金剛天盾液對免疫力低下小鼠免疫功能的影響

張亞茹 鄭有麗 叢峰松

上海交通大學生命科學技術學院，上海 200240

用現代免疫學理論和技術，研究中藥對增強與調節機體免疫功能的作用，這對闡明有關中醫理論的物質基礎有著十分重要的意義。金剛天盾液由紅腎豆、川芎、蜂膠等數種天然藥物經科學配伍而成。已有的研究發現，金剛天盾液可調整機體各系統臟器的功能，對免疫細胞和免疫分子均有調節作用。本文研究旨在進一步探討金剛天盾液對免疫力低下小鼠免疫調節作用的分子免疫學機制。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 金剛天盾液由貴州天盾免疫制品公司提供;注射用環磷酰胺由上海華聯制藥有限公司提供。細胞因子檢測試劑盒均購于美國 R＆D公司。流式細胞儀，2000FCA，美國BD公司生產。

1.2 動物 昆明系雄性小鼠30只，6-8周，體重為20±2g，由中國科學院上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供(動物生產許可證號：SCXK(滬)2003-0003)。

1.3 方法

1.3.1 動物模型建立與分組 將昆明系雄性小鼠隨機分為3組：空白對照組、模型組和藥物組，每組10只。空白對照組：實驗進程中正常飼養不作任何處理;模型組：腹腔內注射100 mg/kg環磷酰胺造成免疫力低下模型，1次/d，連續3天;藥物組：腹腔內注射100 mg/kg環磷酰胺造成免疫力低下模型，1次/d，連續3天，并在造模第一天在小鼠左脛前肌涂抹給藥，0.1 mL/只，一周后加強免疫1次，劑量同第一次。4d后采集樣本。

1.3.2 小鼠免疫器官指數的測定 小鼠稱量體重后，頸椎脫臼處死小鼠，取胸腺、脾臟稱其濕重，計算胸腺指數和脾指數：

胸腺指數=胸腺重×1000/體重

脾指數=脾重×1000/體重

1.3.3 小鼠血清IgG，IgM水平的測定 按試劑盒說明書方法，測定小鼠血清中IgG，IgM含量。

1.3.4 小鼠脾組織T淋巴細胞及其亞群CD4+，CD8+及CD4+/CD8+的測定 無菌取脾，置于盛有適量無Hank’s液平皿中，用鑷子輕輕將脾磨碎，制成單個胞懸液，經200目篩網過濾，將細胞懸浮于1 mL的完全培養液中，調整細胞濃度1×109L-1，用微量移液器小心地將100μL充分混勻的脾細胞懸液加到進樣管的底部，加20μL單克隆抗體，低速振蕩混勻3 S，室溫避光孵育30 min，于countler-PREP破碎紅細胞后，上流式細胞儀檢測T細胞亞群含量。

1.3.5 小鼠血清IFN-Y、IL-10水平的測定 按試劑盒說明書方法，測定血清中IFN-Y、IL-10的水平。

2 結果

2.1 對免疫力低下小鼠免疫器官的影響 由表1得出，與正常對照組相比，模型組脾臟和胸腺指數顯著降低，差異有統計學意義，P＜0.01。與模型組比較，藥物組小鼠脾臟指數明顯增加，具有統計學意義，P＜0.01，胸腺指數也有所增加，但差異不顯著。

表1 金剛天盾液對免疫力低下小鼠免疫器官重量的的影響 (n=10，mean±s)

2.2 對免疫力低下小鼠血清IgG，IgM水平的影響 由圖1得出，與正常對照組相比，模型組小鼠血清IgG，IgM水平明顯降低，具有統計學意義，P＜0.01。與模型組比較，藥物組小鼠血清Ig G，Ig M水平均明顯增加，具有統計學意義，P ＜0.01。

2.3 對免疫力低下小鼠脾組織T淋巴亞群的影響 由表2看出，與正常對照組相比，模型組小鼠脾臟CD4+細胞亞群百分比下降，CD8+細胞亞群百分比上升，具有顯著差異，P＜0.05，CD4+/CD8+比值明顯降低，具有極顯著性差異，P＜0.01。而藥物組能明顯抵消環磷酰胺破壞免疫力的作用，具有顯著性差異，P＜0.05。

2.4 對免疫力低下小鼠血清IFN-γ、IL-10水平的影響由圖2所示，與正常對照組相比，模型組小鼠IFN-γ明顯降低 ({＜0.01)，IL-10明顯升高。與模型組比較，藥物組小鼠IFN-γ水平明顯增加 (P＜0.01)，IL-10呈降低趨勢。

表2 金剛天盾液對免疫力低下小鼠體液T細胞亞群的的影響 (n=10，mean±SD)

3 結論

胸腺、脾臟為機體的重要淋巴器官。胸腺是T細胞發育，分化，成熟的場地，其結構及功能與機體狀態緊密相關。胸腺指數的降低以及胸腺萎縮，都是小鼠以細胞免疫為主的免疫抑制的表現［1］。脾臟是體內最大的外周免疫器官，脾臟的免疫細胞以B淋巴細胞為主，而B淋巴細胞是參與體液免疫的主要細胞，因此脾臟與機體體液免疫的關系密切［2］。胸腺指數和脾指數直觀的反應了免疫機體功能的強弱［3］。本實驗表明，金剛天盾液對環磷酰胺所致免疫力低下小鼠脾臟的發育有促進作用，對胸腺的發育也有一定的促進作用。

T淋巴細胞按其功能可分為CD4+和CD8+兩個亞群。CD4+T淋巴細胞在機體的免疫反應中處于非常重要的中心地位，它通過分泌多種淋巴因子激活其他T、B細胞亞群及參與免疫反應的其他細胞，使其增殖和分化，并協調免疫細胞間的相互作用，發揮機體免疫系統的功能［4］。CD4+/CD8+的比值上升，提示免疫應答的正調節占優勢，而比值下降，提示免疫功能低下［1］。

本文通過對外周血中T淋巴細胞亞群的測定，表明金剛天盾液能夠使環磷酰胺所致免疫力低下小鼠CD4+T淋巴細胞的百分含量升高，使CD4+/CD8+的比值上升，提示金剛天盾液對T淋巴細胞免疫系統起正調節作用。

IgG、IgM水平則反映了體液免疫能力［5］。本研究表明金剛天盾液促進免疫力低下小鼠IgG、IgM分泌增加。說明金剛天盾液不但促進了機體細胞免疫功能的增強，同時對體液免疫也有促進作用。

Th1和Th2細胞分別調控細胞和體液免疫，Th1和Th2極化是免疫應答調節中的關鍵環節，一旦Th1和Th2細胞之間的平衡被打破，必然會使某一種免疫占據優勢，另一種免疫處于劣勢，從而發生疾?。?］。正常狀態下，體內Th1和Th2可同時產生Th1型和Th2型細胞因子。Th1細胞主要分泌 IL-2、IL-3，IFN-γ，LT，TNF-α和 GMCSF，通過促進 C T L、NK細胞及巨噬細胞活化和增殖，達到抗腫瘤，抗病毒的效果。IFN-γ是Thl的特征性細胞因子。Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等Ⅱ類細胞因子，其主要功能在于刺激 B細胞分化為漿細胞，并產生抗體，參與體液免疫。其中IL-10除了具有Th2型細胞因子作用外，又有其他的生物學作用：抑制Th1類細胞因子的合成及其活性，尤其抑制 IFN- γ 的產生［2，7，8］。

本研究發現，相對于正常對照組，環磷酰胺所致免疫力低下小鼠IL-10分泌水平維持相對較高水平，IFN-γ分泌水平相對較低，提示環磷酰胺所致免疫力低下小鼠可能是以體液免疫為主。本次研究發現金剛天盾液號能夠降低Th2型細胞因子IL-10的合成，同時明顯增加Th1型細胞因子IFN-γ的合成，使Th1和Th2細胞功能極化趨于動態平衡。

本文通過觀察金剛天盾液對多項免疫指標的影響，證明金剛天盾液可提高環磷酰胺所致免疫力低下模型小鼠的體液免疫功能和細胞免疫功能，能夠糾正T淋巴細胞亞群的紊亂，使免疫力低下小鼠CD4+/CD8+比值提高至接近正常水平，促進B細胞產生抗體，誘導干擾素分泌等，從而達到提高小鼠免疫功能的作用。

［1］趙振寰，荊偉麗，孫向紅，孫偉.健齡寶對免疫力低下小鼠免疫功能的影響［J］.齊魯醫學雜志，2009，24(6)：522-524.

［2］劉仿，董群，李會強.醫學免疫學［M］.武漢大學出版社，2010：13-14，100.

［3］樊永平，王慶國等.健脾金丹對正常小鼠及環磷酰胺所致免疫受抑小鼠免疫功能的增強作用［J］.中國中西醫結合雜志，13(4)：223-225.

［4］劉吉勇，盧芳國，朱惠斌，等.應用環孢菌素A制備小鼠免疫缺陷動物模型［J］.實用預防醫學，2008，15(5)：1376-1378.

［5］陳震，王鵬，黃雯霞，劉魯明.生脈注射液對5-FU增效減毒作用的實驗研究［J］.中西醫結合學報，2005，3(5)：476-479.

［6］程志清，劉宏飛，張娟，姚航平.小鼠病毒性心肌炎慢性期Th細胞分化及清心Ⅱ號的干預作用［J］.中西醫結合學報，2007，5(3)：318-321.

［7］于善謙，王洪海，朱乃碩，葉榮.免疫學導論［M］.高等教育出版社，2002：188.

［8］陳慰峰.醫學免疫學［M］.人民衛生出版社，2004：107.