關(guān)性分析anti-LSP與anti-ASGPR 具有相關(guān)性(r:0.55，P:0.01)。

表2 HCV實(shí)驗(yàn)組與健康對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 HBV與HCV組anti-LSP和anti-ASGPR表達(dá)水平比較

在ALT＞40時(shí)anti-ASGPR在HBV患者表達(dá)高于 HCV組(t:6.07，P:0.001)，ALT正常水平時(shí)HBV患者 anti-LSP表達(dá)高于 HCV組(t:3.68，P:0.001)。

3 討論

LSP是肝細(xì)胞膜上的一種大分子的膜脂蛋白與細(xì)胞內(nèi)成分的混合物，含有大量肝細(xì)胞漿膜抗原。LSP能誘導(dǎo)并能維持抗肝細(xì)胞膜的自身免疫反應(yīng)。LSP可激活中性粒細(xì)胞和庫(kù)普弗細(xì)胞，產(chǎn)生一系列炎性介質(zhì)和細(xì)胞毒介質(zhì)，如氧自由基、蛋白水解酶等，致使肝細(xì)胞的進(jìn)一步損傷。LSP抗體介導(dǎo)的肝細(xì)胞受損傷是通過(guò)抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)。Anti－LSP的產(chǎn)生促使自身B細(xì)胞反應(yīng)活性增高，刺激Th細(xì)胞，并對(duì)被病毒感染導(dǎo)致自身抗原改變的肝細(xì)胞失去耐受性。ASGPR是肝特異性膜蛋白的組分之一，在肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞表面特異性表達(dá)，是僅存在于肝細(xì)胞肝竇面細(xì)胞膜上的一類(lèi)跨膜糖蛋白，是靶向基因最有效的受體。高效的異源低聚物的內(nèi)吞受體，亦是病毒的侵入位點(diǎn)，其主要功能是去除去唾液酸糖蛋白和凋亡細(xì)胞、清除脂蛋白［1－2］。

HBV侵襲機(jī)體在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，然后從肝細(xì)胞中逸出，并不直接引起肝細(xì)胞的損害，而是在肝細(xì)胞膜表面上形成特異性的病毒抗原。激活細(xì)胞免疫產(chǎn)生致敏淋巴細(xì)胞，與肝細(xì)胞膜表面上的病毒抗原LSP相結(jié)合后釋放出各種體液因子，如淋巴毒素、細(xì)胞毒因子、趨化因子、移動(dòng)抑制因子、轉(zhuǎn)移因子等，在對(duì)病毒殺滅同時(shí)亦可對(duì)肝細(xì)胞造成損害，引起壞死和炎癥反應(yīng)［3］。HCV通過(guò)入侵肝細(xì)胞，同時(shí)通過(guò)多種途徑損害免疫系統(tǒng)破壞機(jī)體的免疫耐受性，誘發(fā)產(chǎn)生自身免疫反應(yīng)從而加重肝損傷［4］。丙型肝炎患者血清中存在多種自身抗體，HCV患者自身抗體的出現(xiàn)不僅與HCV感染有關(guān)，而且與HCV感染的嚴(yán)重程度、病程長(zhǎng)短有關(guān)。

Yang等［5］研究發(fā)現(xiàn)纖連蛋白和ASGPR均介導(dǎo)HBsAg結(jié)合到肝細(xì)胞表面，纖連蛋白作為ASGPR的天然配體，纖連蛋白與ASGPR是HBV包裹蛋白中的組成部分。HBV通過(guò)pre-S1與ASGPR連接進(jìn)入細(xì)胞，在ASGPR介導(dǎo)的細(xì)胞毒性和降解作用下，HBV的DNA編碼到宿主的基因組中，導(dǎo)致病毒血癥的發(fā)生和肝臟炎癥的發(fā)生［6］。在門(mén)靜脈周?chē)渭?xì)胞壞死時(shí)在外周血能檢測(cè)到anti-LSP，急慢性乙肝感染時(shí)會(huì)有anti-LSP的表達(dá)，anti-LSP水平可反應(yīng)肝細(xì)胞壞死的程度并與疾病輕重相關(guān)。ASGPR是吸引致敏肝浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞可能性最大的靶抗原，ASGPR作為肝炎癥疾病時(shí)體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)的指標(biāo)，定量測(cè)定anti-ASGPR有助于監(jiān)測(cè)疾病活動(dòng)性［7］。肝炎病毒感染患者的Anti－ASGPR的存在證實(shí)了其與疾病慢性化的高發(fā)病率有關(guān)［8］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中HBV和HCV患者anti-LSP和anti-ASGPR水平較健康對(duì)照組增高，ALT水平升高時(shí)抗肝特異性抗體表達(dá)明顯增高，表明LSP、ASGPR可反映肝細(xì)胞損傷，且與疾病嚴(yán)重程度成正相關(guān)，并通過(guò)免疫反應(yīng)參與HBV、HCV對(duì)肝細(xì)胞損傷。通過(guò)對(duì)anti-LSP與anti-ASGRP測(cè)定能夠?qū)Ω渭?xì)胞損傷程度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，可幫助了解肝臟功能代償情況及機(jī)體的免疫表現(xiàn)，為臨床診療與監(jiān)測(cè)提供依據(jù)。肝炎病毒感染者中有一部分伴發(fā)自身免疫性肝炎，對(duì)抗肝特異性抗體的檢測(cè)有助于臨床的鑒別診斷，對(duì)治療和預(yù)后具有重要的幫助。

［1］Nishikawa M.Development of cell-specific targeting systems for drugs and genes［J］.BiolPharmBull，2005，28(2):195 － 200

［2］Mamidyala SK，Dutta S，Chrunyk BA，et al.Glycomimetic ligands for the human asialoglycoprotein receptor［J］.J Am Chem Soc，2012，134(4):1978 －1981

［3］朱友雙，孫慶元，蒙 敏，等.免疫淀粉微球的制備及其結(jié)合特性［J］.化工進(jìn)展，2008，27(7):1052 －1055

［4］檀玉芬，閆惠平，趙 艷，等.丙型肝炎和自身免疫性肝炎自身抗體的特點(diǎn)分析［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2007，11(5):622 －625

［5］Yang J，Wang F，Tian L，et al.Fibronectin and asialoglyprotein receptor mediate hepatitis B surface antigen binding to the cell surface［J］.Archives of Virology，2010，155(6):881 －888

［6］Treichel U，Meyerzum Büschenfelde KH，Stockert RJ，et al.The asialoglycoprotein receptor mediates hepatic binding and uptake of natural hepatitis B virus particles derived from viraemic carriers［J］.J Gen Virol，1994，75(11):3021 － 3029

［7］Hausdorf G，Roggenbuck D，F(xiàn)eist E，et al.Autoantibodies to asialoglycoprotein receptor(ASGPR)measured by a novel ELISA-revival of a disease-activity marker in autoimmune hepatitis［J］.Clin Chim Acta，2009，408(1-2):19 －24

［8］Diao J，Michalak TI.Virus-induced anti-asialoglycoprotein receptor autoimmunity in experimental hepadnaviral hepatitis［J］.Hepatology，1997，5(3):689 －696