糖尿病大鼠血、尿TGF－β1的相關性及糖腎安對其表達的影響

王鎂，吳兆利，鄭曙琴，王哲，伊桐凝，南春紅，岳志軍

(1.遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧 沈陽 110032;2.遼寧中醫藥大學，遼寧 沈陽 110032)

糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Diabetes mellitus，DM)最主要的慢性并發癥之一，轉化生長因子 β1(Transforming growth factor－beta1，TGF－β1)是DN復雜的細胞因子網絡中的核心因子，是腎臟損傷的關鍵致病因子，有研究表明TGF－β1高表達與DN腎纖維化進程有關［1］。

1 材料和方法

方法:雄性Wistar大鼠按照55mg/Kg腹腔注射2%STZ溶液，72h后眶靜脈取血測血糖≥16.7mmol/L者納入實驗。將成模大鼠隨機分3組，另設空白對照組，中藥組予糖腎安煎劑(黃芪、茯苓、白術、丹參、山茱萸等組成)灌胃，9.0ml/kg/d;西藥組予厄貝沙坦(賽諾菲安萬特提供)蒸餾水溶液0.3 ml/kg/d，模型對照組和空白對照組予等容積蒸餾水;每日1次，共8周。8周末用金屬代謝籠準確收集24h尿液標本，取4ml離心后保存，待測尿 mALB、TGF－β1水平;用20%烏拉坦腹腔麻醉大鼠，腹主動脈取血離心分離血清，測定血糖、TGF－β1水平，血尿TGF－β1采用雙抗體夾心ELISA法，實驗步驟嚴格按說明書進行;經左心室注入4℃預冷生理鹽水反復灌洗后至腎臟轉為蒼白色，取部分腎皮質置于多聚甲醛固定液中24h后，制作石蠟標本、切片，進行HE染色和PAS染色。

2 統計學處理

3 結果

3.1 各組血、尿TGF－β1、尿mALB水平的變化

8周后各組血、尿TGF－β1和mALB水平的變化見表1，模型組大鼠血、尿TGF－β1、mALB明顯高于正常組(P＜0.01)，中藥組、西藥組明顯低于模型組(P＜0.01)，與空白對照組比較無統計學差異(P＞0.05)。

表1 各組血、尿TGF－β1、mALB比較(s)

表1 各組血、尿TGF－β1、mALB比較(s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

空白對照組8 77.4 ±3.1 76.1 ±6.3 72.2 ±8.2模型組 9 97.3 ±14.0＊＊ 104.2 ±12.5＊＊ 102.4 ±13.7＊＊中藥組 9 82.4 ±7.7△△ 86.4 ±13.1△△ 83.3 ±11.5△△西藥組 7 84.4 ±9.7△△ 81.8 ±16.5△△ 81.4±9.4△△

3.2 血TGF－β1與尿TGF－β1的相關分析

各組血TGF－β1與尿TGF－β1進行相關分析結果均呈顯著正相關(P＜0.05)，見表2。

表2 各組血TGF－β1與尿TGF－β1的相關分析

3.3 糖腎安對糖尿病大鼠腎臟組織的病理學影響

3.3.1 HE 染色

正常大鼠腎臟結構清楚，細胞核呈藍色，胞漿呈粉紅色。模型組腎小球毛細血管壁狹窄甚至閉塞，并可見部分腎小管上皮細胞空泡變性。中藥組、西藥組腎小球毛細血管壁狹窄甚至閉塞較模型組減輕，見圖1。

3.3.2 腎臟組織PAS染色

正常組腎小球結構正常，未見明顯的腎小球系膜增生及基底膜增厚，模型組腎小球基底膜成分明顯增加，而中藥組、西藥組的基底膜成分較模型組明顯降低，見圖2。

圖2 各組腎臟組織PAS染色(PAS，400×)結果

4 討論

DN的發病機制尚未完全闡明，各種細胞因子影響著腎小球血液動力學、細胞外基質代謝、細胞增殖和肥大，其中TGF－β1可能是各種內源性和外源性刺激引起正常腎組織纖維化發生的主要細胞因子［2］。它能選擇性的增加ECM的合成，減少ECM的降解。在DN狀態下，TGF－β1及其受體水平在腎臟局部增高，從而促進其基因表達水平升高［3］，使腎小球基底膜的通透性增強，尿蛋白排泄明顯增高。

糖腎安由黃芪、茯苓、白術、丹參、山茱萸等組成。已有臨床研究表明，糖腎安能降低DN患者尿蛋白排泄量，改善乏力水腫等癥狀，還具有抗氧化應激作用［4－5］。方中黃芪可以減輕腎小球基底膜病變，抑制腎臟肥大，從而減少尿蛋白排出，亦可部分糾正糖尿病早期的腎臟高灌注、高濾過，對腎臟具有保護作用［6］。丹參對糖尿病早期腎病患者血漿內皮素(ET－1)、Ⅳ型膠原(CⅣ)和24h尿白蛋白排泄率水平均有不同程度降低。可抑制ET－1產生和CⅣ的合成［7］。在糖化終產物(AGEs)培養腎小球系膜細胞加入山茱萸提取物環烯醚萜總苷后細胞異常增殖明顯減少，細胞形態趨于正常［8］。

本實驗證明，糖尿病大鼠8周后血尿TGF－β1水平比正常組明顯升高，尿mALB水平明顯升高。血、尿液TGF－β1與尿微量白蛋白具有相關性，糖腎安有效地降低了尿mALB和血尿TGF－β1的水平。減少糖尿病大鼠尿mALB，減輕了腎小球病理學改變，其對DN的防治作用可能與抑制TGF－β1的表達，預防纖維化發生有關。本研究結果顯示，糖腎安能減輕腎小球毛細血管壁的狹窄和閉塞，以及腎小球系膜的增生及基底膜增厚。

［1］Yu HT.Progression of the chronic renal failure［J］.Arch Intern Med，2003，163(12):1417 －1429.

［2］Chen S，Hong SW，Iglesia DE － LA，et al.The key role of the transforming growth factor－beta system in the pathogenesis of diabetic nephropathy［J］.Renal Fail，2001，23(6):470 －481.

［3］Tamaki K，Yoshimura J，Okuda S.Molecular biology in regulation of kidney function:TGF－beta(transforming growth factor－beta)［J］.Nippon Rinsho，2006，64(Suppl2):297 －301.

［4］王鎂，韓波.糖腎安對Ⅳ期糖尿病腎病尿蛋白排泄影響的臨床觀察［J］.中醫藥學報，2007，35(2):60 －61.

［5］曹光，王鎂.糖腎安煎劑對糖尿病大鼠氧化應激影響的研究［J］.中華中醫藥學刊，2009，27(4):761 －762.

［6］楊瑞峰.黃芪注射液治療糖尿病腎病56例［J］.醫藥論壇雜志，2006，27(16):84.

［7］李中和，張建明，霍飛蛟.丹參對糖尿病早期腎病患者血漿內皮素和 IV 型膠原的影響［J］.中國綜合臨床，2002，18(7):49 －50.

［8］許惠琴，劉洪，沈健，等.山茱萸環烯醚萜總苷對AGEs培養腎小球系膜細胞的影響［J］.中國藥理學通報，2006，18(4):53 －57.