裂環異落葉松脂酚二葡萄糖苷對睪酮誘導的小鼠前列腺增生的抑制作用

李高文 張 玲 萬 勇 于紀棉 (寧波衛生職業技術學院藥理教研室，浙江 寧波 3500)

目前認為良性前列腺增生癥(BPH)主要是由于體內雄/雌激素失調，前列腺細胞增殖動力學改變而引起〔1〕。裂環異落葉松脂酚二葡萄糖苷(SDG)為植物雌激素，具有雌激素樣和抗雌激素樣雙重活性〔2〕。SDG具有抑制大鼠前列腺增生的作用，其具體機制與SDG提高機體抗氧化能力、清除自由基等有關〔3〕，而其對前列腺增生小鼠體內的雄、雌激素水平是否有影響未見報道。本文以丙酸睪酮誘發小鼠BPH模型，觀察了SDG對小鼠前列腺指數、血清前列腺特異性酸性磷酸酶(PAP)、前列腺組織中睪酮(T)和雌二醇(E2)水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 ICR雄性小鼠60只，體重18～20 g，普通級，購自溫州醫學院實驗動物中心〔實驗動物許可證號:sysxk(浙)2005-006〕，各組動物自由取食、飲水，測試10 h前禁水禁食。

1.2 試劑與器材 SDG(含量≥90%)由北京大學藥學院楊東輝教授提供，用雙蒸水溶解。丙酸睪酮注射液(上海通用藥業股份有限公司生產，批號070102);癃閉舒膠囊(石家莊科迪藥業有限公司，批準文號:國藥準字Z10960007);PAP測試盒購自南京建成生物工程研究所;T和E2測定試劑盒均購自北京北方生物技術研究所。電子天平(BS110S，北京賽多斯儀器公司);可見分光光度計(722N，上海精密科學儀器有限公司);光學顯微鏡(Leica DFC280);離心機(LDZ5-2，北京醫用離心機廠生產);輪轉式切片機(KD202C，浙江金華科迪儀器設備有限公司);550型酶標儀(美國Bio-Rad公司)。

1.3 動物模型制作及給藥方法 動物模型制備參考文獻〔4〕進行，將小鼠隨機分為正常對照組、模型組、SDG 40、80、160 mg/kg劑量組和30 mg/kg癃閉舒組;癃閉舒組給藥劑量按照文獻〔4〕折算成小鼠用劑量。除正常對照組外，其余小鼠每日按5 mg/kg皮下注射丙酸睪酮造模，同時灌胃給予SDG或癃閉舒膠囊混懸液1次，連續21 d。最后一次給藥24 h后，將各組動物稱重后處死，摘取前列腺稱濕重，計算前列腺指數，前列腺指數=前列腺濕重(mg)/小鼠體重(g)。

1.4 前列腺病理學檢查 10%甲醛溶液固定前列腺組織，經脫水、透明、石蠟包埋后切片，HE染色，在光鏡下觀察小鼠前列腺組織結構變化，照相。

1.5 血清PAP測定 斷頭取血，室溫放置20 min后離心，1 000 r/min，10 min，分離血清，－20℃凍存，嚴格按照試劑盒使用說明操作。

1.6 前列腺組織中T及E2含量測定 取部分新鮮前列腺組織勻漿，采用酶聯免疫吸附法測定T和E2水平，酶標儀下讀數，嚴格按照試劑盒說明操作。

1.7 統計學處理 采用SPSS11.5統計軟件包，數據以表示。單因素方差分析，組間差異采用t檢驗。

2 結果

2.1 SDG對小鼠前列腺濕重、指數以及血清PAP含量的影響如表1所示，模型組與正常對照組小鼠相比，小鼠前列腺濕重、指數和血清PAP含量均顯著增加(P＜0.01)，SDG 80和160 mg/kg組以及癃閉舒組不同程度地逆轉上述變化，且有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。

2.2 SDG對小鼠前列腺組織T及E2水平的影響 由表2可見，與正常對照組相比，模型組大鼠前列腺組織中 T(P＜0.001)和E2(P＜0.001)水平顯著升高，使大鼠前列腺組織在外源性雄激素作用下出現增生。與模型組比較，80 mg/kg和160 mg/kg劑量的SDG組及癃閉舒組均可顯著降低模型大鼠前列腺中 T(P＜0.05或 P＜0.01)和 E2(P＜0.01或 P＜0.001)水平。

2.3 SDG對小鼠前列腺組織病理學改變的影響 見圖1，鏡下見正常對照組腺體排列清楚，腺腔無擴張，腺上皮單層柱狀，可見少許基底細胞及明顯基膜，腺體間可見較明顯的間質。模型組腺體排列密集，部分腺腔擴張、變大，部分區域呈假復層，腺上皮變厚呈乳頭狀突向腔內，給藥后腺上皮細胞不同程度減小，復層和乳頭狀增生不明顯。

圖1 SDG對小鼠前列腺組織病理學改變的影響(HE，×40)

表1 SDG對小鼠前列腺濕重、指數以及血清PAP含量的影響(n=10，)

表1 SDG對小鼠前列腺濕重、指數以及血清PAP含量的影響(n=10，)

與正常對照組比較:1)P＜0.01;與模型組比:2)P＜0.05，3)P＜0.01

組別 劑量(mg/kg)前列腺濕重(mg)前列腺指數(mg/g)PAP(U/L)正常對照組22.9±4.4 0.69±0.14 1.21±0.72模型組 31.4±5.01) 0.98±0.161)3.65±1.971)SDG組 40 30.5±4.9 0.86±0.16 2.54±0.69 80 25.3±4.23) 0.77±0.143)1.49±1.543)160 24.9±4.53) 0.76±0.133)1.44±0.863)癃閉舒組 30 26.8±2.42) 0.76±0.053)1.43±1.653)

表2 SDG對小鼠前列腺中T和E2水平的影響(n=10，)

表2 SDG對小鼠前列腺中T和E2水平的影響(n=10，)

與正常對照組比較:1)P＜0.001;與模型組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01，4)P ＜0.001

組別 劑量(mg/kg) T(ng/ml) E2(pg/ml)正常對照組0.12±0.02 0.58±0.04模型組 1.52±0.261) 0.98±0.031)SDG組 40 1.45±0.2 0.89±0.07 80 1.11±0.12) 0.75±0.032)160 0.79±0.13) 0.52±0.044)癃閉舒組 0.16 0.68±0.044) 0.54±0.044)

3 討論

賈彬等〔5〕發現，外源性睪酮可以顯著增加小鼠前列腺指數，本實驗也發現SDG能顯著降低小鼠體內主要雄激素之一的睪酮含量，而PAP的合成和分泌也依賴雄激素的存在。此外，研究發現體內E2水平與前列腺體積呈正相關，即E2水平越高，前列腺體積越大〔6〕。

目前關于BPH的病因中，性激素平衡失調的內分泌學說受到公認〔1〕，因此抗雄激素藥和雌激素擬似藥廣泛應用于BPH的治療。近年來流行病學調查和實驗研究表明植物雌激素對BPH有防治作用〔7〕，然而在動物實驗中發現，雌激素的濃度與前列腺基質細胞生長呈倒U形關系，即在一定濃度范圍，雌激素刺激基質細胞增殖，否則表現為抑制作用〔8〕。相應地有研究者也認為高濃度雌激素具有促進前列腺增生的作用〔9，10〕。段曉慧等〔11〕調查了38例老年BPH患者血清性相關激素的變化，發現這些患者體內E2水平呈高水平狀態，經藥物治療后體內E2水平下降，本實驗與其有相似結果。而SDG作為一種植物雌激素，沒有發揮其潛在的雌激素樣作用，這可能與小鼠體內較高的雌激素環境有關，還可能通過對下丘腦-垂體-性腺軸產生負反饋抑制，降低雌激素的濃度。總之，本實驗顯示SDG可能通過降低T和E2水平，調節紊亂的雌、雄激素水平，達到拮抗小鼠前列腺增生的作用。而其改善BPH的途徑是否涉及其他機制及其臨床效果還有待進一步研究。

1 谷欣權，馬慶杰，孔祥波.前列腺增生癥的現代治療進展〔J〕.中國老年學雜志，2001;21(6):475-7.

2 Wang LQ.Mammalian phytoestrogens:enterodiol and enterolactone〔J〕.J Chromatography B，2002;777(1-2):289-309.

3 沈 楠，任 曠，王艷春，等.亞麻籽木脂素對大鼠前列腺增生的抑制作用及其機制〔J〕.吉林大學學報(醫學版)，2011;2(37):288-91.

4 徐叔云.藥理實驗方法學〔M〕.第3版.北京:人民衛生出版社，2002:1553.

5 賈 彬，黎 瑋，劇亞崇，等.雄激素對小鼠前列腺細胞增殖凋亡及相關增殖因子的影響〔J〕.中國老年學雜志，2008;28(12):1079-80.

6 杜傳策，宋樂明，胡 敏，等.前列腺體積與血清雌二醇和睪酮濃度及其比例關系的研究〔J〕.中國全科醫學，2011;14(1B):159-63.

7 Brossner C，Petritsch K，Fink K，et al.Phytoestrogen tissue levels in benign prostatic hyperplasia and prostate cancer and their association with prostatic diseases〔J〕.Urology，2004;64(4):707-11.

8 Vom Saal FS，Timms BG，Montano MM，et al.Prostate enlargement in mice due to fetal exposure to low doses of estradiol or diethylstilbestrol and opposite effects at high doses〔J〕.Proc Natl Acad Sci，1997;94(5):2056-61.

9 吳建輝，裴曉丹，曹 霖.雌二醇對丙酸睪酮誘導去勢大鼠前列腺增生的影響〔J〕.中國藥理學與毒理學雜志，2005;19(5):363-7.

10 朱 剛，王建業.雌激素致前列腺增生作用〔J〕.中華泌尿外科雜志，1998;19(7):444-6.

11 段曉慧，潘曉明，肖永新，等.老年前列腺增生癥血清性相關激素(FSH、LH、E2、T、PRL、P、T/E2)變化觀察〔J〕. 中國性科學，2009;18(1):10-3.