臨床免疫檢驗的質控探析

王硯冰

(鐵嶺市中心血站 遼寧鐵嶺 112000)

1 如何采集與保存臨床標本

1.1 采集

在臨床免疫測定中,最常見的臨床標本就是血清(漿),當然,為了某些特殊的檢測目的,有時也要用到唾液、尿液、腦脊液、糞便等等這類的標本。其采集過程是一個重要的環節通,正確的采集能夠保證標本的質量。影響標本的質量的因素主要包括:采集的時間、采血的姿勢、抗凝劑與穩定劑的選用、止血帶的使用時間等等。而對于一些激素類以及治療藥物的測定則要求血清標本收集要特別注意時間問題,甚至有些體位上的變化都可能影響到產生的測定結果。舉例來說,在每天早上的4～6點間,常常出現一個峰值,而生長激素和促卵泡激素以及促黃體激素都在此時以一種陣發性的方式釋放掉,所以在測定這類激素時候,非常有必要在差值較小的時間間隔以內重復采取多份血液樣本,然后以中間值作為測定值。

1.2 保存

在完成了標本的采集之后,應該盡量地減少運輸以及儲存時間,并且盡快處理和檢測,不可放置過長時間。特別是利用電化學的發光免疫測定來檢測神經元的特異性烯醇化酶時,最好時間實在采集后的2h以內,不然標本內的紅細胞與血小板會因為代謝而持續地釋放出NSE,從而導致檢測的結果升高。如果血清標本是在無菌操作下分離,就可以在2～8°的環境下保存1周的時間。如果是在有菌操作的情況下就應該冷凍保存。如果標本需要長時間的保存,就應該在-80°的冰箱中保存。要避免將已經凍存的標本反復的凍融,因為這樣會破壞標本內的蛋白分子,結果會引起假陰性的結果。與此同時,混勻凍融標本的時候不要劇烈的振蕩,只要反復顛倒混勻就可以,如果出現了混濁或者絮狀物的時候,就應該將其離心沉淀以后選擇上清液并進行檢測。

2 可能影響檢測結果的因素

2.1 外源性的干擾因素

外源性的干擾方面主要分為標本細菌污染、長時間的儲存、標本溶血和不能完全凝固等等。有效防止標本溶血能夠使標本的質量在關鍵階段得到保證,如果出現了溶血現象,那就是在采血時的習慣不正確或者是采血器具質量不好。血紅蛋白含有血紅素基團,它的活性與過氧化物相近,因此測定時,如果使用了ELISA,將HRP作為它的標記酶,如血清標本里有比較濃厚的血紅蛋白,所以很可能會在溫育時吸附在了固相,然后與后面的HRP底物的殘生發生反應從而顯色。用ECLIA的免疫法來檢測NSE,結果發現溶血對其有顯著的影響。所以在實驗室中如果看見了顯性為溶血標本以后,一定要對它進行辨別和確認,觀察它是技術性的溶血還是病理性的溶血。應該把病理性的溶血(即體內溶血)排除,棄置的同時也要對溶血標本做好記錄。最好的方法是重新采血工,如果重新采血這項工作不易完成,應該在檢驗報告上標注好“標本溶血”和溶血將會影響這個檢驗的因素。

2.2 內源性的干擾因素

通常的情況下,內源性的干擾因素包括了類風濕因子、異嗜性的抗體、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、自身抗體等等。在血清(漿)的標本的檢查中,上上面提到的干擾物質都在不同的程度上有較大比例的存在,就很可能導致測定結果呈現出假陽性。所以為了在ELISA的檢驗測定中免除上述因素的干擾,一般都會用稀釋標本這種方法來稀釋這種非特異的RF的滴度,減小對測定結果造成的不良影響,從而確保相關的檢測項目的結果可靠且有價值,于此同時,也可以改變酶標抗體或者預先封閉標本中的PF,在測定抗原的時候,向標本中加入能夠使RF降解的一些還原劑或者是有特異性的雞抗體來消除干擾[1]。

3 檢測前的試劑準備

在臨床免疫檢測中,不管是ELISA還是ECLIA免疫的測定,如何準備試劑也至關重要。切記不要在實驗的時候才把試劑拿出來,因為之前試劑一直在冰箱里低溫保存,這樣會影響到后面的溫育,因為時間很可能不夠用,導致的直接后果就是對于一些定性測定的弱陽性的標本檢測會出現假陰性現象或者檢測的結果偏低。因此在測定中準備試劑的最關鍵的內容就是在實驗要開始前20～30min內把試劑從冰箱里拿出來,放置平衡一直到達到室溫時再來測定,來減少檢測的誤差。而理想的樣本應該是所含待測物濃度接近臨床的決定性的水平,均勻穩定,沒有傳染的危險性,單批就可大量的獲得。

4 結語

在臨床免疫的檢驗過程中,保證實驗結果能夠準確的最重要的環節就是對其質量進行更加全面的管理。免疫檢驗質量的好壞能直接影響疾病的治療結果,所以這應該成為醫院診斷治療工作一項的重要環節。因為標本從患者開始到實驗室的分析前有很多的環節,許多的因素都可能造成檢驗結果的誤差,比如標本的采集和保存,試劑準備以及儀器核定,內、外源性的干擾等等,所以醫院需要建立起檢驗耗材的信息網絡,做好標本的采集和保存以及檢驗的各環節的詳細記錄。臨床醫師也一是要更加全面地掌握好患者的各種生理以及病理情況,而護理和檢驗人員也要熟悉地掌握會影響到檢驗的種種因素,嚴格地按照標準和規范來做,來保證標本及檢驗的結果的高品質。

[1] 高仲先.臨床免疫檢驗的質量控制分析[J].中國中醫藥咨訊,2010,2(12):206.