色譜法在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用

曹 玲，王志剛，王連芝

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150040

色譜法在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用

曹 玲，王志剛，王連芝

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150040

本文介紹了色譜法在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用，并對高效液相色譜法和氣相色譜法在構(gòu)建中藥指紋圖譜中優(yōu)勢作以介紹，綜述了近年此3種方法的應(yīng)用進(jìn)展，并介紹了中藥指紋圖譜在2010版《中國藥典》中的應(yīng)用情況。

指紋圖譜；色譜；中藥；中國藥典

中藥材指紋圖譜系指中藥材經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示該中藥材特性的共有峰的圖譜[1]。美國食品與藥品管理局（FDA）關(guān)于植物藥物質(zhì)和植物藥產(chǎn)品的質(zhì)量控制部分鑒別項(xiàng)下就包括指紋圖譜[2]，世界衛(wèi)生組織（WHO）在其草藥評(píng)價(jià)指南中，對植物藥制品和最終產(chǎn)品要求若有效成分不能鑒別，可提供特征成分或混合成分即色譜指紋圖譜鑒別來保證產(chǎn)品質(zhì)量的一致性[3]。我國于2000年國家藥品監(jiān)督管理局頒布了《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）》[1]，自此，指紋圖譜的研究進(jìn)入了蓬勃時(shí)期，特別是在新版藥典2010《中國藥典》一部中，根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論和中藥成分復(fù)雜的特點(diǎn)，建立了能反映中藥整體特性的色譜指紋圖譜方法，以保證質(zhì)量的穩(wěn)定、均一[4]。色譜指紋圖譜分析將是鑒別中藥真實(shí)性及評(píng)價(jià)質(zhì)量一致性和產(chǎn)品穩(wěn)定性的實(shí)際可行的模式[5]。

中藥指紋圖譜的測定方法很多，主要包括色譜法、光譜法和生物學(xué)法。在這些測定方法中，色譜法的應(yīng)用最廣泛，特別是氣相色譜法和高效液相色譜法，是當(dāng)前研究中藥指紋圖譜時(shí)優(yōu)先考慮的方法。

1 氣相色譜法

氣相色譜法具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高、檢測器類型可選性大等特點(diǎn)，氣相色譜法可以分析氣體樣品，也可分析易揮發(fā)或可衍生化為易揮發(fā)的液體和固體。只要沸點(diǎn)在500℃以下，熱穩(wěn)定性好，相對分子質(zhì)量在400以下的成分，原則上都可用氣相色譜法進(jìn)行分析，尤其適用于含揮發(fā)性成分的中藥指紋圖譜研究。氣相色譜法與高效液相色譜相較而言，具有分離效能高特別是毛細(xì)管氣相色譜，色譜柱長度可達(dá)100 m，使其理論塔板數(shù)能達(dá)100多萬，能夠分離一些分配系數(shù)很接近的以及極為復(fù)雜、難以分離的物質(zhì)，特別符合中藥及制劑指紋圖譜研究的要求。由于氣相色譜法使用了靈敏度很高的檢測器，可以檢測10-13～10-11g物質(zhì)，適合于痕量分析，如中藥中的農(nóng)藥殘留量的指紋圖譜檢測。

近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了很多實(shí)用性更強(qiáng)的技術(shù)，如裂解氣相色譜法、頂空氣相色譜法、毛細(xì)管氣相色譜法以及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）、氣相色譜-傅里葉變換紅外光譜（GC-IR）聯(lián)用技術(shù)等。如陳衛(wèi)東等[6]建立了離線裂解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（P-GC/MS）研究中藥指紋圖譜的測定方法。陳麗娟等[7]采用GC-MS法建立了麝冰菖噴霧劑GC-MS指紋圖譜。陳成等[8]采用頂空-固相微萃取（SPME）技術(shù)直接提取辛夷中的揮發(fā)性成分，并進(jìn)行了氣相色譜分析，建立了辛夷氣相色譜指紋圖譜。

在2010版《中國藥典》一部中，建立了能反映中藥整體特性的色譜指紋圖譜方法，其中滿山紅油采用毛細(xì)管氣相色譜法進(jìn)行檢測，標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了其特征圖譜，并且給出了特征對照圖譜。薄荷素油也是采用毛細(xì)管氣相色譜法進(jìn)行檢測，在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了其指紋圖譜，并規(guī)定按中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不低于0.90[4]。

2 高效液相色譜法

高效液相色譜法具有靈敏度高、選擇性高、高速度、高效能、檢測器種類多和應(yīng)用廣泛等特點(diǎn)。與氣相色譜法相較而言，高效液相色譜法最大的優(yōu)勢在于其供試品不受樣品蒸汽壓和熱穩(wěn)定性的限制，適用范圍非常廣，而且高效液相色譜儀比氣相色譜儀更普及，目前已成為建立中藥指紋圖譜的最常用方法。高效液相色譜法的檢測器在構(gòu)建中藥指紋圖譜中具很大優(yōu)勢，如光電二極管陣列檢測器（DAD）可將色譜峰的保留時(shí)間和光譜信息整合在1張圖譜中，能夠得到三維譜圖，適合分析成分復(fù)雜且有紫外吸收的樣品，而中藥中的活性成分如黃酮、蒽醌等大多數(shù)成分均有紫外吸收，因此DAD非常適合中藥成分的檢測。此外，LC-MS和LC-MS-MS等聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用，使得高效液相色譜法的分辨率和實(shí)用性顯著提高，更有利于中藥這一復(fù)雜樣品的分析。再有近幾年出現(xiàn)了一種新的液相色譜技術(shù)—超高效液相色譜法 （UPLC），該法能顯著改善色譜峰的分離度和檢測靈敏度，適合中藥復(fù)雜樣品的分析及構(gòu)建中藥的指紋圖譜。

如盧紅梅等[9]采用均勻?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)和信息理論評(píng)價(jià)的方法，建立魚腥草中黃酮類成分的高效液相色譜指紋圖譜的分析方法。李蓓佳等[10]利用液相-二極管陣列-質(zhì)譜聯(lián)用（LCDAD-MS）技術(shù)，在通脈顆粒中鑒定了22個(gè)化合物，且歸屬了各化合物的單味藥來源。張鐵軍等[11]采用HPLC-DAD技術(shù)建立了清咽滴丸極性部分的HPLC指紋圖譜。王洪蘭等[12]采用高效液相色譜-二極管陣列-蒸發(fā)光散射檢測方法，建立瓜子金藥材的指紋圖譜。劉卉等[13]采用超高效液相色譜（UPLC）法，建立香丹注射液UPLC-UV指紋圖譜。

在2010《中國藥典》一部中，應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行指紋圖譜測定的植物油脂和提取物非常多，如莪術(shù)油、積雪草總苷、丹參酮提取物、丹參總酚酸提取物、三七總皂苷和三七三醇皂苷都需測定指紋圖譜。而茵陳提取物、腫節(jié)風(fēng)浸膏、連翹提取物、山楂提取物、人參總皂苷和人參莖葉總皂苷均需測定特征圖譜。有一些中藥制劑如注射用雙黃連、復(fù)方丹參滴丸等也需測定指紋圖譜。供試品指紋圖譜按中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，與對照指紋圖譜的相似度不低于 0.90 或 0.95[4]。

3 小結(jié)

用于中藥指紋圖譜分析的色譜法還包括薄層色譜法、高效毛細(xì)管電泳（HPCE）、高速逆流色譜（HSCCC）及超臨界流體色譜（SFC）等方法，這些方法也越來越多的被研究學(xué)者所采用。隨著現(xiàn)代分析手段與科學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，中藥指紋圖譜技術(shù)將會(huì)進(jìn)一步規(guī)范和成熟，特別是2010版《中國藥典》中將指紋圖譜和特征圖譜引入到中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，使指紋圖譜更加得到藥學(xué)工作者的重視，中藥指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的廣泛應(yīng)用，定將加速中藥與國際天然藥物研究先進(jìn)水平接軌，從而推動(dòng)中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化的進(jìn)程。

[1]國家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于印發(fā)《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》的通知[J].中成藥,2000,22(10):671.

[2]FDA.Guidance for Industry-Botanical Drug Products(Draft Guidance)[S].2000:Ⅷ,B,2e,3e.

[3]WHO.Guidelines for the Assessment of Herbal Medicines[S].1996.

[4]國家藥典委員會(huì).中國藥典[M].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[5]謝培山.色譜指紋圖譜分析是中草藥質(zhì)量控制的可行策略[J].中藥新藥與臨床藥理,2001,12(3):141-151.

[6]陳衛(wèi)東,詹慶豐,吳萍,等.裂解-氣相色譜-質(zhì)譜法對中藥材指紋圖譜的研究[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),2007,28(2):65-72.

[7]陳麗娟,唐洪梅.麝冰菖噴霧劑氣相色譜-質(zhì)譜的指紋圖譜研究[J].海峽藥學(xué),2009,21(11):37-38.

[8]陳成,楊敏,吳寧華,等.辛夷指紋圖譜的頂空固相微萃取氣相色譜聯(lián)用初探[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,13(3):37-38.

[9]盧紅梅,彭麗華,郭方遒,等.魚腥草中黃酮類成分的高效液相色譜指紋圖譜分析[J].色譜,2010,28(10):965-970.

[10]李蓓佳,向誠,楊秀偉,等.應(yīng)用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)研究通脈顆粒的指紋圖譜[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2010,45(11):1410-1414.

[11]張鐵軍,韓世柳,田成旺,等.清咽滴丸極性成分的高效液相指紋圖譜及其模式識(shí)別的研究[J].中草藥,2010,41(8):1282-1285.

[12]王洪蘭,姚衛(wèi)峰,朱丹妮,等.不同來源瓜子金藥材的HPLC-DADELSD指紋圖譜和主成分分析[J].中國天然藥物,2010,8(5):343-348.

[13]劉卉,姚衛(wèi)峰,張麗,等.基于超高效液相色譜指紋圖譜輪廓的香丹注射液相似度快速評(píng)價(jià)[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(12):48-50.

Application of chromatography in the study on traditional Chinese medicine fingerprint

CAO Ling,WANG Zhigang,WANG Lianzhi

College of Pharmacy of Heilongjiang Chinese Medicine University in Heilongjiang Province,Harbin 150040,China

Application of chromatography in the study on TCM fingerprint was reviewed.The advantage and latest usage of HPLC and GC on construction of TCM fingerprint together with its application in Chinese Pharmacopeia (2010)were also introduced.

Fingerprint;Chromatography;Traditional Chinese medicine;Chinese pharmacopeia

R286

A

1674-4721（2012）01（a）-016-02

2011-11-09）