膜式法與離心法TCT檢測結果的對比分析

藍云飛 羅志峰

宮頸癌是我國婦女最常見的惡性腫瘤之一，發病率和病死率僅次于乳腺癌位居第二，它是感染性疾病，是可以預防、可以治愈的疾病[1]。近年來，我國宮頸癌的發生率有上升和年輕化趨勢[2-3]。宮頸液基薄層細胞學檢測（TCT）是細胞學發展里程碑式的突破，按照TBS（The Bethesda System）診斷標準，能為臨床早期診斷宮頸病變提供有力證據，尤其是CIN檢出率達到60%左右。宮頸細胞學是診斷和發現宮頸癌及其癌前病變的有效手段[7]。宮頸癌及癌前病變的早期診斷是提高宮頸癌治療率及生存率的關鍵。筆者所在醫院于2006年6月開展TCT，用于宮頸病變的篩查檢測，因而大大提高了宮頸病變的檢出率，使患者得到早發現，早診斷，早治療，有效降低宮頸癌的發病率。2006年6月-2011年5月用膜式法TCT檢測，2011年6月開始用離心法（Cytospin）TCT檢測。工作中筆者不經意發現離心法TCT陽性病例不少，隨意抽取兩個時段的相同病例數以兩種方法TCT檢測結果進行對比分析，探討不同方法對提高TCT檢出率的作用，現將分析結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2009年1-12月和2011年5-12月筆者所在醫院婦科門診分別有2000例患者接受TCT檢查。年齡17～73歲，平均年齡36歲，將4000例患者按時間段分成兩組，一組是用膜式法TCT檢測2000例，設為膜式組；另一組是用廣州柏嘉生物科技有限公司Cytospin TCT離心法檢測2000例，設為離心組。

1.2 方法 CytospinTCT離心法，取樣標本保存液瓶、宮頸細胞刷、吸管和濾網薄膜是由廣州柏嘉生物科技有限公司提供，膜式法耗材是另外一家公司提供，標本由清遠市婦幼保健醫院婦科門診取材，病理科完成制片和同一醫生閱片。

1.3 取材方法 充分暴露宮頸后用宮頸刷緊貼宮頸管口順時針旋轉5圈，取宮頸管、宮頸移行帶及宮頸表皮細胞，然后將刷頭取下放入盛有固定液的標本瓶中密封并送檢。取樣前若有過多黏液或分泌物必需用棉簽檫拭干凈然后再取樣，以保證取樣為宮頸細胞樣品。膜式法取材與離心法取材基本相同，只是各家細胞保存液和制片方法不同。膜式法是通過儀器高速打散標本瓶內的細胞，然后通過負壓將細胞吸在過濾薄膜上，再將薄膜上細胞轉移印壓在玻片上，2 min制成1張薄片。而離心法是通過離心力分散、過濾、轉移等功能，精確使細胞貼附在限定區內制成12 mm×20 mm的薄片，4 min制成6～12張薄片。兩種方法制定薄片均用95%酒精固定，巴氏染色。

1.4 診斷標準 按TBS診斷標準專人分類報告。分別報告為上皮內低度病變（LSIL）、上皮內高度病變（HSIL）、鱗癌（SCC）、非典型腺上皮（AGC）和腺癌（AIS）。

1.5 統計學處理 采取SPSS 11.0軟件進行統計分析，計數資料采取字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2009年2000例宮頸細胞標本采用膜式法TCT檢測，標本滿意例數1910例，滿意率為95.5%（1910/2000）。其中低度鱗狀上皮內病變（LSIL）236例，檢出率為11.8%（236/2000）；高度鱗狀上皮內病變（HSIL）27例，檢出率為1.35%（27/2000）；鱗癌1例，檢出率為0.05%（1/2000）；非典型腺上皮（AGC）0例，檢出率為0（0/2000）；腺癌0例，檢出率為0（0/2000）；2011年2000例宮頸細胞標本采用離心法（Cytospin）TCT檢測，標本滿意數有1997例，標本滿意率為99.9%（1997/2000）。其中低度鱗狀上皮內病變（LSIL）305例，檢出率為15.3%（305/2000）；高度鱗狀上皮內病變（HSIL）40例，檢出率為2%（40/2000）；鱗癌（SCC）3例，檢出率為0.15%（3/2000）；非典型腺上皮（AGC）6例，檢出率為0.3%（6/2000）；腺癌（AIS）2例，檢出率為0.1%（2/2000）。LSIL、HSIL、SCC、AGC、AIS均有病理組織學證實。兩組宮頸病變檢出與標本滿意情況見表1。

表1 兩組宮頸病變檢出與標本滿意情況 例（%）

3 討論

宮頸癌的早診、早治是提高宮頸癌治愈率及生存率的關鍵，而細胞學檢測是宮頸癌早期病變篩查的主要手段。我國是一個有13 億人口的發展中國家，國民的生活水平在發達的東部沿海地區和人口眾多的西部欠發達地區之間很不一致，就是東部發達地區也有很大的差別，因此在考慮大眾的健康問題時，必須要采用適宜的醫學技術，將一些經濟實用型技術廣泛引入貧困人群的疾病篩查中[7]。Cytospin TCT細胞學技術其保存液能很好保存宮頸各類病變細胞，在4 min內可同時制作6～12張薄層長方形的細胞片，細胞分布均勻，巴氏染色效果好，尤其適合工作量大或體檢任務多的單位使用，避免單張制片的繁瑣[4]。在實際工作中體會到柏嘉公司這一套儀器及耗材經濟、實惠，制片簡便快捷，細胞薄片達到TBS診斷標準的要求，非常實用于我國、尤其是西部欠發達地區開展宮頸癌篩查使用，可替代傳統的宮頸細胞涂片，造福于廣大的婦女同胞。

TCT是近十年發展起來的一項新的檢測技術，檢測方法有膜式法、沉淀法和離心法。膜式法制片過程分為3個步驟：（1）分散：是儀器旋轉瓶內的過濾柱狀桶分離隨機聚合在一起的細胞微粒。（2）收集：輕微的負壓作用于濾膜上，將細胞吸附在濾膜表面。（3）轉送：過濾柱狀桶又轉到玻片上，由于細胞的自然吸附性和玻片的靜電作用，細胞對玻片比對濾膜更具附著力。玻片與濾膜分開并放入固定液容器中[7]。我們隨意用膜式法TCT檢測2009年的病例2000例，用離心法TCT檢測2011年的病例2000例，檢測結果對比分析發現，對LSIL、HSIL、鱗癌、非典型腺上皮、腺癌陽性檢出率和標本滿意率存在差異。膜式法與離心法的臨床取材方法步驟相同，標本保存都是濕保存，只是保存液的量不同，離心法的保存液10 ml量少使標本細胞濃度高，同時保存液有一定去除血液、黏液、非診斷性雜質的作用，而膜式法保存液20 ml量多使標本細胞濃度低，我們認為這可能是導致兩法制片的滿意度差異大的重要原因。

對宮頸癌及癌前病變的檢出率Cytospin TCT離心法明顯高于膜式法TCT，許多病理界同道從不同方向研究得出類似結果。尤燕等研究認為Cytospin離心式液基薄層細胞學檢測（TCT）對宮頸癌和CIN的陽性檢出率高，因此可以把TCT作為首選的宮頸癌普查方法，不僅適用于體檢，而且具有重要的臨床實用價值[4]。孫藝等研究亦認為Cytospin TCT細胞技術能明顯提高宮頸異常細胞的檢出率，且與病理診斷有較高的一致性，是宮頸病變篩查的有效方法，具有重要的臨床實用價值[5-6]。任麗芳等用改良CytospinTCT作免疫組化得出改良cytospin法優于TP （液基薄層制片法，Thinprep，TP）法行免疫細胞化學染色[5]。筆者完全贊同支持上述論文的觀點，20世紀中葉，第一臺Cytospin問世，作為液基細胞薄片制片儀，開創了細胞離心涂片機的先河。迄今，世界各地逾16 000多所實驗室在使用Cytospin。Cytospin以其獨特的制片原理，精確地控制細胞離心力并在限定區域內作薄層制片，成為近40年來細胞學薄層制片技術倍受信賴的儀器。馬博文[7]教授亦撰文指出“離心法即Cytospin離心機式制片裝置，又稱細胞離心涂片機（Cytospin），是利用離心旋轉的原理制備細胞學涂片的一種儀器，由于其兼有離心、過濾、旋轉、轉送等綜合功能，成為細胞學實驗室必備的儀器設備”。

為何兩種方法在非典型腺上皮和腺癌的檢出率上存在明顯差異（P<0.05），筆者認為是制片方法不同所致，膜式法是通過儀器高速旋轉打散標本瓶內的細胞，然后通過負壓將細胞吸在過濾薄膜上，再將薄膜上細胞印壓在玻片上。在儀器高速作用下，對腺上皮細胞的結構容易破壞，這樣不利于對非典型腺上皮和腺癌細胞的辨認。而離心法是通過離心力分散、過濾、轉移標本中的細胞成分，使其在一限定范圍12 mm×20 mm形成細胞薄片，因此對細胞結構破壞少，宮頸腺上皮病變比較容易發現（圖1、2）。因此，離心法TCT技術對診斷宮頸非典型腺上皮和腺癌病變有一定優勢。從兩組研究結果分析可以看出，離心法TCT標本滿意率亦比膜式法高。宮頸癌及癌前病變陽性檢出率明顯優于膜式法TCT。

圖1 左下圖腺細胞輕度異形

圖2 腺細胞明顯異形，組織活檢為腺癌

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