MI F含量對糖皮質激素治療兒童支氣管哮喘療效的影響

宋玉娥 宋冬梅 張愛平

包頭醫學院第一附屬醫院兒科，內蒙古包頭 014010

中國2000年喘息性疾病流行病學調查顯示[1]，兒童哮喘累積患病率為0.25%～4.63%（平均1.97%）。相較1990年調查累積患病率0.11%～2.03%（平均1.00%）而言，10年內兒童哮喘患病率平均上升了64.8%。支氣管哮喘是一種以血清IgE增高、肺組織嗜酸性粒細胞侵潤、黏液高分泌和氣道高反應為顯著特征的慢性氣道變應性炎癥性疾病。作為兒科最常見疾病之一，它嚴重地影響了兒童的生長發育和身心健康。近年來，國內外研究表明[2]，MIF可通過多種信號轉導通路，參與支氣管哮喘的發生、發展等病理生理過程。它的促炎反應活性常和促進TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IFN-c、黏附因子以及基質金屬蛋白酶-2的表達聯系在一起。MIF是一種高度多變的蛋白質，它既是一種前炎癥因子、神經內分泌激素和酶，同時還可以作為糖皮質激素（GC）生理活動的負反饋調節劑。在治療支氣管哮喘的抗炎藥物中，糖皮質激素又是最為有效的藥物。相關研究已經證明糖皮質激素是通過與糖皮質激素受體(GR)結合，進而抑制前炎癥介質和有關細胞因子的釋放而發揮其抗炎作用的[3]。且有最新研究表明MIF是目前惟一被認為能夠負向調節GC的抗炎作用的細胞因子[4]，MIF 可以減弱 GC 對 IL-1（白介素-1）、IL-6、IL-8 和 TNF-α（腫瘤壞死因子）等多種細胞因子分泌的抑制作用，從而進一步加重炎癥反應[2]。選取2009年11月—2011年12月內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院兒科門診及病房治療的100例支氣管哮喘急性發作期患者進行研究，該研究通過測定外周學MIF的含量，來探討其對糖皮質激素治療兒童支氣管哮喘療效的影響并評價其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

100 例急性期患者中男56例，女44例，平均年齡（3.7±2.5）歲。隨機抽取53例患者進行隨訪，指導其規律霧化吸入糖皮質激素，其中失訪3例，有效隨訪50例，隨訪的支氣管哮喘患兒組中經過規律治療40 d后仍然有咳嗽和或治療過程中出現反復喘息的患兒有12例，作為反復發作組病例；而支氣管哮喘患兒組中經過規律治療40 d后無咳嗽，治療過程中未出現反復喘息的患兒有38例，作為未反復發作組病例。

入選標準：符合2008年中華醫學會兒科學分會呼吸學組制定的哮喘診斷標準，年齡0～14歲，不伴其他感染性及免疫性疾病。且所有急性期患者近4個月內未使用過激素和免疫調節劑。

治療方案：第1周，應用布地奈德混懸液1 mg霧化泵吸入,3次/d；第2周，應用布地奈德混懸液1 mg霧化泵吸入,2次/d；第3、4周，應用布地奈德混懸液0.5 mg加生理鹽水1 mL霧化泵吸入，3次/d；第 5、6周應用布地奈德混懸液 0.5 mg加生理鹽水1 mL霧化泵吸入，2次/d，霧化14 d。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本采集及保存 支氣管哮喘急性發作期患者留取空腹靜脈血 2 mL，1 500 r/min離心10 min，分別提取上層血清，分裝至200 μL EP管中，置于-70℃冰箱保存。

1.2.2 測定步驟 MIF檢測試劑盒購買于美國R&D System公司，采用酶聯免疫吸附法 （enzyme-linked imunosorbent assay,ELISA）測定。（1）從冰箱內取出待測樣品，平衡至室溫；（2）取出試劑盒，室溫放置30 min。（3）取出酶標板依次編號，并設空白孔和標準品孔。（4）加樣：①空白孔不加樣品，生物素標記的抗MIF抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；②標準品孔：加入標準品50 uL,鏈霉素-HRP 50 uL；③待測樣品孔：加入樣本40 uL，然后加入抗-MIF抗體10 uL、鏈霉素-HRP 50 uL，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37 ℃溫育 60 min。（5）配液：將30倍的濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。（6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復5次，拍干。（7）顯色：每孔加入顯色劑A50 uL,再加入顯色劑B 50 uL,輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色10 min。（8）終止：每孔加入終止液50 uL，終止反應（此時藍色轉為黃色）。（9）測定：以空白孔調零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定在加終止液后10 min內進行。

1.3 統計方法

2 結果

經統計學分析，反復發作組支氣管哮喘患兒（反復發作組）有12例，這12例患兒的MIF含量明顯高于未反復發作組支氣管哮喘患兒的 MIF 含量（F=0.71134，P=0.000，P<0.05）（見表 1，圖1）。

表1 兩組患兒急性期檢測外周血MIF結果比較

圖1 兩組支氣管哮喘患兒急性期MIF含量比較

3 討論

支氣管哮喘作為一種氣道慢性炎癥性變態反應性疾病，目前其最為有效的治療藥物仍然是GC。而相關研究已經證實，MIF和GC在細胞表面受體及細胞內兩個水平上具有相互作用[5]。MIF作為目前惟一被認為能夠負向調節GC抗炎作用的細胞因子，其主要作用機制包括[6-7]：①抑制了MKP-1(蛋白激酶磷酸酶-1)的表達；②激活 cPLA(胞漿型磷脂酶 A)；③抑制 NF-κB（核因子κB）；④與 COP9信號小體調節 IxBa相關；⑤其他作用機制。Roger等[8]研究發現，MIF以自分泌的方式通過對MKP-1誘導表達而負向調節了GC抑制促炎細胞因子產生的作用，并指出MIF在巨噬細胞的免疫應答中發揮必須作用。由于MIF對GC的抗炎作用有顯著拮抗作用，一部分學者認為MIF與支氣管哮喘患者對GC的耐藥性有關。國外學者Sabroe等[9]通過臨床研究發現在激素抵抗型哮喘患者外周血中MIF呈高表達水平，進一步證實了MIF與哮喘患者激素抵抗的發病有相關性。國內學者陳培芬、羅雅玲等[10]對哮喘小鼠研究發現，MIF在氣道重塑小鼠肺中高表達，而研究證實氣道重構是持續難治性哮喘的顯著特征，故氣道重塑中MIF的表達可能減弱了GC敏感性，與持續難治性哮喘有關。

該研究結果顯示，反復發作組患兒外周血中MIF含量顯著高于未反復發作組，提示MIF的存在減弱了GC的敏感性，對GC治療支氣管哮喘療效有顯著影響。且陳培芬等[7]研究發現MIF在氣道重塑小鼠肺中高度表達，提示MIF與氣道重塑密切相關，而氣道重塑是不可逆性的，它是成人持續難治性哮喘的顯著特征。該實驗中反復發作組患兒外周血中MIF顯著增高，進而我們推測此類患兒發生氣道重塑可能性大于未反復發作組患兒，他們將來極有可能轉為成人哮喘，故外周血MIF可作為判斷支氣管哮喘患兒預后的指標之一。

[1]全國兒童哮喘協助組.2000年與1990年兒童支氣管哮喘患病率的調查比較[J].中華結核與呼吸雜志,2004(2):112-116.

[2]Clark NM,Goog M,Clork MA,et al.Loog term effects of Asthma eclucation for physicians on patient satisfaction and use of health services[J].Eur Respir J,2000（16）:15-21.

[3]崔娜,劉大為.糖皮質激素在嚴重感染和感染性休克中的應用[J].中國危重病急救醫學，2005,17(4):241-243.

[4]Nishihira J.Macrophage migration inhibitory factor(MIF):its essentialrole in the immune system and cell growth[J].J Inteferon Cytokine Res,2000（20）:751-762.

[5]Calandra T,Bernhagen J,Metz CN,et al.MIF as a glucocorticoid-induced modulator of cytokine production[J].Nature,1995,377(6544):68-71.

[6]Kobayassh IM,Nasuhaya Y,Kamachi A,et al.Role of macrophage migration inhibitory factor in ovalbumin-induced air way inflammation in rats[J].EurRespir J,2006,27(4):726-734.

[7]Mizue Y,Glumi s,Leng L,et al.Role for maerophage migration inhibitory factor in asthma[J].Proe Nail Aead Sci USA,2005,102(40):14410-14415.

[8]Roger T,Chanson AL,KnaupReymond M,et al.Macrophage migration inhibitory factor promotes innate immune responses by suppressing glucocorticoid-induced expression of mitogen-activated protein kinase phosphatase-1[J].Eur J Immunol,2005,35(12):3405-3413.

[9]Sabroe I,Pease JE,Williams TJ.Asthma and MIF:innately Th1 and Th2[J].Clin Exp Allergy,2000(30):1194-1196.

[10]陳培芬,羅雅玲,賴文巖,等.慢性哮喘小鼠肺組織巨噬細胞移動抑制因子的表達及地塞米松對其的調節[J].廣東醫學,2009,30(3):338-341.