市售不同批次西洛他唑片藥物代謝動力學參數比較

汪華蓉，付珊珊，何海霞

(1.重慶三峽中心醫院藥學部，重慶 404000; 2.重慶醫科大學附屬第一醫院藥學部，重慶 400016)

西洛他唑是臨床上用于治療穩定性、間歇性跛行的藥物[1]，療效肯定，近年來仿制廠家較多。鑒于在重慶醫科大學附屬第一醫院藥理實驗室完成的西洛他唑生物等效性試驗研究中，均以中國大冢制藥有限公司生產的西洛他唑片為參比制劑，故從動力學角度對其不同批次產品的血藥濃度及動力學參數進行了考察和比較，現報道如下。

1 儀器與試藥

日本島津高效液相色譜儀，LC－10AT泵系統，SPD－10A型可調波長紫外檢測器和C－R7Ae plus積分儀。試驗藥品為西洛他唑片(商品名培達片，中國大冢制藥有限公司，簡稱CLTZT)，50 mg/片，批準文號為 H10960014，批號為 2F75P，3G93P，3J83P，050309P，050807P。西洛他唑標準對照品(簡稱CLTZ，山東誠創醫藥技術開發有限公司，批號為010604，純度為99.83%)，精密稱取21.8 mg，用適量甲醇溶解，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即為436 μg/mL的CLTZ標準貯備液，使用時用甲醇稀釋為43.6 μg/mL的工作質量濃度。內標物為安定(簡稱DZP，湖北制藥廠)，精密稱取DZP 40.5 mg，用適量甲醇溶解，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即為810 μg/mL的DZP標準貯備液，使用時用甲醇稀釋為8.1 μg/mL的工作質量濃度。

2 方法和結果

2.1 研究對象選擇

選擇 18～22名男性健康志愿者，漢族，平均年齡(21.8±1.37)歲，平均體重(60.2 ±5.92)kg，平均身高(169.5 ±4.90)cm。試驗前所有受試者經肝功能、腎功能、血壓、心電圖檢查均正常，于充分了解試驗內容后自愿簽署知情同意書。實施方案經醫院倫理委員會批準。

2.2 給藥方法及血樣采集

試驗前禁食12 h后，于次日8:00空腹吞服100 mg不同批次CLTZT(200 mL溫開水送服)，服藥當日統一進標準餐。受試期間禁止大量活動、吸煙、飲酒以及飲用含酒精、咖啡因類飲料，禁止服用一切非試驗藥物。于給藥前及給藥后 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，12.0，24.0，36.0，48.0 h，抽取前臂靜脈血 3.0 mL，分離血漿，低溫(－20℃)保存，待測。本品達峰時間(Tmax)為3～4 h左右，消除半衰期(t1/2)為 11～18 h左右[2－3]，根據 2005年版《中華人民共和國藥典》中藥物制劑生物利用度和生物等效性試驗指導原則的要求，在達峰時間前取樣3～4個點，在達峰時間后取樣8～10個點，取樣持續到5個半衰期以上。

2.3 血漿樣品檢測

2.3.1 色譜條件[2]

色譜柱:HYPERSIL C18柱(200 mm ×5.0 mm，5 μm)，預柱;流動相:磷酸鹽緩沖液(0.01 moL/L KH2PO4，用 H3PO4調 pH 至4.0)－乙腈(V/V，50 ∶50);流速:1.0 mL/min;紫外檢測波長:257 nm;柱溫:32 ℃;內標:DZP;固定進樣量:50 μL。

2.3.2 樣品處理[2]

取受試者血漿 0.5 mL，加內標 40 μL(8.1 g/mL)，加乙醚4 mL，旋搖1 min，靜置，取有機層置40℃水浴中用氮氣吹干，100 μL流動相復溶，進樣 50 μL。

2.3.3 方法學考察

線性關系考察:在空白血漿中分別添加CLTZ，使血藥濃度相當于 3.0840，1.5420，0.7710，0.3855，0.1928，0.0964，0.0482，0.0241 μg/mL，按血漿樣品的處理與測定方法進行處理和測定，以CLTZ峰面積/DZP峰面積比(Y)與CLTZ質量濃度(X)進行線性回歸，得標準曲線方程 Y=1.2314X－0.005726，r=0.9999(n=8)。

回收率及精密度試驗:按照標準曲線制作方法，采用高、中、低3個質量濃度，評價本法測定血漿中CLTZ含量的回收率，日內、日間 RSD，結果見表1。最低定量質量濃度為 0.024 μg/mL(n=5，RSD=8.12%)[3]。

穩定性試驗:將CLTZ和DZP混合溶液室溫放置，于0，12，24，48，60 h 時進行測定，測得 CLTZ 質量濃度分別為 0.91，1.03，1.06，0.93，0.97 μg/mL。結果表明，室溫放置 60 h 內穩定性良好[(0.98 ± 0.064)μg/mL，RSD=6.53%]。

表1 回收率與精密度試驗結果(n=5)

凍融試驗:將含藥血漿反復冷凍(－20℃)、融化，按樣品處理后測定，2 d內測定5次，測得CLTZ質量濃度分別為0.50、0.50，0.51，0.50，0.47 μg/mL。結果表明，血漿樣品 4 d 內反復凍融測定穩定性良好[(0.50 ±0.015)μg/mL，RSD=3.00%]。

2.3.4 樣品色譜行為

在擬訂的色譜條件下，CLTZ與內標DZP及血漿中內源性雜峰分離良好，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 血藥濃度與藥代謝動力學參數

18～22名受試者單劑口服不同批次CLTZT 100 mg后，平均血藥濃度見表2。采用3p97計算機軟件(中國數學藥理學會)，計算各個體的藥物代謝動力學參數，峰濃度(Cmax)和達峰時間(tmax)以實測值計算，藥時曲線下面積(AUC)按梯形面積法計算，取值范圍0～48 h。有關藥物代謝動力學參數見表3。

表2 受試者單劑口服CLTZT 100 mg后不同時間的血藥濃度(μg/mL，n=18或 n=22，)

表2 受試者單劑口服CLTZT 100 mg后不同時間的血藥濃度(μg/mL，n=18或 n=22，)

批號時間(h)2F75P 3G93P 3J83P 050309P 050807P 1.00.42 ±0.310.38 ±0.150.44 ±0.220.42 ±0.180.49 ±0.302.00.69 ±0.400.66 ±0.350.63 ±0.260.66 ±0.290.86 ±0.433.00.85 ±0.380.80 ±0.380.70 ±0.280.74 ±0.300.96 ±0.434.00.89 ±0.360.75 ±0.380.70 ±0.260.82 ±0.290.84 ±0.305.00.83 ± 0.290.59 ± 0.230.64 ± 0.230.66 ± 0.270.73 ± 0.346.00.74 ±0.300.51 ±0.200.56 ±0.220.56 ±0.260.63 ±0.308.00.58 ± 0.230.41 ± 0.150.40 ± 0.170.39 ± 0.160.41 ± 0.1912.00.35 ±0.130.25 ±0.090.30 ±0.130.24 ±0.070.26 ±0.1024.00.19 ± 0.080.16 ± 0.050.17 ± 0.060.15 ± 0.070.16 ± 0.0936.00.10 ± 0.050.10 ± 0.060.097 ± 0.060.10 ± 0.040.08 ± 0.0448.00.035 ± 0.040.06 ±0.040.043 ± 0.050.07 ±0.020.03 ±0.02

表3 不同批次CLTZT在人體內的藥物代謝動力學參數比較(n=18或 n=22，)

表3 不同批次CLTZT在人體內的藥物代謝動力學參數比較(n=18或 n=22，)

批號2F75P 3G93P 3J83P 050309P 050807P lag time(h)0.49 ± 0.250.53 ± 0.270.47 ± 0.310.42 ± 0.440.57 ± 0.28 t1/2α(h)3.02 ± 1.042.41 ± 0.872.27 ± 1.092.77 ± 0.602.32 ± 1.23 t1/2β(h)17.40 ±11.5814.99 ±5.0820.00 ±11.9416.10 ±4.5615.35 ±8.65 tmax(h)3.88 ± 1.193.22 ± 1.263.33 ± 1.503.28 ± 0.963.05 ± 1.05 Cmax(μg/mL)0.99 ± 0.370.87 ± 0.380.81 ± 0.270.92 ± 0.301.09 ± 0.46 AUC0－∞ [μg/(h·mL)]14.38 ± 4.4413.22 ± 5.1212.92 ± 4.4412.88 ± 2.4412.21 ± 4.49 AUC0－T[μg/(h·mL)]12.84 ± 4.1011.07 ± 3.7210.77 ± 3.3910.65 ± 2.4411.09 ± 4.09

3 討論

[2]，在現有試驗室條件下，采用高效液相色譜－紫外分光光度(HPLC－UV)法，建立了以磷酸鹽緩沖液(0.01 mmol/L KH2PO4，用 H3PO4調 pH 至 4.0)－乙腈(V/V，50 ∶50)的流動相體系，并以DZP為內標，結果表明，所建立的方法峰形好，且與血漿內源性物質分離好，經方法學考察證實其回收率高、專屬性強，完全能滿足藥代動力學研究要求。由表2和表3可見，不同批次樣品每個時間點的平均血藥濃度基本一致，在人體內吸收、分布、消除過程中的主要代謝動力學參數較為接近，與文獻[4－5]報道較一致，表明同一廠家生產的不同批次的CLTZT在人體內的動力學過程亦較一致。在進行仿制藥品的臨床生物等效性試驗時，不同廠家的藥品劑型、生產工藝看似相同，但體外試驗諸如溶出度、含量均一性、崩解度以及藥物進入生物體內所發揮的作用，表現為其吸收、分布、消除的整個過程，均會影響藥物的有效性。因此，故選擇一個優良的參比制劑是確保仿制藥品質量的關鍵。

本研究結果表明，中國大冢制藥有限公司生產的不同批次的CLTZT在人體內的動力學過程較一致，質量穩定，是對其仿制品進行臨床試驗的良好參比制劑。

參考文獻:

[1]陳新謙，金有豫，湯 光.新編藥物學[M].第15版.北京:人民衛生出版社，2003:545.

[2]Tata PN，Fu CH，Browder，et al.The quantitative determination of cilostazol and its four metabolites in human liver minrosomal incubation mixtures by high－performance liquid chromatography[J].J pharm Biomed anal，1998，2002，18(3):441－451.

[3]曾經澤.生物藥物分析[M].北京:北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1998:214.

[4]W00 SK，Kang WK，Kwon KI.Pharmacokinetic modeling of the antiplatelet and cardiovascular effects of cilostazol in healthet humans[J].Clin Pharmacol Ther，2002，71(4):246－252.

[5]喬海靈，胡玉榮，賈琳靜，等.西洛他唑片在健康人體的藥物代謝動力學和生物等效性[J].中國臨床藥理學雜志，2004，20(6):426－429.