酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血液流變學的影響

陳雅慧 朱 梅 李寶莉 朱建文 張正祥 (延安大學醫學院生理教研室，陜西 延安 76000)

酸柏梔油軟膠囊具有安神、增強記憶等作用〔1，2〕，可用于治療神經衰弱、焦慮癥、抑郁癥、記憶力低下、老年性癡呆、更年期綜合征、心腦血管疾病等。該膠囊的主要成分為不飽和脂肪酸，且油酸和亞油酸占82%〔3，4〕。已有研究表明不飽和脂肪酸γ-亞麻酸具有防血脂沉降和抑制血小板集聚的作用，可做抗血栓劑。因此，本實驗通過預防性給予大鼠酸柏梔油軟膠囊，觀察該藥物對寒凝血瘀證大鼠血液流變學的影響，探討該藥活血化瘀的物質基礎及部分機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 選用SD大鼠，體重(268±20)g，雌雄各半，動物合格證:SCXK(軍)2002-005，由第四軍醫大學實驗動物中心提供。

1.1.2 藥品與試劑酸柏梔油軟膠囊:西安東盛醫藥研究所生產，批號:20080411，0.5 g/粒;復方丹參片:寶商集團陜西辰濟藥業有限公司，批號:Z61020995，0.3 g/片。器材:MDK3200K型血流變學儀，重慶麥迪克公司產品;LBY-NJ型血小板聚集儀，為北京普利生儀器有限公司產品;XSN-12型體外血栓形成儀，為北京醫用離心機廠。

1.2 方法 取SD大鼠60只，分為6組，每組10只，雌雄各半。①空白對照組:灌胃注射生理鹽水1.0 g/kg;②血瘀癥模型組予生理鹽水1.0 g/kg灌胃;③丹參陽性對照組予1.0 g/kg灌胃;④大劑量組予酸柏梔油軟膠囊4.5 g/kg灌胃;⑤中劑量組予2.70 g/kg灌胃;⑥小劑量組予1.35 g/kg灌胃。每天給藥1次，連續15 d。第16天，除空白對照組以外，其他各組于皮下注射鹽酸腎上腺素(Adr)8 μg/kg共2次，兩次間隔4 h，在兩次注射之間每2 h將大鼠浸入冰水處置5 min，處置后停食，共2次，復制血瘀模型。第17天各組均用20%烏拉坦腹腔注射麻醉，劑量5 ml/kg。頸動脈插管取血約5 ml。其中1.5 ml血迅速注入肝素抗凝管中，搖勻后置入35℃的恒溫水浴鍋中備用，另取1.2 ml血迅速注入枸櫞酸鈉抗凝管，搖勻備用。另取大鼠60只，分組給藥同前，建立血瘀模型后，從各組大鼠頸總動脈取血5 ml，將2.7 ml置于抗凝的硅化管中(用3.8%枸櫞酸鈉抗凝)，抗凝劑與血漿的比例為1∶9，離心制備富血小板血漿(PRP，500 r/min，5 min)和貧血小板血漿(PPP，3000 r/min，10 min)，用PPP調PRP中血小板數至20萬～22萬/mm3。以ADP 0.5 μmol為誘導劑，用LBY-NJ型血小板聚集儀，測定血小板最大聚集率。另將1.8 ml血加入硅化塑料環內，裝到血栓儀圓盤上，啟動開關，37℃條件下，17 r/min，轉動15 min，停機，取下塑料環，用眼科鑷輕輕提取血栓頭，將血液及形成的血栓一起倒在濾紙上，將其移到干燥濾紙上，測定血栓長度，稱濕重，然后將血栓置于恒溫烤箱中，64℃，30 min，烘干，稱干重。

1.3 統計學方法 應用SSPS16.0統計軟件進行統計，計量資料均用±s表示，多組間兩兩比較用單因素方差分析。

2 結果

2.1 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠全血黏度的影響 血瘀證模型組的全血高、中、低切黏度均明顯升高，其全血還原黏度高、中、低切值亦明顯高于空白對照組(P＜0.05，P＜0.01)，說明血瘀證模型造模成功。陽性對照組全血高、中、低切黏度低于血瘀證模型組，說明復方丹參對血瘀證升高有抑制作用;酸柏梔油軟膠囊大、中、小劑量組全血高、中、低切黏度及全血還原黏度低于血瘀證模型組，說明其對血瘀證大鼠升高的全血黏度具有顯著的抑制作用;與模型組比較差異均有統計學意義(P＜0.01)。見表1。

血瘀證模型組的血漿黏度、血液屈服應力和卡松黏度均高于空白對照組(P＜0.05，P＜0.01)。陽性對照組血漿黏度、血液屈服應力和卡松黏度均低于血瘀證模型組，說明復方丹參對血瘀證的升高有抑制作用。酸柏梔油軟膠囊大、中、小劑量各指標也低于血瘀證模型組，酸柏梔油軟膠囊大、中、小劑量對血瘀證大鼠升高的血漿黏度、血液屈服應力和卡松黏度均具有顯著的降低作用(P＜0.05，P＜0.01)。見表2。

2.2 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠紅細胞聚集和纖維蛋白原水平的影響 血瘀模型組未引起紅細胞聚集，但酸柏梔油軟膠囊大、中、小劑量組對血瘀模型組纖維蛋白原有明顯的降低作用(P＜0.05)。見表3。

2.3 酸柏梔油軟膠囊對血小板功能和血栓形成的影響 血瘀模型組血小板最大聚集率為46.51%，酸柏梔油軟膠囊各劑量組對ADP誘導的血小板聚集有明顯抑制作用，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05);酸柏梔油軟膠囊各組對體外血栓長度、血栓濕重和血栓干重也有抑制作用，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。說明酸柏梔油軟膠囊對血栓形成有抑制作用。見表4。

表1 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠全血流變學參數的影響( ± s，n=10)

表1 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠全血流變學參數的影響( ± s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

組別 全血黏度(mPa·s)高切黏度(150S－1) 中切黏度(60S－1) 低切黏度(30S－1)全血還原黏度(mPa·s)高切黏度(150S－1) 中切黏度(60S－1) 低切黏度(30S－1)空白對照組 4.68±0.69 8.56±2.21 9.99±2.22 2.49±0.23 10.69±3.13 13.10±1.15模型組 6.43±0.962) 11.34±3.11 15.23±3.26 3.12±0.15 13.16±2.23 19.36±3.45陽性對照組 4.75±0.92 9.58±3.36 10.03±0.72 2.16±0.26 10.45±1.56 10.68±1.35大劑量組 4.59±0.681) 8.71±2.241) 10.45±0.712) 2.87±0.421) 10.78±1.031) 11.46±4.312)中劑量組 4.78±0.121) 7.79±3.141) 10.36±0.451) 1.97±0.561) 10.12±1.261) 11.49±1.872)小劑量組 5.12±0.461) 8.75±1.511) 9.97±1.141) 2.37±0.171) 11.14±2.451) 12.18±2.432)

表2 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血黏度的影響( ± s，n=10)

表2 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血黏度的影響( ± s，n=10)

組別 血漿黏度(mPa·s)血液屈服應力(mPa)卡松黏度(mPa·s)1.63±0.28 13.45±1.43 5.89±0.41模型組 1.93±0.70 18.36±1.57 7.83±0.60陽性組 1.45±0.28 11.25±1.34 5.45±0.35大劑量組 1.28±0.242) 11.56±3.192) 4.68±0.432)中劑量組 1.56±0.472) 12.38±1.342) 5.18±0.692)小劑量組 1.37±0.821) 12.50±2.461) 5.32±0.921)正常組

表3 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠紅細胞聚集和纖維蛋白原的影響( ± s，n=10)

表3 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠紅細胞聚集和纖維蛋白原的影響( ± s，n=10)

組別 血沉(mm/h)紅細胞壓積(%)纖維蛋白原(g/kg)2.00±0.93 60.25±4.62 1.63±0.28模型組 3.36±1.45 62.52±1.67 2.83±0.70陽性對照組 4.13±1.73 61.25±1.91 1.29±0.281)大劑量組 6.13±2.10 57.75±3.81 1.28±0.242)中劑量組 5.63±1.96 58.06±0.34 1.30±0.322)小劑量組 4.50±2.73 58.50±2.56 1.32±0.821)對照組

表4 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血小板聚集和體外血栓形成的影響( ± s，n=10)

表4 酸柏梔油軟膠囊對血瘀模型大鼠血小板聚集和體外血栓形成的影響( ± s，n=10)

組別 血小板最大聚集率(%) 血栓長度(mm) 血栓濕重(mg) 血栓干重(mg)空白對照組 32.81±3.63 19.25±1.54 252.21±120.55 97.14±22.48模型組 46.54±2.34 22.52±2.56 320.34±110.14 112.83±32.70陽性對照組 28.16±1.69 20.14±2.192) 221.26±200.131) 86.29±24.281)大劑量組 31.34±2.181) 17.75±2.431) 234.56±123.461) 90.17±33.191)中劑量組 29.35±3.151) 18.06±2.171) 245.64±106.231) 92.30±32.321)小劑量組 28.66±2.421) 17.50±1.891) 236.18±140.481) 91.32±30.521)

3 討論

本研究所用動物模型是依據中醫關于血瘀癥的“暴怒”、“寒邪”病因、病理機制〔5〕設計的大鼠急性血瘀模型。為了迅速復制寒邪血瘀模型，給大鼠皮下注射大劑量腎上腺素模擬暴怒時機體狀態，同時用冰水浸泡以模擬寒邪侵襲，二者綜合作用可復制出寒邪血瘀模型，該模型血液流變性具有黏、濃、凝、聚的特點。全血黏度是代表血液流動阻力的主要參數，當血液流動阻力增高時，全血黏度值升高。全血黏度受紅細胞壓積、紅細胞聚集性、紅細胞變形性、血漿成分、血管舒縮狀態等因素的綜合影響，而其中以紅細胞壓積影響最大，紅細胞壓積越高，全血黏度越大〔6〕。本研究結果顯示，血瘀模型大鼠除血沉、紅細胞壓積外，其余各項血液流變學指標均較正常組明顯升高，提示急性血瘀模型造模成功。酸柏梔油軟膠囊大小劑量組的各項血液流變學指標與正常組比較無明顯意義，但酸柏梔油軟膠囊大劑量可顯著降低血瘀大鼠的全血黏度、還原黏度及血漿黏度等血液流變學指標，小劑量組的作用沒有大劑量組明顯。

已有研究發現全血黏度、血漿黏度、血沉及血小板聚集與纖維蛋白原水平呈顯著正相關〔7〕，提示血液黏度增高與血漿纖維蛋白原含量升高有密切的關系。除紅細胞使血液黏度增高外，血漿纖維蛋白原因其分子大、濃度高，又具有聚合作用，因此其含量增多是增加血液黏度的又一重要因素。本研究發現酸柏梔油軟膠囊大劑量組可顯著降低血瘀大鼠的纖維蛋白原含量，抑制血栓形成，提示其對血瘀大鼠的黏、凝、聚有明顯的對抗作用。因此可以得出結論，酸柏梔油軟膠囊具有去纖、降黏作用，從而起到活血化瘀作用。本課題組前期研究發現酸柏梔油軟膠囊中油酸、亞油酸含量最多〔3〕，結合本次藥理實驗研究結果，考慮該藥活血化瘀作用可能與該膠囊中的油酸、亞油酸有密切關系。

1 李寶莉，陳雅慧，胡 銳，等.復方酸棗仁油梔子油對小鼠的鎮靜、催眠和抗驚厥作用〔J〕.南方醫科大學學報，2008;28(9):1636-9.

2 李寶莉，陳雅慧，張正祥，等.復方酸棗仁油梔子油對小鼠學習記憶的影響〔J〕.西安交通大學學報·醫學版，2010;31(6):673-6.

3 張正祥，李寶莉，陳雅慧，等.復方酸棗仁油梔子油軟膠囊脂肪酸成份測定〔J〕.陜西醫學，2009;38(7):792-3.

4 趙啟鐸.酸棗仁油中不飽和脂肪酸的藥理實驗研究〔J〕.天津中醫藥，2005;22(4):331-3.

5 徐淑云.藥理實驗方法學〔M〕.第2版.北京:人民衛生出版社，1994:564-6.

6 陳 奇.中藥藥理研究方法學〔M〕.北京:人民衛生出版社，1996:992-1011.

7 《中華檢驗醫學網》http://www.labweb.cn/articleview/2009-11-16/article_view_11872.htm