非小細胞肺癌組織中Kindlin－2與Kiss－1表達的關系

江呂泉 高坤祥 鄭 建 陳 建 吳 昊 陳林松 (武警江蘇總隊醫院胸外科，江蘇 揚州 225000)

非小細胞肺癌起源于肺泡上皮細胞和支氣管黏膜柱狀上皮細胞，其發展過程中機體多種基因和蛋白異常表達，并起促進作用〔1〕。Kindlin－2是黏著斑蛋白家族重要成員，在腫瘤中高表達，其可能具有調節整合素的作用，并促進細胞間黏附作用的改變〔2〕。Kiss－1是新發現的基因和蛋白，研究認為其是重要的腫瘤抑制基因〔3〕。本實驗應用流式細胞術探討非小細胞肺癌組織中Kindlin－2與Kiss－1的半定量表達，關注其相關性。

1 材料與方法

1.1 臨床材料 唐都醫院及本院2005年1月至2010年2月非小細胞肺癌術后留取的新鮮標本作為觀察組，納入均符合WHO關于非小細胞肺癌的診斷標準，并經病理學診斷醫師確診，患者隨訪資料完整。排除術前進行放、化療的患者，共觀察89例，其中男性49例，女性40例，年齡50～79歲，平均60.3歲。同時選取同期病理證實為正常的肺組織53例作為對照組，其中男性30例，女性23例，年齡49～78歲，平均60.4歲。兩組在一般資料的比較中，無明顯差異。

1.2 方法 Kindlin－2與Kiss－1蛋白均購自武漢博士德生物技術有限公司，應用Beckman Coulter公司生產流式細胞儀進行檢測。具體步驟參照劉愛東等〔4〕應用的方法。實驗均由同一主管技師完成，減少誤差，嚴格質控。

1.3 結果判定標準 按照Mordve等提出的流式細胞學定量分析的方法，采用熒光指數(FI)表示Kindlin－2或Kiss－1蛋白表達的相對含量。計算公式為:FI=(非小細胞肺癌中蛋白Kindlin－2或Kiss－1表達的平均熒光強度 －對照樣品平均熒光強度)/正常對照樣品平均熒光強度。

1.4 統計學方法 應用SAS6.12統計軟件，定量資料比較采用t檢驗，同時進行線性相關性分析。

2 結果

2.1 兩組 Kindlin－2與 Kiss－1表達 Kindlin－2蛋白在觀察組中的表達量明顯高于對照組(P＜0.001)，Kiss－1在觀察組中的表達量明顯低于對照組(P＜0.01)，見表1。

表1 Kindlin-2與Kiss-1在觀察組與對照組中的表達

2.2 Kindlin－2與Kiss－1蛋白的表達與非小細胞肺癌臨床病理特征的關系 Kindlin－2與Kiss－1蛋白與非小細胞肺癌的有無淋巴結轉移、胸膜侵犯及不同Ki67表達中的差別有統計學意義(P ＜0.05)，見表2。

表2 Kindlin-2與Kiss-1蛋白的表達與非小細胞肺癌臨床病理特征的關系

2.3 非小細胞肺癌中Kindlin－2與Kiss－1蛋白表達的相關性

對觀察組中Kindlin－2與Kiss－1的表達進行線性相關分析，結果顯示Kindlin－2與 Kiss－1的表達具有負相關性(r= －0.46，P=0.023 5)。

3 討論

非小細胞肺癌近年來其發病率、復發率和死亡率呈上升趨勢。目前證實腫瘤的侵襲和轉移與預后有關，其具體調節機制雖不明確，但是人們也發現了多種與轉移相關的蛋白。Kindlin作為黏著斑蛋白家族，均與細胞內信號轉導、細胞遷移、黏附及增殖有關，其中以Kindlin－2的功能最為廣泛，其可能與整合素β1或轉化生長因子具有內在的共同作用位點。惡性腫瘤中Kindlin－2高表達，有觀點認為Kindlin－2是從整合素通路的角度促進腫瘤的進展〔5，6〕。Kiss－1作為一種抑癌基礎，是應用微細胞介導技術在黑色素細胞株中發現的，定位于染色體1q32，包括4個外顯子，編碼產生54個氨基酸〔7〕，惡性腫瘤中Kiss－1低表達，使腫瘤從基因和蛋白水平失去了對腫瘤增殖及轉移的抑制作用，腫瘤進展加速，惡性潛能升高〔8〕。

本實驗提示非小細胞肺癌發生過程中，Kindlin－2與Kiss－1的改變均起著某種促進作用。實驗結果顯示Kindlin－2與Kiss－1的表達與腫瘤有無淋巴結轉移、胸膜侵犯及不同Ki67的表達密切相關，由于以上因素均與腫瘤進展有關，同時與腫瘤的預后有關，因此提示Kindlin－2與Kiss－1蛋白不僅對腫瘤的進展有促進作用，還可能對判斷預后有一定價值。本研究提示二者在腫瘤的進展中可能具有內在作用。Kiss－1可能通過調節細胞質內 NF－κB 蛋白的活性〔9，10〕，使其與 Kindlin－2 的結合降低，減少其合成，從而抑制腫瘤細胞的機動性、趨化性及侵襲性〔11〕，可這可能是二者協同作用的一個方面，但是其具體機體尚有待進一步研究。Kindlin－2還參與整合蛋白活化、腫瘤的細胞遷移和增殖，由于Ki67是當今觀察增殖指數的重要標志蛋白，因此，Kindlin－2在不同Ki67表達率的差別也是Kindlin－2增殖作用的直接體現。也有觀點認為Kindlin－2對腫瘤的血管新生有一定作用〔5〕，而 Kiss－1 對血管新生無明顯的作用，此機制可能是Kindlin－2促進腫瘤進展的一個獨立通路方向，與Kiss－1的表達無關。

1 Karapanagiotou EM，Dilana KD，Gkiozos I，et al.Metastin is not involved in metastatic potential of non－small cell lung cancer〔J〕.Med Oncol，2011;28(2):559－64.

2 熊 盈，龔小衛，姜 勇.Kindlin家族成員研究進展〔J〕.生物化學與生物物理進展，2010;37(12):1265－70.

3 Nicolle G，Comperat E，Nicola?ew N，et al.Metastin(KISS－1)and metastin－coupled receptor(GPR54)expression in transitional cell carcinoma of the bladder〔J〕.Ann Oncol，2007;18(3):605－7.

4 劉愛東，劉士生，許志萍，等.E－cadherin在胃癌中的表達及意義〔J〕.廣東醫學，2007;28(11):1806－7.

5 洪水翔，賴日勇，廖光宏，等.原發性肝癌中Kindlin－2蛋白對血管生成的作用〔J〕. 中國老年學雜志，2012;32(11):2229－30.

6 武文斌，張 擎，李 艷，等.急性髓系白血病Kindlins和血管生成素表達研究〔J〕.中國實驗血液學雜志，2012;20(1):7－11.

7 Li N，Wang HX，Zhang J，et al.KISS－1 inhibits the proliferation and invasion of gastric carcinoma cells〔J〕.World J Gastroenterol，2012;18(15):1827－33.

8 Shengbing Z，Feng LJ，Bin W，et al.Expression of KiSS－1 gene and its role in invasion and metastasis of human hepatocellular carcinoma〔J〕.Anat Rec(Hoboken)，2009;292(8):1128－34.

9 劉愛東.Kiss－1在胃癌中的表達及意義〔J〕.現代中西醫結合雜志，2011;20(19):2354－5.

10 要瑞莉，劉愛東，龐久玲.Kiss－1和基質金屬蛋白酶－9蛋白在胃癌中的表達及意義〔J〕. 中國綜合臨床，2009;25(1):84－5.

11 Jung GY，Park YJ，Han JS.Mediation of Rac1 activation by kindlin－2:an essential function in osteoblast adhesion，spreading，and proliferation〔J〕.J Cell Biochem，2011;112(9):2541－8.