中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院犬生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的建立

何玉英，陳江楠，張 瓊，夏兆飛

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193）

動(dòng)物血清或血漿生化檢查是獸醫(yī)診所常用的常規(guī)檢查項(xiàng)目，可用于評(píng)估機(jī)體的多種代謝和生理過程，用于幫助診斷疾病、麻醉前檢查和體檢。如今，臺(tái)式生化分析儀在全世界范圍內(nèi)的動(dòng)物醫(yī)院已變得很常見，因此定期檢查分析該項(xiàng)目的狀況，保證獲得可信、可靠和準(zhǔn)確的結(jié)果對(duì)獸醫(yī)來說是很重要的。臨床生化檢查所得結(jié)果需與相應(yīng)動(dòng)物的正常參考區(qū)間（reference intervals，RI）相比較，才能判定所得結(jié)果是否存在異常［1］。可見RI對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的判讀是很重要的。但目前多數(shù)動(dòng)物醫(yī)院所用的RI多直接取自教材，或由儀器制造商提供，在多數(shù)情況下，并未說明獲得RI的群體情況，如動(dòng)物數(shù)量、年齡和會(huì)影響結(jié)果的因素，同樣未說明建立RI所用的統(tǒng)計(jì)方法。此外，隨著社會(huì)和科學(xué)技術(shù)水平的發(fā)展，動(dòng)物的飼養(yǎng)管理和品種，以及生化指標(biāo)檢測(cè)方法都已發(fā)生變化，以前所建立的RI很可能已經(jīng)過時(shí)。因此，為保證生化檢查項(xiàng)目在臨床的合理利用，有必要建立符合目前實(shí)際情況的RI。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查對(duì)象 本調(diào)查選擇2011年10月1日至2012年3月31日前來中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院就診的30只健康成年犬作為檢驗(yàn)對(duì)象。本試驗(yàn)所選取的均是前來醫(yī)院進(jìn)行常規(guī)體檢和絕育／去勢(shì)手術(shù)的健康成年犬，平均年齡為2.73歲，年齡范圍為1～7歲。對(duì)每只犬都詳細(xì)地進(jìn)行病史記錄和體格檢查，只有未表現(xiàn)任何疾病癥狀（包括厭食、嗜睡、抑郁、共濟(jì)失調(diào)、高熱、脫水、貧血、黃疸、黏膜蒼白、呼吸困難、腫脹、眼鼻分泌物、嘔吐或腹瀉），且體溫、體重、脈搏和呼吸狀況均正常的犬才可參與該試驗(yàn)。

1.2 主要試劑與儀器 所使用的儀器包括日本東芝40生化儀、美國MEDICA電解質(zhì)分析儀Eayslyte Plus和北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司的DT5－3離心機(jī)。共檢測(cè)20項(xiàng)指標(biāo)（見表1），其中鈣試劑由利德曼廠家提供，其余試劑由中生試劑廠家提供，所有試劑均在有效期內(nèi)。

1.3 檢測(cè)方法 使用一次性注射器抽取每只犬2 mL血液，移入促凝管，待血液凝固后，3500r／min離心5min，留取上清液進(jìn)行各指標(biāo)的檢測(cè)，具體方法見表1。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 使用SPSS 13.0軟件對(duì)各指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行Kolmogorov－Smirnov正態(tài)性檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)屬于正態(tài)性分布的，采用X±2S表示；屬于偏態(tài)分布的采用百分位數(shù)法（雙側(cè)），用P（2.5～97.5）表示。采用與已知均值比較的單樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，已知均值用1／2（下限＋上限）表示，偏態(tài)分布數(shù)據(jù)因?qū)φ諈⒖贾礟50位的具體值難以確定，故與參考值上限進(jìn)行比較。

表1 生化指標(biāo)檢測(cè)方法

2 結(jié)果

本調(diào)查的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2和表3。

本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得的AST、Na＋和Cl－的RI要窄于現(xiàn)用RI，且差異顯著（P＜0.05），α－AMY 和 K＋的RI的最大值要低于現(xiàn)用RI，且差異極顯著（P＜0.01）；GLU的RI的最大值顯著高于現(xiàn)用RI（P＜0.05），CK、ALB、GGT和ALP的RI的最大值極顯著高于現(xiàn)用RI（P＜0.01）。

表2 偏態(tài)分布項(xiàng)目

表3 正態(tài)分布項(xiàng)目

3 討論

現(xiàn)今動(dòng)物醫(yī)院所使用的生化RI大多數(shù)是指群體中間95%的值，也就是說，群體中5%的健康個(gè)體的值是落在RI之外的。因此，沒有一個(gè)RI是完全“正確”或“錯(cuò)誤”的，只有切合實(shí)際情況的RI才是最好的［2］。

動(dòng)物的生化RI取決于許多因素，包括環(huán)境、年齡、品種、性別、營(yíng)養(yǎng)狀況、活動(dòng)情況和采樣方法等。如Tian等（2005）研究發(fā)現(xiàn)來自不同區(qū)域、不同供犬者的比格犬的ALT、AST和BUN值之間有差異［3］。Nielsen等（2010）發(fā)現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)RI不同，大丹犬的 ALP、GGT、AMY 和γCHO 的 RI寬度更大［4］。Kley等（2003）發(fā)現(xiàn)尋回犬的 TP值較低［5］。Fukuda等（1999）發(fā)現(xiàn)性別會(huì)影響犬的TP、CRE、AST、ALT和 ALP值［6］。

本調(diào)查中，AST、AMY、CK、GGT 和 ALP的RI與現(xiàn)用RI有差異。本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得犬的AST的RI為16～35U／L，現(xiàn)用RI為8～38 U／L，而Tian等（2005）統(tǒng)計(jì)所得比格犬的AST的RI為5.9～64.7U／L［3］，Kley等（2003）統(tǒng)計(jì)所得成年犬的AST的RI為16～96U／L［5］。可見，本調(diào)查所得AST的RI均落在上述RI內(nèi)。許多動(dòng)物組織都含AST，在肝臟和骨骼肌含量較多。犬的品種、性別、年齡和環(huán)境都會(huì)對(duì)AST值產(chǎn)生影響，推測(cè)正是由于參與本調(diào)查的犬所處地域、品種、年齡和性別分布情況與其他調(diào)查研究有差異，導(dǎo)致RI存在差異。此外，在比較酶的RI時(shí)，很重要的一點(diǎn)是要知道檢測(cè)時(shí)的溫度。例如，在37℃檢測(cè)所得ALP和CK活性是在30℃時(shí)檢測(cè)的兩倍［7］。

本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得犬的AMY的RI為249～1175U／L，而現(xiàn)用 RI為300～2000U／L，Kley等（2003）調(diào)查研究所得AMY的RI為249～1767U／L［5］，可見現(xiàn)用RI的上限設(shè)定過高。但是AMY的半衰期很短，AMY值可能會(huì)在幾天內(nèi)發(fā)生極顯著變化，因此最好是在幾天內(nèi)取一系列樣本進(jìn)行測(cè)定。本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得犬的CK的RI為48～346U／L，現(xiàn)用RI為8～200 U／L，其他調(diào)查研究所得RI為28～1516U／L［5］、45～135 U／L［8］和60～359 U／L［9］。可見在不同調(diào)查研究中所獲得的CK的RI差異均很大，這是由于犬的CK值在個(gè)體內(nèi)差異很高，可能與個(gè)體間差異一樣高，變異相關(guān)系數(shù)范圍高達(dá)13%～35%，其中導(dǎo)致個(gè)體內(nèi)差異的主要因素是活動(dòng)量，如灰獵犬和西伯利亞愛斯基摩犬在賽跑后，CK值可上升至高于上限13倍［9］。此外，生化檢查結(jié)果可能由于采樣操作不正確，使得血管周圍組織污染血樣，導(dǎo)入了基質(zhì)或酶，導(dǎo)致結(jié)果受影響，如CK值會(huì)因采樣時(shí)扎針方法不準(zhǔn)確，導(dǎo)致值升高［10］。本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得GGT的RI為1.1～7.4U／L，現(xiàn)用RI為0～6.4U／L，其他調(diào)查研究所得RI為1～9U／L［5］，可見現(xiàn)用GGT上限略低。本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得ALP的RI為7～119U／L，現(xiàn)用RI為0～80U／L，其他調(diào)查研究所得 RI為13～336.4 U／L［3］和8～234U／L［5］，可見現(xiàn)用 RI寬度過窄，上限值過低。ALP是一種在大多數(shù)組織（骨、腸、腎和肝）均存在的酶，其活性隨年齡增長(zhǎng)而降低［5］。應(yīng)注意使用基于群體而獲得的RI來評(píng)判生化結(jié)果的前提假設(shè)群體存在同質(zhì)性。而基于群體的RI的診斷敏感度取決于RI的寬度是由個(gè)體內(nèi)或個(gè)體間差異導(dǎo)致的。如果主要由個(gè)體間差異導(dǎo)致，那么基于群體的RI對(duì)個(gè)體本身的變化不敏感。對(duì)于犬的ALP來說，個(gè)體間差異占主導(dǎo)地位，因此基于群體決定的ALP的RI的診斷敏感度不高，也就是說ALP的RI的臨床診斷意義不大［4］。

本調(diào)查統(tǒng)計(jì)中，Na＋、K＋、Cl－、GLU和 ALB的RI與現(xiàn)用RI存在差異。其中Na＋、K＋和Cl－的RI雖然與現(xiàn)用RI有差異，但均落在現(xiàn)用RI之內(nèi)。早期血漿／血清中的離子檢測(cè)是使用火焰光譜法，現(xiàn)在多用離子電解技術(shù)檢測(cè)，但兩種方法檢測(cè)所獲得的RI差異均不顯著。本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得GLU的RI為5.1～7.9mmol／L，現(xiàn)用 RI為3.3～6.7mmol／L，其他調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得為3.26～7.29mmol／L［5］。除了疾病因素外，臨床上影響GLU值的因素主要是采樣時(shí)動(dòng)物掙扎、應(yīng)激，導(dǎo)致GLU升高［5］。此外，如果采樣后不及時(shí)將血漿與紅細(xì)胞分離，會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)入血漿或紅細(xì)胞消耗血漿內(nèi)的一些物質(zhì)（主要是葡萄糖），使測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確［11］。本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得ALB的RI為30～42g／L，現(xiàn)用RI為24～38g／L，其他統(tǒng)計(jì)調(diào)查結(jié)果為21.5～40.3g／L［3］和27.4～43.1g／L［5］。可見，ALB現(xiàn)用 RI的上限偏低，這可能是由于隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，現(xiàn)今犬的飲食質(zhì)量得到極顯著改善，飲食中蛋白質(zhì)含量和質(zhì)量均得到提高，導(dǎo)致犬消化吸收的蛋白含量升高，體內(nèi)蛋白合成增加，循環(huán)系統(tǒng)中蛋白水平升高。

綜上所述，本調(diào)查統(tǒng)計(jì)所得的 AST、AMY、CK、GGT、ALP、Na＋、K＋、Cl－、GLU和 ALB的RI與現(xiàn)用RI存在差異，說明為在臨床通過生化檢查獲得更準(zhǔn)確的診斷結(jié)果，有必要根據(jù)實(shí)際情況統(tǒng)計(jì)建立合適的RI。

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