植物提取物對草魚非特異性免疫功能的影響

湖南農業大學動物科技學院 龔向勝 王紅權 趙玉蓉＊ 王小娜 金柏濤

植物提取物作為具有增強免疫功能和營養效應的飼料添加劑，在生豬生產中應用已取得較好效果，而在水產養殖中應用仍鮮見報道。本試驗研究了植物提取物對草魚非特異性免疫功能的影響，為草魚的免疫增強劑開發提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料 試驗采用的植物提取物由粗老茶葉、甜橙皮、桔子皮、馬齒莧、野菊花、苦蕎等天然植物經提取后的有效成分科學配制而成，主要有效成分為茶多酚、植物多糖、皂甙、類黃酮、植物精油等。由湖南省五季風生物科技有限公司提供。

1.2 試驗設計 采用單因子試驗設計，將平均體重（89±1.7）g的健康草魚隨機分為4個處理，每個處理3個重復，每個重復放養25尾魚。各處理分別在基礎日糧中添加0%、0.05%、0.10%和0.15%植物提取物，飼養期為68 d。

1.3 日糧組成及營養水平 試驗用日糧原料購自湖南安鄉正園飼料有限公司，無異味，無雜質，外觀符合要求。根據草魚配合飼料營養標準（SC/T 1024-1997）配制基礎日糧，其組成及營養水平見表1。

1.4 試驗動物及飼養管理 試驗草魚由湖南省大通湖天泓漁業股份有限公司千畝湖漁場提供，平均體重（89±1.7）g，體質健壯，大小均勻。

表1 基礎日糧組成及營養水平 %

為適應試驗飼料及環境，試驗前對試驗草魚集中馴養2周，試驗開始時魚體稱重分組，并將魚的體重調整至各組間差異不顯著（P＞0.05）。網箱置于水深2 m左右面積50畝的湖內。每天的上午 8∶00 ～ 9∶00 和下午 16∶00 ～ 17∶00 進行投喂，日投喂量為魚體重的3%，考慮草魚生長因素每7 d調整投喂量。飼養期間水溫24～29℃。養殖試驗在湖南省益陽市大通湖區天泓漁業股份有限公司養殖基地進行。

1.5 測定指標與方法 飼養結束，每口網箱取魚3尾，麻醉尾靜脈處采血，3000 r/min，離心10 min，取血清冷凍備用。測定血清總超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LSZ）、過氧化氫酶（CAT）和丙二醛（MDA）含量，采用南京建成生物工程研究中心提供的試劑盒測定，試驗過程嚴格按照試劑使用要求進行。

1.6 數據統計與分析 試驗數據采用SPSS 16統計軟件進行單因素方差分析，并進行LSD多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果

2.1 植物提取物對草魚血清總SOD的影響 由表2可知，日糧中添加植物提取物可顯著提高草魚血清總SOD活力 （P＜0.05），與對照組相比，0.05%、0.10%和0.15%植物提取物組SOD活力分別提高31.09%、24.29%和14.55%（P＜0.05）。

表2 不同植物提取物添加水平對草魚血清生化指標的影響

2.2 植物提取物對草魚血清LSZ的影響 由表2可知，日糧中添加一定劑量植物提取物可提高草魚血清LSZ活力 （P＜0.05），與基礎組相比，0.05%植物提取物組LSZ活力顯著提高16.96%，0.10%和0.15%植物提取物組LSZ活力分別降低2.83%和6.36%（P＞0.05）。

2.3 植物提取物對草魚血清CAT的影響 由表2可知，日糧中添加一定劑量植物提取物可提高草魚血清CAT活力，與基礎組相比，0.05%植物提取物組CAT活力顯著提高11.29%（P＜0.05），0.10%和0.15%植物提取物組CAT活力分別降低6.49%和8.59%（P＞0.05）。

2.4 植物提取物對草魚血清MDA的影響 由表2可知，日糧中添加植物提取物可顯著降低草魚血清MDA含量（P＜0.05），與基礎組相比，0.05%、0.10%和0.15%植物提取物組MDA含量分別顯著降低5.47%、13.41%和17.16%（P＜0.05）。

3 討論

從食性上講，植物提取物作為免疫增強劑，草食性魚類相對其他食性魚類飼喂的效果會更好。血清總SOD活性變化可體現動物機體清除自由基能力和抗氧化的能力強弱，對吞噬細胞防御能力和整個機體的免疫能力也具有重要影響作用（牟海津，1999）。SOD是一種機體抗氧化酶，在防御機體衰老和生物分子損傷等方面具有極為重要的作用，其能催化超氧陰離子自由基發生歧化反應，從而清除超氧陰離子自由基，減小超氧陰離子在生物體內的積聚，并阻止其轉化為自由基，維持胞內氧自由基處于低量狀態（Achuba，2002；Roche 和 Boge，1996；謝巧雄和朱心玲，1996）。 王紅權等 （2010）研究表明，殼聚糖對草魚血清總SOD活性有提高作用。本試驗結果表明，與對照組相比，植物提取物具有顯著提高草魚血清總SOD活性作用。最終起作用的可能是其有效成分植物多糖、茶多酚和類黃酮等。冷向軍等（2008）研究表明，杜仲葉粉或杜仲葉提取物可不同程度地提高草魚血清總SOD活性，增強機體非特異免疫功能?？梢?，杜仲葉提取物與本試驗中的植物提取物對草魚血清總SOD活性有一致影響效果。本試驗結果表明，植物提取物能提高草魚血清SOD活性，說明其有效成分具有清除自由基和抗氧化、保護機體的作用。

LSZ是破壞細菌細胞壁的酶，其活性大小可以在一定程度上反映魚體抵抗細菌侵襲的能力。LSZ是存在于魚類的吞噬細胞、血清中的一種水解酶，對各種微生物病原體均具有重要的防御作用（王玲等，2008）。本試驗結果表明，與對照組相比，飼料中添加一定劑量的植物提取物能夠提高草魚血清LSZ活性，這是植物提取物中有效成分作用的結果。而日糧中添加植物提取物的劑量有一定范圍，超過一定界值時就表現出LSZ的活性開始下降。本試驗選擇的三個梯度劑量中，0.05%添加量為最佳。

CAT是清除魚機體氧自由基的重要抗氧化物酶。在正常的魚體內，其內環境中自由基的產生與消除處于動態平衡中。當CAT活性降低時，魚體內自由基過多可破壞體內一些重要的生化過程，導致正常生理功能失調、體內免疫水平下降，潛在的病原被激活，使魚體發?。ɡ顙鹊?，2008；周進等，2003）。本試驗中，添加一定劑量的植物提取物對草魚血清CAT活性有提高作用。

血清MDA是動物脂質過氧化物的主要分解產物。MDA含量升高實際上是氧自由基產生過多，使體內脂質過氧化物增加。脂質過氧化物進一步分解，可產生大量的醛類、醇類和烴類，其中MDA是具有很強生物毒性的物質，會對機體造成傷害（劉波等，2008）。目前，有關植物提取物對水產動物血清MDA量影響的報道較少。本試驗結果表明，飼料中添加三種不同劑量植物提取物均可使MDA含量顯著降低，分別較對照組降低5.47%、13.41%、17.16%，可見三個劑量中隨劑量的增加，下降幅度增大。說明在飼糧中添加植物提取物，可增強草魚血清的抗氧化能力，減少體內氧自由基，降低MDA含量。

4 結論

本試驗結果表明，植物提取物具有調節和提高草魚的非特異性免疫能力的作用，其最適添加水平為0.05%。

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