魚金清解口服液的處方篩選研究

趙 濤 張曉紅 盧 露 黨艷妮 謝 偉 南景一

(陜西步長制藥有限公司，陜西省咸陽市渭陽西路西延段123號，712000)

魚金清解口服液是在國家藥品標準“魚金注射液”處方組成基礎上［1］，由魚腥草、金銀花2味藥材經提取制成的口服液體制劑，臨床療效確切，主要用于熱毒內盛而致的上呼吸道感染、支氣管肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術后發熱的病癥。魚金清解口服液包含了揮發性成分和水溶性成分［2-3］，這些成分在水中穩定性好，適合于做成口服液制劑。眾所周知，中藥制劑療效與處方組成、劑量等因素有關，我們結合魚金清解口服液的功能主治，通過體內外抗菌試驗篩選出處方的最佳配比，為該制劑的臨床療效奠定了基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AE100電子分析天平(瑞士梅特勒公司);電熱恒溫培養箱(上海醫療器械七廠);壓力蒸汽滅菌器(上海醫用核子儀器廠);電熱蒸餾水器(北京市醫療設備廠);電熱恒溫鼓風干燥箱(上海躍進醫療器械廠);無菌凈化工作臺(蘇凈集團蘇州安泰空氣技術有限公司)。

1.2 試藥 大腸埃希菌ATCC25922株，金黃色葡萄球菌ATCC25925株，綠膿假單孢菌ATCC27853株，表皮葡萄球菌ATCC26069株，甲型溶血性鏈球菌32209株，乙型溶血性鏈球菌32210株，肺炎球菌31001株，流感嗜血桿菌58535株，肺炎克雷伯菌46104株，白色假絲酵母菌85021株;魚金清解口服液處方1、2和3的試驗制劑，由陜西步長制藥有限公司生產提供。

2 方法與結果［4-5］

2.1 體外抗菌試驗方法與結果 1)藥液的配制:移取魚金清解口服液處方1、2、3分別10mL，與90mL肉湯混勻后，用孔徑0.22μm超微濾器過濾除菌，無菌藥液置4℃冰箱保存備用。2)菌液配制:將37℃、24h培養的實驗菌接種于肉湯，置普通培養箱37℃、24h培養，比濁法進行細菌計數，用肉湯調配成106CFU/mL菌液備用。3)MIC、MBC測定:將藥液用肉湯由10%為起點進行連續二倍梯度稀釋，依次加到96孔細胞培養板上，0.2mL/孔。再加入濃度為106CFU/mL的實驗菌液0.01mL/孔。同時設立細菌以及培養基對照。置4℃作用12h，于普通培養箱37℃、48h培養，觀察結果。無細菌生長孔最小藥物濃度為最小抑菌濃度(MIC)。再依次將各無細菌生長孔的培養物用無菌蒸餾水稀釋10倍，吸取0.01mL點種于普通瓊脂平板，置普通培養箱37℃、48h培養，無細菌生長點種區域所對應的藥物最小濃度為最小殺菌濃度(MBC)。結果見表1、表2。

從表1、表2可見，處方2、處方3配比的體外抗菌效果優于處方1，處方2、處方3之間無統計學意義。

2.2 體內抗菌試驗方法與結果 1)金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌菌液的制備、注射及計數:金黃色葡萄球菌用MH瓊脂培養基，乙型溶血性鏈球菌用血平板，各傳代1次，取新鮮菌體用于試驗。取金黃色葡萄球菌菌液用MH肉湯，乙型溶血性鏈球菌用5%胎牛血清的MH肉湯培養液，37℃培養箱中培養24h后，1：1混合，用滅菌生理鹽水稀釋，再用721型分光光度計在550nm波長處比色，調金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌混合菌液的濃度使OD值至0.42，取出部分菌液作細菌計數。每只小鼠注射菌液0.5mL。每只小鼠注射金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌量約為4×107個，為預試驗證實的最小致死劑量。2)不同處方配比的魚金清解口服液對金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌小鼠的保護作用:48只小鼠隨機分為4組，每組12只，即模型對照組(無菌生理鹽水)，魚金清解口服液處方1、2和3組。首次給藥后6h，注射最小致死量的金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌，造模4h，各組給藥，每日2次，連續5d。結果見表3、表4。

表1 不同處方配比的魚金清解口服液對標準菌株的MIC

表2 不同處方配比的魚金清解口服液對標準菌株的MBC

表3 不同處方配比的魚金清解口服液對金黃色葡萄球菌ATCC25925株感染小鼠體內保護實驗結果

表4 不同處方配比的魚金清解口服液對乙型溶血性鏈球菌32210株感染小鼠體內保護實驗結果

從表3、表4可見，3個處方配比的魚金清解口服液在體內對細菌感染小鼠的保護作用以處方2效果最好，處方2、處方3明顯優于處方1。

3 討論

我們采用藥效學的體內外抗菌實驗進行處方篩選，參照上述試驗研究結果，并且充分考慮各個試驗參數設立及其評價方法，最終綜合考評研究結果得出:魚金清解口服液3個處方配比中，處方2作用效果最好，故選擇處方2作為魚金清解口服液的制劑處方。

［1］戴冰.魚腥草注射液的研究近況.湖南中醫藥導報，1994，10(1):33-34.

［2］黃虹，等.均勻設計和模式識別法優化魚腥草口服液制備工藝.中成藥，2000，22(10):684-687.

［3］閻巧娟，等.金銀花中綠原酸提取純化工藝的優化.中國農業大學學報，2002，7(2):22-26.

［4］阮鳴，等.金銀花揮發油的萜類化學成分研究進展.時珍國醫國藥，2005，16(1):59-60.

［5］趙良忠，等.金銀花水溶性抗菌物質的提取及其抑菌效果研究.中國生物制品學雜志，2006，3(19):201-203.

(2012-02-01收稿)