益智藥材化學成分及質量分析研究進展

呂秀香，張連學，黃文華，余競光，郭寶林（.吉林農業大學中藥材學院，長春308；.中國醫學科學院/北京協和醫學院藥用植物研究所，北京 0093）

益智是姜科植物益智Alpinia oxyphyllaMiq.的干燥成熟果實。始載于《本草拾遺》[1]，主產于海南、廣東、廣西等地，為海南地道藥材之一，也是我國四大南藥之一。在我國藥典中，作為果實的益智炮制成飲片時，去掉果殼，取種子，稱益智仁，因此“益智仁”名稱被用來指代果實（藥材）或種子（飲片），在應用上是有混亂的。筆者在本綜述中為避免歧義，將指明各研究報道中的部位為果實或種子。

益智藥材的質量標準簡單，2010年版《中國藥典》（一部）[2]中僅規定益智種子含揮發油不得少于1.0%（mL·g-1），而對于其中指標性成分的含量限度暫無規定。

1 益智藥材化學成分研究

1.1 萜類化合物

益智中的萜類成分以倍半萜為主，其主要成分有圓柚酮（諾卡酮，Nootkatone）、香橙烯（Valencene）等；另外，還含有圓柚 醇（Nootkatol）、刺參酮（Oplopanone）、7-表-香科酮（7-Epi-teucrenone）、Oxyphyllol A、Oxyphyllol B、Oxyphyllol C、Isocyperol、Oxyphyllone A、Oxyphyllone B、Oxyphyllenone A、Oxyphyllenone B、Oxyphyllenodiol A、Oxyphyllenodiol B、Oxyphyllone E、Oxyphyllone F[3～9]等。

1.2 二苯庚烷類衍生物

從益智中分離到的二苯庚烷類化合物主要有益智酮甲（Yakuchinone A）、益智酮乙（Yakuchinone B）、益智醇（Oxyphyllacinol）、益智新醇（Neonootkatol）[9～13]。

1.3 黃酮類化合物

目前發現益智中的2個黃酮為白楊素（Chrysin）、楊芽黃素（Tectochrysin），另外還有1個為黃酮醇（Izalpinin）[6，7，9，11]。

1.4 其他成分

尚發現異香草醛（Isovanillin）[14]、原兒茶酸（Protocatechuic acid）[15]，以及甾醇類化合物[6]如β-胡蘿卜苷（Daucosterol）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、胡蘿卜苷棕櫚酸酯（Daucosterol palmitate）等。另外，益智還含有多種微量元素、可溶性總糖、粗脂肪、脂肪酸、多種維生素、蛋白質及氨基酸等[16～18]。

2 益智藥材化學成分含量研究

2.1 單一化學成分含量測定

2.1.1 圓柚酮 圓柚酮（Nootkatone）屬于雅檻藍烷（Eremophilane）系的雙環倍半萜酮，它在抗實驗性胃潰瘍、抑制脂多糖活化巨噬細胞中NO的產生、抑制由抗原引發的RBL-2H3細胞的脫落等方面具有顯著的活性[7]，為益智藥材的有效成分之一。李興華等[19]建立了高效液相色譜（HPLC）測定益智果實甲醇超聲提取物中圓柚酮含量的方法，并對海南省瓊海市、三亞市、瓊中縣、萬寧市、海口市等幾個產地的益智藥材中圓柚酮的含量進行了比較，各產地圓柚酮含量差異不大，在1.50～2.10 mg·g-1范圍之間。黃勤挽等[20]采用氣相色譜-質譜（GC-MS）聯用法分析益智種子鹽炙前后水蒸氣蒸餾法提取得到的揮發油成分，發現鹽炙前后圓柚酮相對含量無明顯變化，分別為12.11%、12.92%。

2.1.2p-聚傘花烴p-聚傘花烴（p-Cymene）具有祛痰、止咳及抑菌作用。常艷波等[21]采用氣相色譜（GC）法建立了以p-聚傘花烴為指標的含量測定方法，并測定了4個不同批次的益智果實水蒸氣蒸餾法得到的揮發油中p-聚傘花烴的含量，發現含量略有差別，范圍為0.08%～0.12%。羅秀珍等[22]經GC-MS分析，發現益智果實揮發油中p-聚傘花烴的含量最高，相對含量為44.87%。

2.2 總成分含量測定

2.2.1 揮發油 揮發油是益智的主要藥用組分，經研究傳統的水蒸氣蒸餾法獲得的揮發油體積分數約為0.7%～1.8%[23]，超臨界萃取獲得的揮發油為3.64%[24]。20世紀90年代以來，國內學者對益智中的揮發油成分進行了一些研究。黃勤挽等[20]采用GC-MS法對廣西產益智種子鹽炙前后水蒸氣蒸餾法提取得到的揮發油成分進行對比研究。通過鑒定表明，益智仁揮發油中有68種化合物，鹽益智仁揮發油中有49種化合物，兩者共有的化合物有33種。益智仁鹽炙后揮發油的組分發生了較大變化，消失組分35個，特別是低沸點組分；增加組分16個，如生品中相對含量較高的α-愈創木烯（2.86%）在鹽炙品中未檢出，鹽炙品中相對含量較高的（-）-脫氫香橙烯（2.53%）在生品中未檢出。生品中含量較高的成分有圓柚酮（12.11%）、香橙烯（10.70%）、7-表-α-芹子烯（3.90%）、二環欖香烯（3.46%）、葎草烯環氧化物Ⅱ（3.22%）；鹽炙后含量較高的成分有圓柚酮（12.92%）、香橙烯（10.90%）、β-紫羅蘭酮（4.49%）、7-表-α-芹子烯（3.73%）、二環欖香烯（3.45%）。張文煥等[24]比較了水蒸氣蒸餾法和超臨界萃取法獲得的益智果實中揮發油的成分，前者以低沸點成分為多，最突出的是α-蓽澄茄烯，其相對含量前者為9.14%，后者為1.09%；后者以高沸點成分為多，其中圓柚酮的相對含量在后者為14.00%，前者則為5.12%。前者中含量較高的成分有香橙烯（13.62%）、十氫1，1，7-三甲基-4-亞甲基-1H-環丙烷［e］甘菊環（10.55%）、α-蓽澄茄烯（9.14%）、蛇麻烷-1，6-二亞乙基三胺-3-酯（6.73%）、喇叭茶醇（5.77%）、圓柚酮（5.12%）；后者中含量較高的成分有香橙烯（17.82%）、圓柚酮（14.00%）、十氫1，1，7-三甲基-4-亞甲基-1H-環丙烷［e］甘菊環（8.98%）、1，2-苯甲酸，單（2-乙基己基）-酯（5.94%）、4-乙酰氧基桉葉-11，（14）-二烯（5.28%）。2種不同方法制備的提取物的主要共有成分只有19個，但其在各自提取物中的相對含量相差較大，特別是桃金娘烯醛、α-蓽澄茄烯和圓柚酮的含量各相差約13倍、8.4倍和2.7倍。易美華等[25]采用GC-MS法分析鑒定了水蒸氣蒸餾法得到的益智果實（或種子不確定）及葉、莖中的揮發油，鑒定出益智果實（或種子）揮發油中的58種化合物（相對含量總和占93.54%）。這58種化合物中，益智葉只有14種相對應（相對含量總和占29.21%），益智莖只有6種相對應（相對含量總和占50.75%），表明益智莖、葉中的揮發油種類和相對含量與果實（或種子）相比差異很大。益智果實（或種子）中含量較高的成分順序為：香橙烯（9.81%）、1，2，4，5-四甲基-苯（5.86%）、圓柚酮（5.35%）、十氫-1，1，7-三甲基-4-亞甲基-1H-環丙基甘菊環（1H-cyocloprop[e]azulene，decahydro-1，1，7-trimethyl-4-methylene，4.61%）、1-甲基-3-（1-甲乙基）-苯（3.05%）。羅秀珍等[22]經GC-MS分析，發現益智果實經水蒸氣蒸餾法得到的揮發油中相對含量較高的成分順序為p-聚傘花烴（44.87%）、香橙烯（9.13%）、芳樟醇（Linalool，4.39%）、桃金娘醛（Myrtenal，3.90%）、β-蒎烯（β-Pinene，3.87%），另外圓柚酮含量為1.27%。林敬明等[26]用GC-MS法分析了超臨界萃取的益智果實揮發油成分，揮發油含量較高的成分順序為4βH，5α-Eremophila-1（10），11-Dien-2-one（6.65%）、香橙烯（6.10%）、姜酮（Zingiberone，4.40%）、桉油精（Eucalyptol，3.93%）。陳畫虹等[27]針對益智果實幾個部位的揮發油進行GC-MS分析比對，發現益智種子、果皮、全果揮發油含量及油中主要成分均有顯著差異。其中低沸點成分果皮和全果較接近，高沸點成分種子和全果比較接近，而有趣的是，果皮中有8個相對含量大于3%的成分在全果中未檢出，如含量較高的成分有法呢烯（6.54%）、α-葎草烯（5.80%）、α-蓽澄茄烯（4.75%）、β-沒藥烯（4.28%）等；全果中含量較高的成分有4-異丙基甲苯（26.71%）、香橙烯（6.06%）、圓柚酮（4.57%）、Vulgarol B（2.73%）、牻牛兒烯（2.53%）；果皮中含量較高的成分有4-異丙基甲苯（14.38%）、法呢烯（6.54%）、二環（3，1，1）庚烯（6.49%）、α-葎草烯（5.80%）、4-甲基-1-異丙基環己烯-3-醇（4.86%）；種子中含量較高的成分有圓柚酮（14.42%）、香橙烯（14.00%）、牻牛兒烯（6.81%）、Vulgarol B（6.49%）、β-花柏烯（3.89%）等。因此，從各部位所含化學成分的質量差異而言，臨床用藥應當按藥典法加以炮制后再入藥。

益智藥材揮發油成分的含量研究報道較多，就水蒸氣蒸餾法和超臨界萃取法獲得的揮發油，不同研究者的GC-MS研究結果中給出的主成分及其含量多少存在一定的差異性。其中對于圓柚酮、香橙烯等一些共性成分，可考慮作為益智的質量控制指標性成分，值得進一步深入研究。

2.2.2 總黃酮 吳德玲等[28，29]以AlCl3-NaNO2-NaOH顯色，采用紫外分光光度法（以蘆丁為對照品）測定了益智藥材中總黃酮的含量，對海南、廣東、廣西、市售益智果實樣品以及益智不同藥用部位（種子和果殼）樣品的石油醚脫脂后80%乙醇回流提取液中總黃酮含量進行了測定。發現不同產地的益智果實中總黃酮含量差異較大，海南和廣東的果實樣品中總黃酮含量比較接近，在7.65～9.85 mg·g-1范圍之間，而廣西的果實樣品中總黃酮含量較高，在14.15～15.12 mg·g-1范圍之間，市售果實樣品（產地及采收時間不詳）總黃酮含量達58.69 mg·g-1；另外，益智種子中總黃酮含量（12.2 mg·g-1）高于果殼（9.5 mg·g-1）。由于AlCl3-NaNO2-NaOH顯色（蘆丁為對照）的紫外分光光度法測定總黃酮方法存在疑義[30]，目前發現的益智中的黃酮類主要是黃酮，有可能不顯色，因此上述結果也許不能真正評價其中的黃酮類化合物的真實含量。

2.2.3 多糖 汪金玉等[31]采用以果糖為參照，測定280 nm波長處吸收度的紫外分光光度法測定了海南陳水地區等6個產區2007年產益智種子和果殼中低聚糖的含量。提取方法為95%乙醇超聲提取至無糖反應的藥渣，再用40%乙醇超聲提取，提取物用濃鹽酸水解。6批藥材中益智果殼中低聚糖含量（1.28%～2.48%）明顯高于種子（0.50%～1.14%）。吳德玲等[28，32]采用苯酚-硫酸法以葡萄糖為對照品分析測定了海南五指山、澄邁、屯昌，廣東雷州半島，廣西南寧，安徽亳州藥材市場等不同來源益智藥材果實以及不同藥用部位（益智種子和果殼）樣品80%乙醇回流提取液中多糖的含量。結果表明，不同來源的益智果實中多糖含量差異不大，含量范圍為8.03%～8.62%；另外，益智種子（8.25%）中多糖含量高于益智果殼（4.66%）。兩份研究給出的多糖（低聚糖）含量差別很大，其原因為部分來自于不同的提取方法，部分來自于不同測定方法，因此，益智中的多糖含量狀況還有待確認。

3 HPLC指紋圖譜

李文兵等[33]以圓柚酮為對照品，洗脫條件為乙腈-水系統（乙腈濃度5%～100%），檢測波長為260 nm，對益智種子鹽炙前后經甲醇索氏提取方法制備得到的提取液中的化學成分進行對比研究，發現益智鹽炙后有2個小色譜峰出現，其他較為一致，詳見圖1。

圖1 益智仁鹽炙前后指紋圖譜比較

吳德玲等[28]以芍藥苷為內標，乙腈-0.05%磷酸水梯度洗脫，檢測波長230 nm，比較了益智不同藥用部位間（種子、果殼、全果）的HPLC指紋圖譜（見圖2），發現種子和果殼的成分相差較大，益智全果和種子的峰形相近，對各色譜峰化合物的確認和質量評價還有待于進一步研究。

4 小結

益智主產地為海南，其藥材質量比較穩定。益智藥材（全果）和飲片（種子）由于使用部位的差別，在化學成分上存在一定的差異性。由于益智或益智仁名稱指代藥用部位使用較為混亂，使得結果匯總和分析存在困難。炮制加工前后的揮發油成分有較為明顯的變化，在臨床應用時需要加以注意。

益智是藥食同源的品種，應用很廣泛，其揮發油成分的含量研究報道較多，其他不同類型成分如總黃酮、多糖、特征性及單一性成分的含量研究報道較少，且不夠完善。益智中的圓柚酮、香橙烯含量較高，也較為穩定，可以考慮作為益智質量控制的指標性成分。其他成分分析指標和質量控制方法均有待深入研究。正確和準確的分析方法對于藥材的質量控制至關重要，因此益智的含量分析和質量控制方面的工作有待深入開展。

圖2 益智不同藥用部位的HPLC比較

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