Maspin在肝細胞癌中的表達及其與Caspase－3的關系

蘇州大學醫(yī)學院附屬常州腫瘤醫(yī)院普外科（常州213001） 張 駿

原發(fā)性肝癌（HCC）是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率、病死率明顯增加。Maspin是1994年Zou等［1］用消減雜交的方法在比較正常乳腺與乳腺癌組織時發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族成員之一。Maspin在乳腺、前列腺、角膜、卵巢、小腸等人體器官組織中有高水平表達，而在相應的惡性腫瘤中表達下調(diào)或不表達，提示它可作為腫瘤轉(zhuǎn)移及預后評估的一個重要指標。我們采用免疫組織化學方法分別檢測了50例肝癌組織及癌旁肝組織中Maspin的表達并分析其與Caspase－3的關系，旨在探討Maspin在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用及可能機制。

材料與方法

1 一般資料 隨機選取2004年1月至2008年8月間在蘇州大學附屬第三醫(yī)院肝膽外科，原發(fā)性肝癌行腫瘤切除的50例病例，術前均未行放化療、肝動脈栓塞及免疫治療等。其中男42例，女8例，年齡38～81歲，平均53．10±10．96歲。同時取距離上述肝癌腫塊2c m以上的癌旁肝組織標本50例作為對照。

2 方 法 免疫組織化學采取Envision T M二步法。鼠抗人Maspin免疫組化單克隆抗體（濃縮型）購自英國Neo mar ker公司，配制成工作液濃度為1∶50；兔抗人Caspase－3免疫組化多克隆抗體（即用型）購自北京中杉生物公司。石蠟包埋的組織制成4μm厚切片。免疫組織化學染色步驟按試劑盒說明進行，Maspin單克隆抗體用人乳腺組織標本做陽性對照，Caspase－3多克隆抗體用人扁桃體組織標本作陽性對照，以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。

3 免疫組化結(jié)果判定 Maspin、Caspase－3以胞漿、胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性細胞。每例切片隨機選取5個高倍視野進行結(jié)果判定。按染色強度及陽性細胞數(shù)占腫瘤細胞總數(shù)的百分比綜合計分。

4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS10．0軟件包進行統(tǒng)計分析。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1 Maspin、Caspase－3在肝癌和癌旁肝組織中的表達 見表1。肝癌組織中Maspin的陽性率28%（14/50），與Caspase－3的陽性率36%（18/50），均低于相應癌旁肝組織，分別為66%（33/50）和76%（38/50）。二者比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。

表1 肝癌與癌旁組織中Maspin、Caspase－3的蛋白表達比較

2 Maspin、Caspase－3的表達與肝癌臨床病理參數(shù)的關系 見表2。表2顯示Maspin蛋白表達與Edmonson病理分級、有無肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移有關；Caspase－3的表達與Ed monson病理分級、有無肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移、有無包膜有關。均具有統(tǒng)計學差異（P＜0．05）。

表2 Maspin、Caspase－3蛋白表達與肝癌患者臨床病理特征的關系

3 肝癌中Maspin的表達與Caspase－3的關系見表3。肝癌組織中，Maspin的表達與Caspase－3呈正相關 （r＝0．553，P＜0．01）。

表3 肝細胞癌中Maspin與Caspase－3的關系

討 論

有臨床研究表明Maspin與腫瘤抑制明顯相關，原發(fā)乳腺癌組織中Maspin蛋白含量較自體對側(cè)正常組織明顯減少［2］；口腔鱗癌組織中Maspin蛋白高表達者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯降低，患者的生存率也相對較高［3－4］；對乳腺癌和前列腺癌研究發(fā)現(xiàn)從原位癌到浸潤癌再到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌，Maspin蛋白含量依次減少［5］。本研究表明，肝癌組織中Maspin蛋白陽性表達率低于癌旁組織，而且與Ed monson病理分級、有無肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移有關，均具有統(tǒng)計學差異。這就說明了Maspin在人肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展以及侵襲轉(zhuǎn)移過程中起一定作用。

細胞凋亡在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中起了較為重要的作用。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）是一組與凋亡密切相關的蛋白水解酶。Caspase－3在細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導過程中起核心作用，是家族中最重要的成員。本研究證明Caspase－3在肝癌組織中較癌旁組織中的表達降低，和Maspin在肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展中存在正相關（r＝0．553，P＝0．000）。與之相符，Wang等［6］在對正常胃粘膜、腸化生胃粘膜和胃癌的分析中發(fā)現(xiàn) Maspin和Caspase－3的表達呈正相關。我們推測，Maspin和Caspase－3在肝細胞癌中的發(fā)生過程中作用密切相關，且呈協(xié)同作用。

綜上所述，Maspin在肝細胞癌中表達下調(diào)，Maspin可能在抑制肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中有重要作用。肝細胞癌發(fā)生過程中Maspin低表達導致Caspase－3活性降低，細胞凋亡受抑制，從而導致腫瘤發(fā)生，Maspin是腫瘤凋亡治療的調(diào)節(jié)劑。Maspin通過調(diào)節(jié)細胞凋來抑制肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移。

［1］Zou Z，Anisowicz A，Hendrix MJ，et al．Maspin，a ser pin with tu mor－suppressing activity in hu man mammary epithelial cells［J］．Science，1994，263（5146）：526－529．

［2］Maass N，Nagasaki K，Jonat W，et al．Expression of t u mor suppressor gene maspin in hu man breast cancer t u mor［J］．ASCO Pr oc，1999，18（10）：2452－2454．

［3］Yasunlatsu R，Nakashi ma T，Hirakawa N，et al．Maspin expression in stage I and II oral tongue squamous cell carcino ma［J］．Head Neck，2001，23（11）：962－966．

［4］Xia W，Lau YK，Hu MC，et al．High t u mour maspin expression is associated with i mpr oved survival of patients with oral squamous cell carcino ma［J］．Oncogene，2000，19（20）：2398－2403．

［5］Maass N，Nagasaki K，Ziebart M，et al．Expression and regulation of t u mor suppressor gene maspin in breast cancer［J］．Clin Breast Caneer，2002，3（4）：281－287．

［6］Wang MC，Yang Y M，LI XH，et al．Maspin expression and its clinic pathological significane in tu morigenesis and progression of gastric cancer［J］．World J Gastronterol，2004，10（5）：634－637．