開郁寧片溶出度研究及方法學考察

黃志軍， 朱立彬， 翟 莉， 李崇明

(湖北省暨武漢市中藥現代化工程技術研究中心，湖北武漢430052)

開郁寧片是中藥5類制劑，處方由貫葉金絲桃總黃酮［1］加適宜輔料制成。本品為抗抑郁藥，用于治療輕、中度抑郁癥。目前臨床試用的抗抑郁癥藥主要為化學藥，這些化學藥雖然有較明顯的療效，但往往有明顯的副作用，一般不能長期服用，而中藥目前尚無上市的抗抑郁藥。貫葉金絲桃在歐洲作為民間草藥用于治療創傷和抗抑郁藥物已有較長歷史［2］，Linde等［3］報道，治療輕度和中度抑郁癥患者時，含有金絲桃素類成分的貫葉金絲桃提取物效果明顯優于安慰劑，與標準抗抑郁藥物 (三環類)相比，療效相同而副作用小。溶出度測定是利用體外試驗方法對藥物在體內生物利用度進行研究和評價的有效的評價方法，是今后口服固體制劑的研究方向［12］，文獻對中藥溶出度的報道較少，本實驗以總黃酮為指標，對開郁寧片進行了溶出度試驗的研究。

1 儀器與試劑

ZRS-8G智能溶出試驗儀 (天津市天大天發科技有限公司);Agilent 8453紫外-可見分光光度計;蘆丁對照品 (供定量測定用，批號:10080-200306，購自中國藥品生物制品檢定所);開郁寧片 (武漢健民藥業集團股份有限公司提供);試劑均為分析純。

2 溶出度檢查中總黃酮的測定方法［4-5］

2.1 對照品溶液的制備 取蘆丁對照品25 mg，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻。精密吸取20 mL，置50 mL棕色量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得 (每1 mL含蘆丁0.20 mg)。

2.2 標準曲線的制備 精密量取上述對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置25 mL量瓶中，各加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，放置6 min，加1 mol/L氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA)，在500 nm波長處測定吸收值，以吸光度為縱坐標，質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

2.3 測定法 取本品，照溶出度測定法(《中國藥典》2010年版二部附錄XC溶出度測定法第二法)，以2%聚山梨酯80溶液600 mL為溶出介質，轉速為100 r/min，依法操作。經60 min，取溶液15 mL，濾過，精密量取續濾液5 mL，置25 mL量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至6.0 mL”起，依法測定吸光度，得吸光度A1，再精密量取續濾液5 mL，以1 mL水代替10%硝酸鋁，按上述方法制備供試品溶液，依法測定吸光度，得吸光度A2。按下式計算供試品溶液得吸光度A，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的質量濃度，計算每片的溶出量，限度為含有量的70%，應符合規定。

供試品溶液的吸光度A=A1－A2

3 溶出度的測定方法及其方法學研究

3.1 溶出度測定方法 中藥制劑大多采用漿法［6-7］，經試驗，本品如采用轉籃法，藥片會黏在籃上，對溶出有較大影響，故本品的溶出度測定亦采用槳法。具體測定方法見2.3項。

3.2 溶出介質的選擇 參照2010年版《中國藥典》二部，分別選擇水、9‰鹽酸溶液、磷酸鹽緩沖液 (pH6.8)［8］346、5%乙醇、10%乙醇、磷酸鹽緩沖液 (pH7.8～8.0)0.2%十二烷基硫酸鈉溶液作為溶出介質［8］259，343，皆不能得到滿意的溶出度結果。經咨詢有關專家，采用聚山梨酯80溶液作為考察溶劑。

對0.5%聚山梨酯80溶液、1.0%聚山梨酯80溶液、1.5%聚山梨酯80溶液、2%聚山梨酯80溶液、2.5%聚山梨酯80溶液分別進行了考察，通過考察，選擇2%聚山梨酯80溶液作為溶出介質。

3.3 溶出介質對樣品顯色后的吸收波長的影響 取本品，以2%聚山梨酯80溶液600 mL為溶出介質，制備供試品溶液并顯色 (溶液①);然后以水為溶劑 (溶液②)，采用超聲法制備供試品溶液并顯色，比較這兩種溶液在可見光區的吸收曲線，見圖1、圖2，由曲線可知以2%聚山梨酯80溶液作為溶出介質對本品吸收無干擾。

圖1 溶液①可見光區吸收曲線

圖2 溶液②可見光區吸收曲線

3.4 轉速的考察 取本品，以2%聚山梨酯80溶液600 mL為溶出介質，分別以 50 r/min，100 r/min，150 r/min進行試驗，經60 min時取樣，對同一批樣品 (批號:20070601)進行測定。結果表明樣品在100 r/min的溶出良好。

3.5 線性關系試驗 按照2.1項制備對照品溶液(0.2013 mg/mL)，精密量取上述對照品溶液1、2、3、4、5、6mL，分別置25 mL量瓶中，各加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加1 mol/L氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA)，在500 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，質量濃度為橫坐標，得回歸方程Y=12.835X－0.0082，r=0.9998，說明以本法測定總黃酮含有量，總黃酮質量濃度在8.052～48.312 μg/mL之內，吸光度與質量濃度線性關系良好。

3.6 溶出曲線的測定 取本品 (批號:20070601)，以2%聚山梨酯80溶液為溶出介質，轉速100 r/min，按上述溶出度檢查方法試驗，分別在 15、30、45、60、75、90 min時取溶液適量 (每次取樣后立即補足溶出介質)，測定總黃酮的含有量，以各時間點的溶出量對時間繪制曲線，溶出曲線見圖3。根據結果綜合分析，本品的取樣時間為60 min時較為合適。

圖3 溶出曲線

3.7 專屬性試驗 取開郁寧片陰性對照品，照上述方法測定，計算每片的溶出量，結果吸收值幾乎為零，說明樣品中其它成分和溶出介質不影響本品的溶出度測定。

3.8 回收率試驗 取開郁寧片陰性對照品6片，照溶出度測定的方法操作，所得陰性對照溶液待用。另取蘆丁對照品適量，精密稱定，置50 mL量瓶中，加陰性對照溶液適量，超聲處理使溶解，放冷，加陰性對照溶液至刻度，搖勻。分別精密量取3、3.5、4 mL，置25 mL量瓶中，依法測定含有量，計算回收率。每個質量濃度平行試驗3次，結果見表1，平均回收率為97.12%，RSD為1.33%。由結果可見，采用本方法進行溶出度檢查，回收率良好。

表1 回收率試驗結果

3.9 精密度試驗 照溶出度檢查方法制備溶出溶液，對同一溶出杯內溶出溶液制備6份供試品溶液，依法測定，計算溶出量，由試驗結果 (見表2)可見，本試驗精密度較好。

表2 精密度試驗結果

3.10 溶液穩定性試驗 取溶出度測定項下的對照品溶液與供試品溶液于室溫下放置，分別于 0、10、20、30、40 min時測定其吸光度，由試驗結果可見，本品溶出溶液顯色后在室溫下避光放置40 min，溶液基本穩定。

4 樣品溶出度檢查及溶出度限度的制定

用上述所建立的溶出度測定方法對3批樣品進行測定，結果均符合規定。結果見表3。

表3 樣品溶出度測定結果

根據中試3批樣品溶出度測定結果，結合中藥的實際情況，暫定本品總黃酮的溶出度限度為70%。

5 討論

5.1 中藥溶出度的研究尚處于摸索階段，主要由于中藥成分復雜，有效成分不明確，有效成分和無效成分之間互相干擾，使藥物的溶出不規律。溶出介質的選擇必須以接近消化道內體液環境為原則，消化道內體液環境通常采用以下幾種溶出介質來涵蓋［9］:(1)pH值1～3的鹽酸溶液;(2)不同濃度的醋酸鹽或磷酸鹽緩沖溶液;(3)水。而中藥制劑 (有效成分為堿性的除外)，很難在接近消化道內體液的環境中得到合理的溶出量，這時可以考慮加入一定量的表面活性劑來改善溶出，主要依據是人體內胃腸道表面存在一定濃度的天然表面活性劑。

5.2 口服固體制劑的核心就是生物利用度，評價生物利用度最直接的手段是直接抽取人體血樣，測定血藥濃度，實際生活研究中很難實現，而溶出度試驗已成為證明藥物體內釋放特性的一種簡單、廉價而不失嚴謹的實驗室檢測方法。中藥成分復雜，與西藥純度較高的單體成分不同，溶出機制復雜，其他成分對主要有效成分的溶出有較大的影響。而溶出度是反映藥品質量的關鍵指標，隨著我國醫藥事業的發展，溶出度的研究必定會越來越深入，甚至有專家［10］提出“多條溶出曲線就是一個固體制劑的指紋圖譜”!由此觀之，中藥未來的溶出度研究“任重而道遠”!另外本文成文時還參考了相關文獻 ［11-14］。

［1］韓妮娜.5類中藥新藥開郁寧片的制備工藝及質量標準研究［D］.武漢:湖北中醫學院，2007.

［2］施正福，范 焱.貫葉金絲桃的藥理作用研究進展［J］.中國現代應用藥學雜志，2000，17(3):190.

［3］Linde K，Ramirez G，Mulrow D，et al.St John's Wort for depression-an overview and meta-analysis of randomized clinical trials［J］.BMJ，1996，313(7052):253.

［4］籍學偉，郝美玲.UV法測定懸鉤子木中總黃酮含量［C］ //2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集.北京，2010:7663-7666.

［5］曾 彬，易進海.左金分散片的溶出度測定［J］.華西藥學雜志，2006，21(2):190-191.

［6］衛瑩芳，閆 婕，王化東，等.赤小豆總黃酮UV-VIS分析方法建立及全國不同產地藥材含量測定［C］ //中華中醫藥學會第十屆中藥鑒定學術會議暨WHO中藥材鑒定方法和技術研討會論文集.北京，2010:378-384.

［7］王曉輝.藥物溶出度的測定方法及其研究進展［J］.天津藥學，2006，18(2):68-71.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版二部［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010.

［9］韋廣輝.常用中藥固體制劑溶出度的研究概況［J］.中國現代藥物應用，2011，5(3):228-229.

［10］謝沐風.如何科學、客觀的評價口服固體制劑的內在品質—縱論我國固體制劑仿制藥質量［J］.藥品評價，2010，7(14):19-23.

［11］賈存勤.藥用大孔吸附樹脂及其在中藥分離純化方面的應用［D］.蘭州:甘肅農業大學，2003.

［12］秦文杰.短柱肖菝葜化學成分及質量控制研究［D］.北京:北京中醫藥大學，2007.

［13］劉承萍.野菊花成分穩定性與藥材質量研究［D］.廣州:廣州中醫藥大學，2011.

［14］陳亞強，楊愛淑，李文春.高效液相法測定刺五加腦靈液中五味子醇甲的含量［J］.民營科技，2011，(3):98-100.