環保透明劑替代二甲苯在病理制片技術中的應用

第四軍醫大學唐都醫院病理科（西安710038）

蘭 淼 李艷紅△ 鞏 麗 朱少君 任 拼 姚 麗 韓秀娟 張 偉▲

在常規組織石蠟制片技術中，組織透明、切片脫臘、透明、封固劑制備都離不開透明劑的使用，是病理制片必須使用的有機溶劑。二甲苯作為病理石蠟切片透明劑效果優良，但隨著其對人體的毒性研究，發現長期使用二甲苯可對機體構成眾多危害［1］，吸入二甲苯蒸氣可引起眼、鼻、喉的刺激，高濃度時可致嚴重的呼吸困難，甚至死亡。衛生部在《工業企業設計衛生標準》中對二甲苯的最高容許濃度做了具體規定［2］，已把二甲苯中毒定為職業病之一。環保透明劑是以純天然植物提取油配制而成無色芳香透明液體。我們采用環保透明劑代替二甲苯運用到病理制片和染色過程中，觀察其運用效果，現報道如下。

材料與方法

1 材 料 選取本院2010年4～6月臨床送檢的活體組織標本，其中胃腸組織30例，甲狀腺組織30例，皮膚組織30例，淋巴結組織30例，共計120例。儀器包括德國Leica SP300全自動封閉式脫水機2臺、德國Laica自動染色封片機2臺、德國Leica RM 2235石蠟切片機均由西安康源生物器材公司提供；YT－6B型攤烤片機由湖北孝感亞光醫用生物器材公司提供。試劑包括環保透明劑（由廣州市秀威貿易有限公司提供）、二甲苯分析純（西安化學試劑廠）、蘇木素（英國進口上海化學試劑分裝廠提供）、伊紅（北京化學試劑廠）、中性樹膠（中國上海標本模型廠）。

2 方 法 120例標本每例標本分別取兩塊組織，取材大小為1．5c m×1．5c m×0．3c m。分為二甲苯組與環保透明劑組各120塊。分別放入裝有環保透明劑和二甲苯試劑的全自動封閉式脫水機中，組織按常規脫水程序進行固定、脫水、透明和浸蠟。每組各設2缸透明劑，作用時間相同。每缸為30 min，2缸總共為60 min。兩組組織分別進行石蠟包埋，4μm厚切片，烤片機烤片，溫度70℃，時間1h。再分別放入裝有環保透明劑和二甲苯試劑的全自動染色封片中，切片按常規程序進行脫蠟脫水、HE染色、脫水透明和封片。

結 果

1 脫水機組織處理時間比較 見表1。二甲苯組與環保透明劑組各個環節的組織脫水浸蠟時間無增減。環保透明劑組兩組梯度乙醇脫水時間無差別。

表1 兩組標本全自動組織脫水機處理程序比較

2 染色機各環節時間比較 見表2。二甲苯組與環保透明劑組的切片脫蠟時間一致，環保透明劑組的脫蠟時間較二甲苯組稍長，兩組梯度乙醇脫水時間無差別。

表2 兩組切片全自動染色封片機染色程序比較

3 組織處理效果比較 見表3。環保透明劑應用于組織透明效果與二甲苯基本一致，利于切片，染色鮮亮，對比度強，有效的減少了環境污染。

表3 環保透明劑與二甲苯病理組織處理效果的比較

討 論

在常規石蠟制片技術中，組織在固定后需要進行脫水透明和浸蠟等處理，石蠟切片必須經過脫蠟后才能進行相關的染色。一直以來在病理組織制片過程中，二甲苯是首選的脫蠟劑［3］。環保透明劑是一種新型的生物組織透明劑，它是一種無色、不揮發的有機溶劑，天然水果味，即使加熱也不會產生對人體不利的有害氣體，符合國家 GB18583－2001環保標準。由于乙醇和石蠟不能相混合。因此組織在乙醇脫水后必須要經過一種過渡的溶劑，才能進入石蠟浸蠟。環保透明劑具有既能和乙醇又能和石蠟及樹膠互溶的物理特點，對組織也有透明作用，因此在脫水劑乙醇和石蠟之間能起到一種“橋梁作用”。環保透明劑和二甲苯對組織都有收縮作用，但比二甲苯少，能很好地保存組織細胞結構，其作用效果與二甲苯相當。在快速石蠟制片的操作過程中，將環保透明劑加熱至45℃，低于浸蠟的溫度，相應減少作用時間，也不會引起組織收縮和破壞組織抗原［4－8］。使用該試劑制作的組織蠟塊軟硬適中，易于切出2～3μm完整切片。切片經環保透明劑脫蠟后進行HE染色、特殊染色和免疫組化染色，組織細胞結構完好，核漿染色分明：能顯示出相應的組織細胞結構和其他組織成分如膠原纖維、網狀纖維、基底膜和中性黏液物質等；也能很好地將組織中的相應抗原特異地顯示出來，定位準確，背景干凈。

本研究表明，采用環保透明劑可以代替二甲苯用于病理制片技術，制作出的組織染片不會對組織細胞結構和組織細胞內其他成分以及組織抗原造成破壞，符合臨床病理診斷和研究所要求的優質染色片的要求，同時也符合實驗室環保的要求。缺點是價格較高，且對于長期保存的蠟塊切片，其蠟塊粘固度，有無皸裂及切片長期封固效果，有無褪色現象還有待觀察。因此，該試劑能否廣泛應用于病理組織制片中，達到良好而持久的應用效果，尚需進一步研究。

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［6］周 導，顧 萍，嚴軍寧，等．硬脂酸石蠟混合液替代二甲苯透明劑制片的探討［J］．診斷病理學雜志，2006，13（1）：75．

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