大蒜硝黃膏穴位貼敷治療大鼠不完全性腸梗阻的藥效學研究

馬曉莉， 王 淼， 韓 波， 曹松云， 張新穎， 曲 萌

(河北大學中醫學院，河北保定071000)

腸梗阻是外科常見的急腹癥之一，不僅可以引起消化道局部損傷、全身性生理紊亂，嚴重的可導致毒血癥、休克、死亡。中西醫結合治療一般是在西醫保守治療的基礎上，加用中藥內治或針灸等方法，取得良好的療效，作用機制的研究已比較深入［1-3］。大蒜硝黃膏方源自《中醫天灸療法》，藥物組成為大蒜、芒硝、生大黃，用陳醋適量制成膏，敷于神厥穴治療腸梗阻［4］。穴位貼敷治療腸梗阻的優勢在于可以早期介入，減少并發癥的發生，縮短病程。本實驗通過觀察大蒜硝黃膏穴位貼敷對不完全性腸梗阻模型大鼠的影響，探討其作用機理，為臨床應用提供依據。

1 材料

1.1 動物 SD大鼠48只，雌性，體質量(230±50)g，清潔級，購自河北省實驗動物中心，合格證編號:1103189。

1.2 藥物與試劑

1.2.1 大蒜硝黃膏的制備 先將大黃30 g研為細粉，再與大蒜120 g、芒硝30 g共搗融，調醋60 mL為糊，分別按7.5 g、5 g、2.5 g制成直徑5.5 cm、3.5 cm、2.5 cm的高、中、低劑量的圓形藥餅，作為備用 (膏-1)。另將大黃60 g研為細粉，加醋適量調成大黃糊，再分別按7.5 g、5 g、2.5 g制成直徑5.5 cm、3.5 cm、2.5 cm的高、中、低劑量的圓形藥餅，作為備用 (膏-2)。

1.2.2 主要試劑 NO檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號:20110106;SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號:20110107;MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號:20110106。

1.3 儀器 Stat Fax-2100酶標儀，美國Awareness公司;KD-2258輪轉式切片機，浙江省金華市科迪儀器設備有限公司;BS224S電子天平，賽多利斯科學儀器 (北京)有限公司;SHA-BA雙功能水浴恒溫振蕩器，金壇市杰瑞爾電器有限公司;Polytron PT 2100標準臺式勻漿機，瑞士Kine-matica公司;MVIS-2015全自動血液流變分析儀，重慶天海醫療商務有限公司。

2 方法

2.1 不完全性腸梗阻模型制備 依據參考文獻［5］調整施行。將大鼠禁食12 h、禁水4 h，用10%水合氯醛 (350 mg/kg)麻醉，備皮后碘伏消毒，于左側腹壁開腹，暴露回盲部，用中心靜脈導管與回腸腸管并排放置，在距回盲部2 cm處用圓針帶絲線穿透腸系膜繞過回腸腸管和中心靜脈導管一并結扎，最后抽出中心靜脈導管，造成不完全性腸梗阻，然后將腹壁逐層縫合，術后常規喂養。

2.2 分組與給藥 將大鼠隨機分為正常對照組、手術模型組、陽性對照組、大蒜硝黃膏高、中、低劑量組，每組8只，喂飼普通飼料。由于目前臨床上沒有療效確切的治療腸梗阻的外用中成藥，因此選取大承氣湯口服作為陽性對照。除正常對照組外各組大鼠均于手術造模蘇醒后給藥。陽性對照組灌胃大承氣湯10 mL/kg，(每1 mL含生藥1 g)，連續喂3 d。大蒜硝黃膏高、中、低劑量組分別將膏-1貼敷于大鼠的神闕穴，膠布固定，2 h后去掉膏-1，用溫開水洗凈局部皮膚，然后再將膏-2敷于神闕穴，膠布固定，貼敷6 h，連續貼敷3 d。正常組、手術模型組僅貼敷膠布，給予相同刺激。大鼠神闕穴依據《實驗針灸學》［6］中大鼠針灸穴位分布圖及定位方法進行定位。

2.3 標本處理 造模72 h后下腔靜脈取血，一部分用于血液流變學檢測，一部分置于含3.8%的枸櫞酸鈉真空管中3000 r/min離心10 min，取血漿于－70℃冷存，用于NO、MDA和SOD的測定。取血后立即處死動物，即刻剪取距回盲部2 cm處的小腸組織，以生理鹽水輕柔沖洗腸腔內容物后，無菌濾紙吸干水分，一部分浸泡于10%甲醛中固定24～48h后用于常規HE染色，另一部分置于－70℃冰箱保存，用于NO、SOD、MDA的測定。

2.4 觀察指標

2.4.1 一般情況 觀察造模前后大鼠的一般狀況和體質量的變化。

2.4.2 小腸組織形態學觀察 將10%甲醛固定24～48 h后的小腸組織常規石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察其形態學改變。并根據Haglund等［7］方法評價腸黏膜損傷程度。標準如下:0分，絨毛和腺體正常;1分，部分絨毛頂部上皮輕度受損;2分，上皮下腺體輕度受損;3分，上皮下間隙擴大，毛細血管充血;4分，上皮與固有層中度分離，腺體受損;5分，部分絨毛頂部脫落;6分，絨毛明顯脫落;7分，固有層絨毛脫落;8分，固有層開始消化分解;9分，出血、潰瘍生成。

2.4.3 血液流變學檢測 使用MVIS-2015全自動血液流變分析儀檢測。

2.4.4 血漿與小腸組織NO、MDA、SOD的測定 采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶 (SOD);硝酸還原酶法測定NO;硫代巴比妥酸法 (TBA)測定MDA，具體操作過程詳見說明書。

2.5 統計學處理 應用SPSS16.0軟件進行處理，小腸黏膜損傷評分采用秩變換非參數檢驗分析，均數間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 對不完全性腸梗阻大鼠一般情況的影響 模型組大鼠神態倦怠，反應遲鈍，毛色黯淡無光，被毛雜亂，體質量明顯下降;與模型組相比，大蒜硝黃膏組和陽性對照組大鼠一般狀態良好，體質量下降程度明顯降低 (P＜0.01)，其中以大蒜硝黃膏高劑量組體質量下降最少;大蒜硝黃膏高、中、低劑量組與陽性對照組相比，無顯著差異 (P＞0.05);大蒜硝黃膏高、中、低劑量組組間無顯著差異(P＞0.05)。表明大蒜硝黃膏穴位貼敷能改善梗阻大鼠的一般狀態。結果見表1。

表1 對不完全性腸梗阻大鼠實驗前后體質量差值的比較(±s)

表1 對不完全性腸梗阻大鼠實驗前后體質量差值的比較(±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，##P ＜0.01。

/g正常對照組 8 239.46±7.18 244.46±5.62 5.00±3.31組 別 動物數/只 實驗前體質量/g 實驗后體質量/g 體質量差值##手術模型組 8 249.01±14.19 212.58±13.23 －36.74±4.50＊＊陽性對照組 8 253.65±13.39 231.88±12.87 －21.78±2.58＊＊##大蒜硝黃膏高劑量組 8 241.02±12.18 220.25±14.18 －20.78±3.75＊＊##大蒜硝黃膏中劑量組 8 240.24±7.47 218.00±7.90 －22.24±2.66＊＊##大蒜硝黃膏低劑量組 8 242.16±8.77 218.71±10.61 －23.45±4.42＊＊##

3.2 對不完全性腸梗阻大鼠小腸組織形態學的影響 光鏡下，HE染色發現模型組小腸黏膜上皮細胞腫脹，細胞界限不清，黏膜下層、肌層及漿膜層明顯瘀血，上皮細胞壞死、脫落，絨毛水腫、破損、脫落明顯，固有層血管充血;大蒜硝黃膏組和陽性對照組大鼠小腸上皮細胞充血、水腫減輕，壞死減少，炎細胞浸潤明顯減少，小腸絨毛破損程度減輕，見圖1。模型組小腸黏膜損傷評分增加，大蒜硝黃膏高、中、低劑量組小腸黏膜損傷評分顯著低于模型組，結果見表2。

圖1 對不完全性腸梗阻大鼠小腸組織形態學的影響 (×100)

表2 對不完全性腸梗阻大鼠小腸黏膜損傷評分的比較

3.3 對不完全性腸梗阻大鼠血液流變學的影響 模型組大鼠的全血低切、高切黏度、血漿黏度和紅細胞聚集指數明顯高于正常組 (P＜0.01);與模型組相比，大蒜硝黃膏高、中、低劑量組和陽性對照組大鼠全血低切、高切黏度、血漿黏度和紅細胞聚集指數均有顯著降低，其中高劑量組降低最多。大蒜硝黃膏高、中、低劑量組與陽性對照組相比，無顯著差異 (P＞0.05)，大蒜硝黃膏高、中、低劑量組組間無顯著差異 (P＞0.05)。提示大蒜硝黃膏可以改善梗阻時血液的高黏滯狀態，結果見表3。

表3 對不完全性腸梗阻大鼠血流變學指標的比較 (±s)

表3 對不完全性腸梗阻大鼠血流變學指標的比較 (±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 動物數/只 全血黏度低切3s/(mPa·s)全血黏度高切200s/(mPa·s)血漿黏度/(mPa·s)紅細胞聚集指數(Arbc)正常對照組 8 11.19±0.86## 5.39±0.55## 1.18±0.06## 6.36±0.49##手術模型組 8 14.22±0.35＊＊ 7.30±0.46＊＊ 1.80±0.13＊＊ 8.95±0.78＊＊陽性對照組 8 13.55 ±0.38＊＊# 6.61 ±0.18＊＊## 1.63 ±0.08＊＊## 8.00 ±0.67＊＊##大蒜硝黃膏高劑量組 8 13.52 ±0.68＊＊# 6.60 ±0.40＊＊## 1.62 ±0.07＊＊## 8.05 ±0.53＊＊##大蒜硝黃膏中劑量組 8 13.56 ±0.54＊＊# 6.64 ±0.28＊＊## 1.64 ±0.08＊＊## 8.19 ±0.67＊＊#大蒜硝黃膏低劑量組 8 13.79±0.54＊＊ 6.66±0.29＊＊## 1.70±0.05＊＊# 8.37±0.60＊＊

3.4 對不完全性腸梗阻大鼠血漿及小腸組織NO、MDA、SOD水平的影響 模型組血漿和小腸組織NO、MDA水平明顯增高，SOD水平明顯降低 (P＜0.01);與模型組相比，大蒜硝黃膏組和陽性對照組血漿和小腸組織NO、MDA水平增高的程度降低，SOD水平有不同程度的升高 (P＜0.05)，其中以大蒜硝黃膏高劑量組效果最好。大蒜硝黃膏高、中、低劑量組與陽性對照組相比，無顯著差異 (P＞0.05)，大蒜硝黃膏高、中、低劑量組組間無顯著差異(P＞0.05)。表明大蒜硝黃膏可以明顯降低模型大鼠血漿和小腸組織的NO、MDA水平、升高SOD水平，具有清除氧自由基、拮抗脂質過氧化反應的作用。結果見表4、5。

表4 對不完全性腸梗阻大鼠血漿NO、MDA、SOD的影響 (±s)

表4 對不完全性腸梗阻大鼠血漿NO、MDA、SOD的影響 (±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 動物數/只 NO/(μnmoL·L－1) MDA/(nmoL·mL－1) SOD/(U·mL－1)正常對照組 8 30.22±0.83## 4.56±0.42## 213.36±8.49##手術模型組 8 45.09±1.33＊＊ 8.75±1.02＊＊ 158.30±4.96＊＊陽性對照組 8 39.12 ±1.35＊＊## 6.80 ±0.63＊＊## 170.49 ±8.72＊＊##大蒜硝黃膏高劑量組 8 38.99 ±1.48＊＊## 6.44 ±0.73＊＊## 172.10 ±7.11＊＊##大蒜硝黃膏中劑量組 8 39.86 ±1.30＊＊## 7.06 ±1.26＊＊## 169.23 ±6.97＊＊##大蒜硝黃膏低劑量組 8 40.42 ±2.11＊＊## 7.31 ±1.01＊＊## 167.03 ±5.34＊＊#

表5 對不完全性腸梗阻大鼠小腸組織NO、MDA、SOD的影響 (±s)

表5 對不完全性腸梗阻大鼠小腸組織NO、MDA、SOD的影響 (±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，##P＜0.01。

組 別 動物數/只 NO/(μnmoL·gprot－1) MDA/(nmoL·mgprot－1) SOD/(U·mgprot－1)正常對照組 8 19.88±0.85## 3.69±1.02## 83.62±8.30##手術模型組 8 28.99±0.83＊＊ 7.59±0.65＊＊ 49.52±5.15＊＊陽性對照組 8 24.28 ±0.97＊＊## 5.99 ±0.96＊＊## 66.35 ±7.91＊＊##大蒜硝黃膏高劑量組 8 23.98 ±1.56＊＊## 5.88 ±0.83＊＊## 68.59 ±9.02＊＊##大蒜硝黃膏中劑量組 8 24.95 ±1.20＊＊## 6.02 ±0.69＊＊## 65.42 ±8.72＊＊##大蒜硝黃膏低劑量組 8 25.03 ±1.19＊＊## 6.19 ±1.06＊＊## 62.35 ±8.19＊＊##

4 討論

腸梗阻按梗阻程度不同分完全性腸梗阻和不完全性腸梗阻［8-9］，不完全性腸梗阻亦能演變為完全性腸梗阻，因此臨床上應早診斷、早治療、避免拖延時間加重病情［10］。腸梗阻發生后，一系列理化因素作用于腸道組織，導致腸管缺血、水腫、微循環障礙，血液黏度增加，進一步引起腸道的運動、吸收及分泌等功能代謝異常，導致大量相關介質如NO大量釋放，產生氧自由基等有害物質，氧自由基的分解產物之一MDA又可引起蛋白質變性和交聯，使DNA損傷、酶及激素失活，隨著氧自由基的不斷增多，機體內清除自由基的酶類如超氧化物歧化酶 (SOD)等活性不足或抗氧化劑不足時，則引起周圍組織的嚴重破壞性損傷，使炎癥和組織損傷之間形成惡性循環［11-12］。因此改善腸道微循環、降低NO、清除氧自由基，保護小腸黏膜組織是治療腸梗阻的重要機制。

有文獻報道，大蒜中所含大蒜素具有擴血管、抗缺血、抗血小板聚集和清除氧自由基的作用，能提高機體免疫力［13］;外用芒硝可使胃竇、結腸近端肌間神經叢SP的分布明顯增加，從而增強胃腸壁內神經元的興奮性，促進胃腸活動［14］;大黃能促進胃腸平滑肌運動，不僅能降低血液黏度和紅細胞聚集，并且具有抗超氧陰離子、清除氧自由基的作用［15-16］，另外對MDA也有明顯抑制作用，且抑制作用有明顯的量效關系［17］。

探討大蒜硝黃膏穴位貼敷治療不完全性腸梗阻的作用機制，選取上述腸梗阻病理生理過程中比較有代表意義的血流變學和NO、MDA、SOD等作為檢測指標。實驗結果表明，大蒜硝黃膏穴位貼敷使模型大鼠血液黏滯程度、血漿和小腸組織的NO、MDA水平明顯降低，SOD水平明顯增高，使小腸組織損傷明顯減輕，保護腸黏膜結構的完整性，具有腸屏障保護功能。

實驗中大蒜硝黃膏貼敷方法按原文獻使用方法，即將方中膏-1貼敷2 h后，換膏-2繼續貼敷6 h。膏-1中的大蒜具有皮膚刺激性，不宜貼敷時間過長，以免損傷皮膚。

穴位貼敷法治療腸梗阻的優勢在于簡單易行，可以早期介入，增強療效，減少并發癥的發生，縮短病程，值得臨床推廣應用。

［1］周 萍，譚海彥.中西醫結合治療粘連性腸梗阻22例［J］.中國中西醫結合雜志，2007，27(3):274-275.

［2］張 宇，劉曉虹，蔣敦厚，等.復方大承氣湯治療粘連性腸梗阻54例療效觀察［J］.新中醫，2007，39(1):13-14.

［3］葛洪霞，許翠萍.大承氣湯治療粘連性腸梗阻的研究進展［J］.現代中西醫結合雜志，2010，19(4):505-506.

［4］譚支紹.中醫天灸療法［M］.南寧:廣西科學技術出版社，1991:145-147.

［5］閆 瑾，崔志清.大承氣顆粒對大鼠不完全性腸梗阻小腸上皮細胞保護作用的研究［J］.中藥藥理與臨床，2010，26(4):1-4.

［6］李忠仁.實驗針灸學［M］.北京:中國中醫藥出版社，2003:327-329.

［7］Haglund U，Osterberg J.Local consequences of reperfusion in the gut［M］ //Pierce A，Robert T M:Ischemia-Reperfusion Injury［M］.Oxford UK:Blackwell Science，1999:65-69.

［8］盧 毅.特殊原因所致腸梗阻誤診10例分析［J］.中國誤診學雜志，2004，4(8):1310.

［9］張 勇.120例腸梗阻治療分析［J］.中國實用醫藥，2009，4(5):104.

［10］徐黎明.中西醫結合治療術后不完全性腸梗阻的療效觀察［J］.中國中醫藥咨訊，2011，3(9):256.

［11］王本堂.中西醫結合治療腸梗阻122例體會［J］.基層醫學論壇，2009，13(4):155.

［12］寇壬花.活血化瘀中藥對通里攻下中藥治療大鼠不完全性腸梗阻增效作用的研究［D］.天津:天津醫科大學，2004:43.

［13］晏 莉，黃起壬.大蒜素藥理作用和作用機理的探討［J］.實用臨床醫學，2008，9(1):134-136.

［14］劉少杰，楊小紅，劉建偉.外用芒硝促進大鼠腹部手術后胃腸運動的實驗研究［J］.廣東醫學，2006，27(7):958-959.

［15］陳季武，胡天喜.大黃清除活性氧的作用［J］.中國藥學雜志，1996，31(8):461-463.

［16］張喜平，李宗芳.大黃素的藥理作用研究概況［J］.中國藥理學通報，2003，19(8):851-854.

［17］瞿佐發.大黃的藥理作用及臨床應用［J］.陜西中醫，2002，23(6):552-554.