臨床免疫檢驗(yàn)的質(zhì)控探析

王硯冰

(鐵嶺市中心血站 遼寧鐵嶺 112000)

1 如何采集與保存臨床標(biāo)本

1.1 采集

在臨床免疫測(cè)定中,最常見(jiàn)的臨床標(biāo)本就是血清(漿),當(dāng)然,為了某些特殊的檢測(cè)目的,有時(shí)也要用到唾液、尿液、腦脊液、糞便等等這類的標(biāo)本。其采集過(guò)程是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)通,正確的采集能夠保證標(biāo)本的質(zhì)量。影響標(biāo)本的質(zhì)量的因素主要包括:采集的時(shí)間、采血的姿勢(shì)、抗凝劑與穩(wěn)定劑的選用、止血帶的使用時(shí)間等等。而對(duì)于一些激素類以及治療藥物的測(cè)定則要求血清標(biāo)本收集要特別注意時(shí)間問(wèn)題,甚至有些體位上的變化都可能影響到產(chǎn)生的測(cè)定結(jié)果。舉例來(lái)說(shuō),在每天早上的4～6點(diǎn)間,常常出現(xiàn)一個(gè)峰值,而生長(zhǎng)激素和促卵泡激素以及促黃體激素都在此時(shí)以一種陣發(fā)性的方式釋放掉,所以在測(cè)定這類激素時(shí)候,非常有必要在差值較小的時(shí)間間隔以內(nèi)重復(fù)采取多份血液樣本,然后以中間值作為測(cè)定值。

1.2 保存

在完成了標(biāo)本的采集之后,應(yīng)該盡量地減少運(yùn)輸以及儲(chǔ)存時(shí)間,并且盡快處理和檢測(cè),不可放置過(guò)長(zhǎng)時(shí)間。特別是利用電化學(xué)的發(fā)光免疫測(cè)定來(lái)檢測(cè)神經(jīng)元的特異性烯醇化酶時(shí),最好時(shí)間實(shí)在采集后的2h以內(nèi),不然標(biāo)本內(nèi)的紅細(xì)胞與血小板會(huì)因?yàn)榇x而持續(xù)地釋放出NSE,從而導(dǎo)致檢測(cè)的結(jié)果升高。如果血清標(biāo)本是在無(wú)菌操作下分離,就可以在2～8°的環(huán)境下保存1周的時(shí)間。如果是在有菌操作的情況下就應(yīng)該冷凍保存。如果標(biāo)本需要長(zhǎng)時(shí)間的保存,就應(yīng)該在-80°的冰箱中保存。要避免將已經(jīng)凍存的標(biāo)本反復(fù)的凍融,因?yàn)檫@樣會(huì)破壞標(biāo)本內(nèi)的蛋白分子,結(jié)果會(huì)引起假陰性的結(jié)果。與此同時(shí),混勻凍融標(biāo)本的時(shí)候不要?jiǎng)×业恼袷?只要反復(fù)顛倒混勻就可以,如果出現(xiàn)了混濁或者絮狀物的時(shí)候,就應(yīng)該將其離心沉淀以后選擇上清液并進(jìn)行檢測(cè)。

2 可能影響檢測(cè)結(jié)果的因素

2.1 外源性的干擾因素

外源性的干擾方面主要分為標(biāo)本細(xì)菌污染、長(zhǎng)時(shí)間的儲(chǔ)存、標(biāo)本溶血和不能完全凝固等等。有效防止標(biāo)本溶血能夠使標(biāo)本的質(zhì)量在關(guān)鍵階段得到保證,如果出現(xiàn)了溶血現(xiàn)象,那就是在采血時(shí)的習(xí)慣不正確或者是采血器具質(zhì)量不好。血紅蛋白含有血紅素基團(tuán),它的活性與過(guò)氧化物相近,因此測(cè)定時(shí),如果使用了ELISA,將HRP作為它的標(biāo)記酶,如血清標(biāo)本里有比較濃厚的血紅蛋白,所以很可能會(huì)在溫育時(shí)吸附在了固相,然后與后面的HRP底物的殘生發(fā)生反應(yīng)從而顯色。用ECLIA的免疫法來(lái)檢測(cè)NSE,結(jié)果發(fā)現(xiàn)溶血對(duì)其有顯著的影響。所以在實(shí)驗(yàn)室中如果看見(jiàn)了顯性為溶血標(biāo)本以后,一定要對(duì)它進(jìn)行辨別和確認(rèn),觀察它是技術(shù)性的溶血還是病理性的溶血。應(yīng)該把病理性的溶血(即體內(nèi)溶血)排除,棄置的同時(shí)也要對(duì)溶血標(biāo)本做好記錄。最好的方法是重新采血工,如果重新采血這項(xiàng)工作不易完成,應(yīng)該在檢驗(yàn)報(bào)告上標(biāo)注好“標(biāo)本溶血”和溶血將會(huì)影響這個(gè)檢驗(yàn)的因素。

2.2 內(nèi)源性的干擾因素

通常的情況下,內(nèi)源性的干擾因素包括了類風(fēng)濕因子、異嗜性的抗體、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、自身抗體等等。在血清(漿)的標(biāo)本的檢查中,上上面提到的干擾物質(zhì)都在不同的程度上有較大比例的存在,就很可能導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果呈現(xiàn)出假陽(yáng)性。所以為了在ELISA的檢驗(yàn)測(cè)定中免除上述因素的干擾,一般都會(huì)用稀釋標(biāo)本這種方法來(lái)稀釋這種非特異的RF的滴度,減小對(duì)測(cè)定結(jié)果造成的不良影響,從而確保相關(guān)的檢測(cè)項(xiàng)目的結(jié)果可靠且有價(jià)值,于此同時(shí),也可以改變酶標(biāo)抗體或者預(yù)先封閉標(biāo)本中的PF,在測(cè)定抗原的時(shí)候,向標(biāo)本中加入能夠使RF降解的一些還原劑或者是有特異性的雞抗體來(lái)消除干擾[1]。

3 檢測(cè)前的試劑準(zhǔn)備

在臨床免疫檢測(cè)中,不管是ELISA還是ECLIA免疫的測(cè)定,如何準(zhǔn)備試劑也至關(guān)重要。切記不要在實(shí)驗(yàn)的時(shí)候才把試劑拿出來(lái),因?yàn)橹霸噭┮恢痹诒淅锏蜏乇４?這樣會(huì)影響到后面的溫育,因?yàn)闀r(shí)間很可能不夠用,導(dǎo)致的直接后果就是對(duì)于一些定性測(cè)定的弱陽(yáng)性的標(biāo)本檢測(cè)會(huì)出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象或者檢測(cè)的結(jié)果偏低。因此在測(cè)定中準(zhǔn)備試劑的最關(guān)鍵的內(nèi)容就是在實(shí)驗(yàn)要開(kāi)始前20～30min內(nèi)把試劑從冰箱里拿出來(lái),放置平衡一直到達(dá)到室溫時(shí)再來(lái)測(cè)定,來(lái)減少檢測(cè)的誤差。而理想的樣本應(yīng)該是所含待測(cè)物濃度接近臨床的決定性的水平,均勻穩(wěn)定,沒(méi)有傳染的危險(xiǎn)性,單批就可大量的獲得。

4 結(jié)語(yǔ)

在臨床免疫的檢驗(yàn)過(guò)程中,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果能夠準(zhǔn)確的最重要的環(huán)節(jié)就是對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行更加全面的管理。免疫檢驗(yàn)質(zhì)量的好壞能直接影響疾病的治療結(jié)果,所以這應(yīng)該成為醫(yī)院診斷治療工作一項(xiàng)的重要環(huán)節(jié)。因?yàn)闃?biāo)本從患者開(kāi)始到實(shí)驗(yàn)室的分析前有很多的環(huán)節(jié),許多的因素都可能造成檢驗(yàn)結(jié)果的誤差,比如標(biāo)本的采集和保存,試劑準(zhǔn)備以及儀器核定,內(nèi)、外源性的干擾等等,所以醫(yī)院需要建立起檢驗(yàn)耗材的信息網(wǎng)絡(luò),做好標(biāo)本的采集和保存以及檢驗(yàn)的各環(huán)節(jié)的詳細(xì)記錄。臨床醫(yī)師也一是要更加全面地掌握好患者的各種生理以及病理情況,而護(hù)理和檢驗(yàn)人員也要熟悉地掌握會(huì)影響到檢驗(yàn)的種種因素,嚴(yán)格地按照標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范來(lái)做,來(lái)保證標(biāo)本及檢驗(yàn)的結(jié)果的高品質(zhì)。

[1] 高仲先.臨床免疫檢驗(yàn)的質(zhì)量控制分析[J].中國(guó)中醫(yī)藥咨訊,2010,2(12):206.