HPLC法測定厄貝沙坦膠囊中厄貝沙坦的含量

益 磊 施志順 周志美 李 軍 史學(xué)禮 王雨艨

安徽省亳州市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽亳州 236800

厄貝沙坦為血管緊張素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）受體抑制劑，能抑制AngI轉(zhuǎn)化為AngⅡ，能特異性地拮抗血管緊張素轉(zhuǎn)換酶受體（AT1），對AT1的拮抗作用大于AT28 500倍，通過選擇性地阻斷AngⅡ與AT1受體的結(jié)合，抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產(chǎn)生降壓作用。

厄貝沙坦膠囊為已有國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的藥品，其標(biāo)準(zhǔn)收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)《新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第62冊，標(biāo)準(zhǔn)號為WS1-（X-026）-2005Z。為了使本產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到可控，參照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-026）-2005Z，對本品的含量進(jìn)行了研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10ATvp高效液相色譜儀（蘇州島津公司）；島津SPD-10Avp紫外檢測器（蘇州島津公司）；AB135-S電子天平（d=0.01 mg）（METTLER TOLEDO公 司）；Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm， 5μm，日本島津公司）。

1.2 試藥

厄貝沙坦對照品 （批號：100607-200301），由中國藥品生物制品檢定所提供；厄貝沙坦膠囊（批號：110901、110902、110903）；乙腈HPLC（美國TEDIA公司）；磷酸 （汕頭西隴化工廠）；三乙胺（海金山亭新化工試劑廠）

2 方法與結(jié)果

色譜條件：色譜柱shimpack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：磷酸溶液（取85%磷酸5.5 mL，加水至950 mL，以三乙胺調(diào)節(jié)pH至3.2）-乙腈（62∶38）；檢測波長： 245 nm；進(jìn)樣量：20 μL ；流速：1.0 mL/min。

2.1 陰性干擾試驗(yàn)

取處方量的輔料，按制備工藝操作制成模擬膠囊。精密稱取上述空白輔料適量，按含量測定方法配制供測液。精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，陰性不干擾本法的測定。見圖1 ～ 3。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取供試品溶液，連續(xù)注樣10次，分別記錄每次主峰面積、保留時間、拖尾因子、理論板數(shù)。由系統(tǒng)適用性圖譜可看出,本品理論板數(shù)按厄貝沙坦計算為7 371.236，拖尾因子為1.027。符合中國藥典2010年版二部附錄V D的要求，系統(tǒng)評價圖譜見圖4。

圖1 輔料干擾性試驗(yàn)—陰性圖譜

圖2 輔料干擾性—樣品圖譜

圖3 輔料干擾性—對照圖譜

圖4 系統(tǒng)適應(yīng)性—系統(tǒng)評價圖譜

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍的考察

精密稱得厄貝沙坦工作對照品25.05 mg（標(biāo)定純度為100.6%），置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，精密量取上述溶液 1、2、3、4、5、6、7 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，取此溶液，照正文含量測定項(xiàng)下色譜條件與方法注樣，各濃度注樣2針，取峰面積平均值。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，分別進(jìn)行線性回歸。計算回歸方程、相關(guān)系數(shù)（R）、截距與標(biāo)示濃度響應(yīng)值百分比（B/Y%）結(jié)果見表1，線性結(jié)果見圖5。

回歸方程為A=259 675 62.358C-42853.143 （R=0.999 96，n=7）。且截距與限度濃度響應(yīng)值的比值為-0.83%，曲線通過原點(diǎn)。結(jié)果表明，在0.050 4～0.352 8 mg/mL濃度范圍內(nèi)，本法的線性良好。

2.4 回收率

圖5 厄貝沙坦含量測定線性圖

表1 厄貝沙坦含量測定線性試驗(yàn)結(jié)果

取厄貝沙坦對照品8、10、12 mg，各3份，精密稱定，分別置50 mL量瓶中，加入處方比例的陰性樣品，加流動相適量，振搖使厄貝沙坦溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取厄貝沙坦對照品10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算本法的回收率。結(jié)果表明，本法測定厄貝沙坦含量的回收率高，9份樣品平均回收率均值在98.0～102.0%，RSD＜2.0%。見表2。

表2 厄貝沙坦含量測定方法回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5 重復(fù)性

取同批均質(zhì)樣品（批號：110903）裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于厄貝沙坦10 mg），共10份，分別置50 mL量瓶中，加流動相適量，振搖使厄貝沙坦溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取厄貝沙坦對照品10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算供試品中厄貝沙坦的含量。以含量計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。結(jié)果表明，本品測定厄貝沙坦膠囊含量方法的重復(fù)性較好。見表3。

表3 厄貝沙坦含量測定重復(fù)性試驗(yàn)

2.6 中間精密度

取同批均質(zhì)樣品10份，在另一色譜系統(tǒng)上測定其含量，考察本法的中間精密度。結(jié)果表明，本法測定厄貝沙坦含量中間精密度良好。見表4。

表4 含量測定方法驗(yàn)證—中間精密度數(shù)據(jù)

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取重復(fù)性項(xiàng)下的同一對照溶液與供試品溶液分別于2、4、6、24、48、72、96 h 各注樣 20μL，計算 RSD 值，考察日內(nèi)與日間溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，本法測定厄貝沙坦含量，對照溶液與供試品溶液的日內(nèi)與日間均較穩(wěn)定。見表5。

表5 含量測定方法驗(yàn)證—溶液穩(wěn)定性

3 含量測定

3.1 色譜條件

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸溶液（取85%磷酸5.5 mL，加水至950 mL，以三乙胺調(diào)節(jié)pH至3.2）-乙腈（62∶38）為流動相，檢測波長為245 nm。理論板數(shù)按厄貝沙坦峰計算應(yīng)不低于2 000。

3.2 測定法

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于厄貝沙坦10 mg），置50 mL量瓶中，加流動相適量，振搖使厄貝沙坦溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取厄貝沙坦對照品，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。

取本品3批樣品，照上述方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，110901、110902及110903三批樣品的含量符合要求，分別為99.5%、99.7%和100.1%。

4 討論

該項(xiàng)參照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-026）-2005Z厄貝沙坦膠囊[含量測定]項(xiàng)制定。并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果表明：本法專屬性良好，陰性不干擾檢測，系統(tǒng)適用性良好，厄貝沙坦在0.050 4～0.352 8 mg/mL的濃度范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)大于0.999，且截距與限度濃度響應(yīng)值的比值小于2.0%，曲線通過原點(diǎn)，可使用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算。回歸方程如下：A=25 967 562.358C-42 853.143 （r=0.999 96，n=7）。回收率為99.7%，重復(fù)性、中間精密度良好。供試品與對照品溶液在日內(nèi)與日間均較穩(wěn)定。故本法可用于本品的厄貝沙坦的含量測定。

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