血必凈注射液預防大鼠術后腸黏連的實驗研究

邢 軍， 程 靜， 馬玉燕， 司民一

(萊蕪市人民醫院，山東萊蕪271100)

嚴重術后腸黏連可引起慢性腹痛、腸道功能運動障礙或反復間斷發作性的機械性腸梗阻，女性可引起不孕癥。有研究表明一些活血益氣的中藥對其有一定的預防治療作用［1］，血必凈注射液主要成分提取自紅花、赤芍、丹參、當歸之中，包括紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸鈉、芍藥苷、原兒茶酚等，現臨床上主要用于因感染誘發的全身炎癥反應綜合癥和因感染、創傷、燒傷等引起的多器官功能障礙綜合征［2-3］。本實驗研究血必凈預防術后腸黏連的作用，并通過測定實驗動物腹腔灌洗液IL-6、TNF-α水平和其盲腸組織中羥脯氨酸含有量探討其預防腸黏連的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料 Mettler AE240電子分析天平 (瑞士梅特勒公司);UV-2401PC型紫外-可見分光光度儀 (日本島津公司);RM2135型組織切片機 (德國leica公司)。血必凈注射液 (天津紅日制藥有限公司，批號09101501);羥脯氨酸試劑盒 (南京建成生物工程研究所);IL-6和TNF-α試劑盒 (美國Sigma公司)。SD大鼠50只，雌雄兼半，體質量 (220±20)g，由山東大學動物實驗中心提供。

1.2 方法 參照文獻［4］，取SD大鼠50只，用3%戊巴比妥鈉 (30 mg/kg)經耳靜脈注射麻醉，用安爾碘進行皮膚消毒，用手術刀剖開下腹部正中約2 cm，提出盲腸干燥2 min，再用手術刀片輕刮整條盲腸漿膜面及對應的腹壁雙側各8遍，放回盲腸，關閉腹腔。建立大鼠腸黏連模型。

將以上模型大鼠隨機均分為5組，即模型組、地塞米松組及血必凈高、中、低劑量組。術后分別尾靜脈注射氯化鈉注射液 (1 mL/kg)、地塞米松注射液 (5 mg/kg)、血必凈高劑量 (5 mg/kg)、血必凈中劑量 (2.5 mg/kg)、血必凈低劑量 (1.25 mg/kg)，連續給藥7 d。于術后第7天測定腹腔灌洗液IL-6和TNF-α水平。第8天開腹檢查，評定黏連程度，取盲腸組織測羥脯氨酸含有量。

1.3 統計學處理 各實驗組黏連結果分別和模型組比較進行Ridit分析;IL-6、TNF-α水平和羥脯氨酸含有量以±s表示，各實驗組數據和模型組比較進行t檢驗。

2 指標與結果

2.1 黏連分級標準 參考Nair［5］分級標準，將黏連程度分為5級，分級標準見表1。

表1 黏連分級標準

結果顯示血必凈注射液高劑量 (P＜0.01)、中劑量(P＜0.05)、低劑量 (P＜0.05)黏連程度均低于模型組，說明高、中、低劑量血必凈注射液均可預防大鼠術后腸黏連。見表2。

表2 大鼠腹腔黏連分級情況

2.2 腹腔灌洗液IL-6和TNF-α水平檢測和盲腸組織羥脯氨酸測定 按 Nagelschmidt等［6］報道，將3 mL PBS(磷酸鹽緩沖液，0.15 mol/L)注入大鼠腹腔，輕微震蕩腹腔2min后用注射器自腹腔將灌洗液抽出，采用夾心ELISA檢測方法測定IL-6和TNF-α水平。

精密稱取50mg盲腸組織，放入試管中，按試劑盒說明書處理后在550 nm波長處測定各管吸光度，計算組織中羥脯氨酸含有量。

結果與模型組相比，血必凈高、中劑量組腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和血必凈高、中、低劑量組盲腸組織羥脯氨酸含有量明顯降低 (P＜0.05)，見表3。

表3 大鼠腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和盲腸組織羥脯氨酸含有量(±s，n=10)

表3 大鼠腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和盲腸組織羥脯氨酸含有量(±s，n=10)

注:與模型對照組比較，#P＜0.05。

組別 動物數/只 羥脯氨酸/(mg·g－1) IL-6/(ng·mL－1) TNF-α/(pg·L－1)10 2.61±0.20 4.24±0.64 138.67±13.52地塞米松組(5 mg/kg) 10 1.88±0.16# 2.81±0.52# 105.46±13.55#血必凈高劑量組(5 mg/kg) 10 1.71±0.12# 2.74±0.81# 102.55±10.18#血必凈中劑量組(2.5 mg/kg) 10 1.97±0.14# 3.31±0.82# 124.75±13.67#血必凈低劑量組(1.25 mg/kg) 10 2.25±0.17#模型組(生理鹽水1 mL/kg)4.17±0.95 132.52±12.34

3 討論

術后腸黏連的發生機制目前還不十分明確，現在認為主要是由于漿膜在手術時受到損傷或異物刺激，引起機體局部缺血或炎癥反應，導致腹膜、腸管、網膜等損傷部位組織液滲出。滲出的組織液中纖維蛋白和纖維蛋白原沉積，便會形成黏連。在這個過程中由浸潤的炎性細胞釋放細胞因子的失衡極其瀑布式效應，是導致腹膜黏連形成的觸發機制［7］。研究發現，術后早期羥脯氨酸含有量能反應黏連程度［8］;腹腔液和全身TNF-α的水平高與術后黏連程度顯著相關，IL-6可促進黏連形成，在刺激術后腸黏連的形成中有較大作用［9］;楊小進等通過實驗發現創傷黏連型大鼠1周內有明顯的炎癥反應，模型大鼠血清中TNF-α表達水平有明顯提高［10］;陳彈等發現TNF-α對內皮細胞株分泌的纖溶酶原激活抑制因子有顯著升高作用，說明降低TNF-α的表達水平可提高纖溶系統的活性［11］。

腸黏連的預防可通過改善局部血運、抑制炎性滲出、促進纖維蛋白的溶解與吸收、抑制成纖維細胞生長及促進胃腸蠕動等諸多環節而實現。血必凈注射液是在血府逐瘀湯基礎上研制而成的靜脈制劑，其藥理作用主要為:調節炎癥反應、抗氧化應激、改善凝血功能、調節免疫功能、內皮細胞保護及改善循環等。作用機理與影響細胞因子IL-1、IL-6、TNF-α水平，提高超氧化物歧化酶活性和降低丙二醛含有量，改善凝血反應和纖溶抑制的形成等有關［12］。本實驗中血必凈注射液對術后腸黏連大鼠腹腔灌洗液TNF-α和IL-6水平的影響與文獻中對血清TNF-α和IL-6水平影響一致。本實驗結果提示血必凈注射液對術后黏腸連的預防作用可能與降低術后大鼠腹腔組織中TNF-α和IL-6水平有關。

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