辛伐他汀對急性百草枯中毒大鼠炎癥因子的作用

楊賢義，劉 梅，朱艷霞，張緒國，陳立東，謝 華 ，肖 敏

（湖北醫藥學院附屬十堰太和醫院急診科，湖北 十堰 442000）

百草枯（Paraquat，PQ）是目前世界范圍內廣泛使用的高效除草劑，對人畜均有較強的毒性，因缺乏特效解毒劑，病死率極高。百草枯中毒后早期容易發生全身炎癥反應綜合征（Systemic inflammatory response syndrome，SIRS），進而向多臟器功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)發展。若能及時控制百草枯中毒患者全身炎癥反應，將會提高救治成功率。他汀類藥物是目前廣泛使用的調脂藥，近年來發現其具有顯著抗炎、抗氧化等效應，并能保護內皮細胞，減輕炎性反應。我們以辛伐他汀為例，觀察其對百草枯中毒大鼠炎性因子表達的影響，探討他汀能否抑制百草枯中毒大鼠的全身炎性反應。

1 資料與方法

1.1 實驗動物與材料 72只雌性SD大鼠，體重200～250 g，購自湖北醫藥學院實驗動物中心。體積分數為20%的百草枯水劑(深圳瑞德豐農藥有限公司生產)；辛伐他汀片(杭州默沙東制藥有限公司)；酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測試劑盒購自晶美生物工程(北京)有限公司。

1.2 動物分組與模型制備 百草枯水劑按120 mg/kg灌胃SD大鼠，建立大鼠急性百草枯中毒模型。72只大鼠按隨機數字表法分為對照組、中毒組(PQ組)和辛伐他汀組，每組均設給藥后6 h、24 h、72 h三個時間點，每個時間點8只。辛伐他汀組中毒2 h后留置胃管并注入辛伐他汀20 mg/kg，其余兩組均留置胃管并注入10 ml/kg生理鹽水，1次/d，直至處死。

1.3 標本采集與指標檢測 給藥后各時間點取大鼠眼眶血，分離血清，ELISA檢測白細胞介素-β(IL-1β)、白細胞介素-2（IL-2）和血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平。

2 結 果

2.1 各組IL-1β水平比較 PQ組各時間點血清IL-1β水平明顯升高，6 h和24 h時與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。他汀組給藥后IL-1β明顯降低，與PQ組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠給藥后不同時間點各炎癥因子檢測結果比較(±s，n=8)

表1 各組大鼠給藥后不同時間點各炎癥因子檢測結果比較(±s，n=8)

注：與對照組比較，▲P<0.05；與PQ組比較，#P<0.05。

組別IL-1β（ng/L） IL-2（ng/L） TNF-α（ng/L）對照組PQ組他汀組6 h 148.0±42.2 285.2±112.1▲130.2±58.7#24 h 149.0±42.3 253.2±74.0▲153.2±45.0#72 h 148.5±43.5 164.2±62.3 121.2±85.6#6 h 5.01±1.98 8.12±3.10▲2.52±0.42#24 h 5.0±2.12 5.22±2.19 4.12±2.45 72 h 4.98±2.20 4.72±2.12 2.12±1.65#6 h 98.0±21.2 153.2±45.0▲54.0±15.6#24 h 98.1±21.0 241.2±75.2▲124.1±25.6#72 h 98.0±21.0 175.2±43.5▲68.0±22.6#

2.2 各組IL-2水平比較 PQ組6 h時血清IL-2水平明顯高于對照組(P<0.05)，24 h和72 h時與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。他汀組于給藥后6 h IL-2較PQ組明顯降低(P<0.05)，24 h有所回升，至72 h時明顯下降(P<0.05)，見表1。

2.3 各組TNF-α水平比較 PQ組各時間點血清TNF-α水平較對照組明顯升高(P<0.05)。他汀組TNF-α水平于給藥后6 h顯著降低，24 h有所升高，至72 h明顯下降，各時間點均較PQ組明顯降低(P<0.05)，見表1。

3 討 論

百草枯中毒后造成的機體多器官功能損害，除了與百草枯自身的理化作用有關外，大量的細胞因子和炎癥因子參與了SIRS、MODS的發生[1]，尤其是TNF-α和IL-1，IL-2。TNF-α是肺巨噬細胞分泌的促炎細胞因子，能誘導白細胞遷移，粒細胞脫顆粒，并誘導內皮細胞和巨噬細胞釋放IL-1；IL-1又刺激產生其他細胞因子，并增強組織細胞對TNF-α的敏感性。TNF-α的大量釋放能促進有害性級聯反應，導致組織細胞損傷、器官功能障礙甚至死亡。IL-1β是IL-1在血液循環中的主要表達形式，其反過來可增加TNF-α的有害作用。II-2是體內生物反應調節系統的一種重要淋巴因子及細胞免疫的重要成分，主要由活化的CD4+和CDT細胞產生，能促進T、B淋巴細胞生長增殖分化，促進抗體產生的作用，還能激發免疫效應器細胞產生各種繼發的細胞因子如TNF等。

Netea等[2]研究表明炎癥因子的過度釋放可激活炎性細胞釋放大量各種蛋白酶、磷脂酶及氧自由基等細胞毒物質，引起組織細胞損害；而組織細胞損害或解體后又形成更多的炎癥刺激物，引起炎癥因子瀑布式級聯放大反應和組織損害的惡性循環，可導致SIRS、MODS等發生。因此抑制炎癥因子的過度釋放是搶救百草枯中毒的重要途徑。

近年來許多研究表明，他汀類藥物除降血脂外還能在多個水平影響炎癥反應的進程，具有抑制炎癥介質釋放和血小板聚集，改善血管內皮細胞功能，抗炎和免疫調節反應，改善NO的生物活性及減少血管炎癥的氧化應激反應[3]。他汀類藥物能抑制Toll樣受體4(TLR4)和TLR2在單核細胞表面的表達，從而減少TNF-α及MCP-1等細胞因子的產生[4]；還能夠降低單核細胞對血管內皮組織的粘附性[5-6]，并能直接抑制由白細胞表達的、與內皮細胞和白細胞粘附有關的粘附分子—淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1)[7]。Han等[8]發現辛伐他汀在體外能抑制內皮細胞受體CRP、IL-1β或LPS刺激產生的MCP-1，從而抑制炎癥細胞的粘附作用，減輕組織損傷。

本研究顯示，辛伐他汀可明顯抑制急性百草枯中毒大鼠血清炎性細胞因子TNF-α、IL-1β和IL-2的釋放，減輕百草枯對組織細胞的損傷。他汀類藥物可能成為治療百草枯中毒SIRS安全而有效藥物。

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[5]Weber C,Er lW,Weber K S,et al.HMG-CoA reductase inhibitors decrease CD11b expression and CD11b-dependent adhesion of monocytes to endothelium and reduce increased adhesiveness of monocytes isolated from patientswith hypercholesterolemia[J].J Am Coll Cardio,1997,30(5):1212-1217.

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[8]Han KH,Ryu J,Hong KH,et al.HMG-CoA reductase inhibition reduces monocyte C chemokine receptor 2 expression and monocyte chemoattractan protein-1mediated monocyte recruitment in vivo[J].Circulation,2005,111:1439-1447.