國產HIV抗體尿液診斷試劑盒(膠體金法)性能研究

劉俊華，任蘊慧，劉麗麗，王光陽，趙文利

(1.漯河市疾病預防控制中心 河南漯河 462000;2.漯河市第三人民醫院 河南漯河 462000)

人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)是引起人類獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的病原體。經過20多年的發展，HIV診斷技術特別是免疫診斷技術的發展呈現兩個特點:①縮短窗口期，已從間接酶聯免疫法的第一代檢測技術大約3個月發展到夾心法抗體與P24抗原同檢的第四代檢測技術;②取材的方便化和非侵入性，標本由單一血清向全血、唾液以及尿液等其他體液標本拓展［1，2］。雖然有些HIV感染者的尿液也能培養出HIV病毒，但非侵入性取材的尿液不是HIV的主要傳染源。尿液標本在HIV檢測中的諸多優勢，使HIV抗體尿液診斷技術越來越受到重視，而膠體金技術與此項技術的結合，更能發揮尿液快檢在HIV篩查中的作用。本文研究了國產HIV抗體尿液診斷試劑盒(膠體金法)的分析性能，報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本 漯河市疾病預防控制中心HIV確證實驗室經免疫印跡(Western blot，WB)確認的HIV抗體陽性患者，HIV抗體陽性患者做CD4T淋巴細胞時，同時接一份尿液標本，共保存HIV抗體陽性患者尿液394例。漯河市第三人民醫院門診尿常規標本1 562例(其中HCG陽性尿樣120例，血紅蛋白尿16例)，衛生部臨檢中心HIV國家質控血清盤(LOT20081202)。

1.2 試劑 國產HIV抗體尿液診斷試劑盒(膠體金法)(批號20090819)，進口Calypte公司的AwareHIVU紙條(批號20090301)。

1.3 方法 取10例陽性患者尿液標本混合，用抗-HIV陰性混合尿液進行系列稀釋，比較兩種產品檢出限的差異;取國家血清參考品，用抗-HIV陰性混合尿液進行系列稀釋，考核兩種產品的性能;用394例HIV抗體陽性尿液標本和1 562例常規門診標本，比較兩種產品的靈敏度和特異性，結果不一致的門診標本經漯河市疾病預防控制中心HIV確證實驗室用WB法驗證。嚴格按產品說明書操作。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，兩組率比較采用卡方檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 國產試劑與AwareHIV-U試紙條的結果 最低檢出限相當，混合尿液標本系列稀釋靈敏度檢測比較結果，見表1。

表1 國產試劑與AwareHIV-U試紙條檢測尿液HIV抗體檢出限對照表

2.2 國產試劑國家質控血清盤中靈敏度標本 S1稀釋1 000倍為陰性(S1為陰性基質液)、S2、S3稀釋5 000倍為陽性;18份I型陽性參考品除P15(1∶100檢為陰性，Aware也為陰性)其它均1∶5 000檢出陽性(1份為1∶5 000稀釋，其它均達1∶10 000以上稀釋);2份Ⅱ型陽性參考品1∶50均檢為陽性，1∶100均檢為陰性，AwareHIV-U紙條測Ⅱ型稀釋標本均為陰性，陰性血清參考品20份稀釋1 000倍檢測均為陰性。Aware-HIV-U紙條檢測P15為陰性。

2.3 臨床性能評估 國產試劑和AwareHIV-U試紙條檢測HIV抗體陽性尿液標本完全一致，各發生5例漏檢。檢測門診尿常規標本，國產試劑發生2例假陽性，而AwareHIV-U發生1例假陽性。國產試劑靈敏度和特異性分別是 98.73%(390/395)和 99.87%(1 559/1 561)，而AwareHIV-U試紙條靈敏度和特異性分別為 98.73%(390/395)和 99.94%(1 560/1 561)，經卡方檢驗兩者靈敏度差異和特異度差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 國產試劑與AwareHIV-U試紙條臨床性能比較表

3 討論

尿液標本以及其取材的特點，使其在HIV臨床篩查中應用越來越多。但以往國內關于尿液HIV抗體檢測研究的對象主要是 HIV-1 抗體［4，5］，只是最近幾年開始涉及HIV-2抗體［6］，而且這些研究對象都是進口試劑。隨著體外診斷技術的快速發展，國內體外診斷試劑廠家也開始進行尿液HIV抗體檢測研究［7］，但尿液HIV1/2抗體膠體金法檢測尚未見報道，而尿液HIV1/2抗體膠體金法因標本和技術特點更適合臨床篩查HIV抗體。

本研究的國產試劑和AwareHIV-U試紙條均采用膠體金技術檢測尿液標本中的HIV-1抗體和HIV-2抗體，結果表明國產HIV抗體尿液診斷試劑盒(膠體金法)最低檢出限與AwareHIV-U試紙條相當，在國家質控血清盤HIV-2抗體檢測方面優于AwareHIV-U試紙條。兩種試劑檢測臨床標本的靈敏度和特異性雖經統計分析無顯著性差異，國產試劑靈敏度明顯優于AwareHIV-U試紙條，特別對于HIV-2抗體。但國產試劑的特異性比AwareHIV-U試紙條低，而且兩種試劑都有5例HIV抗體陽性漏檢，說明膠體金技術檢測尿液HIV抗體的靈敏度還有待提高。兩種產品發生的假陽性都是高血紅蛋白尿，血紅蛋白影響辣根酶過氧化物酶活性，從而引起以其為標記酶的ELISA檢測技術的假陽性［7］，但血紅蛋白是否與膠體金技術檢測尿液HIV抗體產生假陽性相關需要研究。基于這樣的結果，值得對這個產品進一步研究，提高靈敏度，以適合臨床篩查需要。

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