川芎嗪微乳凝膠的制備及體外釋放度的研究

黃桂紅 楊柳青

（廣東省中醫(yī)院藥劑科，廣東 廣州 510120）

川芎嗪（Tetramethylpy razine，TMP）為川芎的干燥根莖的提取物，具有止疼、抗炎等藥理作用，目前臨床已用于老年患者的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）等各種風(fēng)濕病的治療。通過動(dòng)物和臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，磷酸川芎嗪有吸收迅速、分布廣泛和主要在肝內(nèi)代謝迅速消除的缺點(diǎn)[1]。近年來，天然藥物有效成分抗 RA 作用已成為研究熱點(diǎn)，大量的藥理學(xué)研究川芎嗪治療RA機(jī)制表明[2-5]，其在抗 RA 作用的效果顯著。經(jīng)皮給藥能夠使有效成分通過皮膚透入血液循環(huán)而發(fā)揮全身療效，可避免肝臟及胃腸道的首過效應(yīng)，降低藥物的毒副作用，在體內(nèi)維持恒定的、持久的血藥濃度，提高藥物療效。微乳因?yàn)閷λ苄约爸苄运幬锞哂辛己玫娜芙庑?，具有較小的表面張力、其粒徑與毛囊孔相近以及能提高易溶性藥物穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)，近年來廣泛的應(yīng)用于經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中。微乳凝膠（microemulsion-based gels，MBGs）就是指將微乳加至凝膠基質(zhì)如卡波姆、黃胞膠、角叉菜膠等中形成的凝膠。

為了改善微乳低粘度的性質(zhì)，依據(jù)凝膠具備良好的生物粘附性、制備簡單的特點(diǎn)[6]，將其制備成微乳凝膠，并對川芎嗪微乳凝膠體外釋放度進(jìn)行研究，先將其微乳凝膠的制備和體外釋放度進(jìn)行報(bào)道。

1 材料與試劑

Waters 高效液相色譜儀（Waters 515泵，Waters2487 檢測器）、GR-202AND分析天平（日本島津）、TK-12A型透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀，7mL立式玻璃擴(kuò)散池，接口面積為2.92cm2。（上海凱諧科技貿(mào)易有限公司）；HJ-3恒溫磁力攪拌器（江蘇醫(yī)療儀器廠）。

川芎嗪原料藥（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.5%，江蘇南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司）；鹽酸川芎嗪對照品（中國藥品生物制品檢定所，編號為110817-200305）；透析袋（分子截留量6000～8000）；油酸 （天津市大茂化學(xué)試劑有限公司）；吐溫-80 （天津市大茂化學(xué)試劑有限公司） ；異丙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；卡波姆940（北京市海淀會(huì)友精細(xì)化工廠）；甲醇均為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 川芎嗪微乳含量測定方法

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性

迪馬platisil ODS柱（5μm，250mm×4.6mm）；phenomenex保護(hù)柱；流動(dòng)相：乙睛-0.5%冰乙酸（36∶64）；流速1mL/min，檢測波長為295nm，進(jìn)樣量10μL，柱溫為25℃。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取川芎嗪對照品5.6mg，于50mL量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，0.112mg/mL的儲(chǔ)備液，密封，于4℃冰箱保存。分別精密量取儲(chǔ)備0.125mL、0.25mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL置于25mL量瓶中，用甲醇定容，制備質(zhì)量濃度分別為0.56、1.12、2.24、4.48、6.72、8.96μg/mL。按上述色譜條件依次進(jìn)樣。以測得峰面積A與其濃度C線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=7254C+297.04，R=0.9997。結(jié)果表明，川芎嗪濃度在0.56～8.96μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL，按上述色譜條件測定峰面積，計(jì)算RSD為0.82%（n=6），表明精密度良好。同一供試品溶液分別在 0、2、4、6、8、10、12h 進(jìn)樣測定峰面積，結(jié)果RSD=1.41%，說明在12h內(nèi)川芎嗪較為穩(wěn)定。

2.1.4 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)法，取已知含量川芎嗪微乳6份，分別加入高、中、低劑量的川芎嗪對照品溶液，用甲醇稀釋至原體積的1000倍，以0.45μm微孔濾膜過濾，棄初濾液，取續(xù)濾液進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果川芎嗪低、中、高劑量的平均回收率為100.62%，RSD為1.40%，表明該方法的準(zhǔn)確性良好。

2.2 川芎嗪微乳及微乳凝膠的制備

2.2.1 川芎嗪微乳的制備

按處方比例將表面活性劑和助表面活性劑混勻置于具塞平底錐形瓶中，在25℃恒溫磁力攪拌器攪拌下加入油酸，取處方量川芎嗪加入上述混合溶液中再超聲5min，然后按比例滴入水相，在磁力攪拌器下攪拌，制得質(zhì)量濃度為1%的淡黃色澄清透明川芎嗪微乳。

2.2.2 川芎嗪微乳凝膠的制備

取0.2g川芎嗪，依次加入4.5g吐溫-80，4.5丙二醇，0.2g油酸，蒸餾水加至20g制備成川芎嗪微乳。然后再加入0.2g卡波姆940至微乳中，放置溶脹24h后，即得川芎嗪微乳凝膠。

2.3 川芎嗪微乳凝膠的體外釋放度研究

采用改良的Frans擴(kuò)散池，將透析袋（截留相對分子質(zhì)量6000-8000）用石蠟固定在擴(kuò)散池兩池間，向給藥池中準(zhǔn)確加入1%川芎嗪微乳凝膠0.5g，每份均平行6組，使其均勻分布到半透膜的表面，放入33℃水浴鍋中。將擴(kuò)散池放入水浴中，向接收池中加入已預(yù)熱至33℃的生理鹽水，接收池中置一攪拌子以300r/min的轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)動(dòng)，于0.5，1，2，6，8，10，12，24h分別取樣，精密吸取0.1mL并迅速補(bǔ)加等量預(yù)熱的生理鹽水，樣品液經(jīng)微孔濾膜過濾，必要時(shí)稀釋至合適質(zhì)量濃度。采用高效液相色譜法測定含量，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積釋放百分率（Q）。計(jì)算公式如下：

式中，Q0為給藥池川芎嗪總量，Cn 為第n 次取樣實(shí)測濃度，Vi為第i 次取樣體積，Ci 為第i 次取樣實(shí)測濃度。

2.4 體外釋藥模型擬合

將川芎嗪微乳凝膠進(jìn)行體外釋放度實(shí)驗(yàn)，結(jié)果體外釋藥模型見圖2及3。體外釋藥數(shù)據(jù)經(jīng)一級、零級和Higuchi 方程3種常用的數(shù)學(xué)模型擬合，結(jié)果川芎嗪微乳凝膠顯示的體外釋藥符合一級釋放模型，詳見表1。

表1 不同方程擬合川芎嗪微乳凝膠的體外釋放度(n=6)

圖2 川芎嗪微乳凝膠體外釋放度擬合曲線（一級方程）

圖3 川芎嗪微乳凝膠體外釋放度與時(shí)間曲線

3 討 論

3.1 從圖3中可以看出，微乳凝膠在前6h釋放很快，釋放率達(dá)到73.16%，釋放時(shí)間一直延續(xù)到24h，經(jīng)過擬合符合一級方程，表明川芎嗪微乳凝膠具備緩釋作用。劉鵬等[4]研究川芎嗪微乳的體外釋放度，發(fā)現(xiàn)其剛開始釋放較快，而且具有緩釋作用，原因是川芎嗪有一定量溶解在微乳外相中，當(dāng)透析袋投入到釋放遞質(zhì)中后，川芎嗪由外相→釋放遞質(zhì)，所以釋放很快；在后面22h釋放較慢，這階段可能由于川芎嗪經(jīng)內(nèi)相→界面膜→外相→釋放遞質(zhì)。

3.2 考慮到微乳是作為藥物的載體，所以應(yīng)符合一般藥物載體的要求，即無毒、無刺激、 無不良藥理作用、具有良好的生物相容性、不影響主藥的藥效和穩(wěn)定性。為此確定采用以吐溫-80為乳化劑，異丙醇為助乳化劑，油酸為油相的微乳化體系。

3.3 在微乳凝膠的制備過程中，曾嘗試將卡波姆直接加入到微乳的水相中后，再加入油相和乳化劑，結(jié)果其制備的微乳凝膠難以成型，即使成型后，也很容易破乳。原因可能是卡波姆的加入，阻礙了油相和水相分別分布于表面活性劑的兩側(cè)形成雙層膜，從而導(dǎo)致微乳的破乳。最后根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[7,8]，將卡波姆940直接加入到制備的微乳中，結(jié)果其成型良好。

3.4 卡波姆為白色、疏松的粉末，具有較強(qiáng)的吸濕性，可溶于水、乙醇和甘油?？ú贩肿咏Y(jié)構(gòu)中含有52%～68%的酸性基團(tuán)，具有一定酸性，可用堿性物質(zhì)中和，形成凝膠。本實(shí)驗(yàn)所制備的微乳本身有弱堿性，加入卡波姆后其成型良好，因此無需再加入其它的堿。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，微乳凝膠易受溫度變化影響，不宜冷藏，適宜在25℃左右，密封避光貯存。

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