血清TK-1檢測對原發性肝癌的診斷及介入治療后效果評估的意義

艾敏 陶晨 文劍 張永臣 戴峰 陳剛 趙紅 趙偉

原發性肝癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一。我國的肝癌患者約占全世界的50%。國內外同行一致認為經導管肝動脈化療栓塞(TACE)是不適合手術切除的中晚期肝癌的首選療法，在老年肝癌患者應用尤其廣泛。

TK-1的升降水平與DNA在細胞周期S期的合成速度密切相關［1］。惡性腫瘤細胞中的DNA合成劇增導致腫瘤細胞的急劇增殖，因此，TK-1的水平與腫瘤細胞數量和生長狀態關系密切。TK-1作為腫瘤細胞的血清學增殖標志物，在乳腺癌、肺癌、膀胱癌等惡性腫瘤中已有相關研究［1-2］。本研究檢測了肝癌患者介入治療前后血清中TK-1的水平，以觀察其在肝癌的早期診斷、療效監測等方面的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2010年4～10月在南京市第二醫院住院老年原發性肝癌患者54例，男39例，女15例，年齡45～63歲，平均(51±4.8)歲。肝功能分級均為Child A級，無TACE治療禁忌證。分別在介入治療前、治療后1周、1月保留血清進行TK-1水平測定。正常對照組28例，為本院體檢老年健康人，男19例、女9例，年齡45～60歲，平均(49±3.8)歲，正常對照組為排除貧血、任何腫瘤疾病、傳染性疾病、炎癥疾病和其他疾病征兆的健康人。醫學倫理委員會批準上述標本的收集。

1.2 方法

TACE:采用標準Seldinger法通過右側股動脈穿刺行常規造影，根據造影結果將導管或微導管置于腫瘤染色異常供血動脈內，經導管注入50 mg順鉑(齊魯制藥)，然后根據血管造影顯示病灶大小、范圍和血供情況給予10～15 ml液化碘油與20 mg吡柔比星(深圳萬樂藥業)乳化和適量明膠海綿行病灶和腫瘤血管栓塞，4～8周重復1次。介入治療1月后復查肝臟增強CT以觀察病灶大小變化、碘油存積情況及病灶有無增強后強化，進一步評價療效。

血清TK-1值檢測:于清晨空腹抽取靜脈血2 ml，3 h內以4000 r/min離心10 min，分離血清，按編號分裝于2個離心管，保存于-20℃冰箱(1管用于檢測、另1管用于復檢)，標本收集完成后進行血清TK-1值測定。測定時，采用不同濃度TK-1(20，6.6，2.2 pmol/L)做標準品(A1-3)制定標準曲線。按照TK-1的標準曲線計算供試者的TK-1值的pM濃度。風險值為2 pM，STK-1＞2 pM檢測者評估為細胞增殖風險人群，判斷為陽性結果。采用ECL點印跡免疫-增強化學發光法檢測系統，TK-1檢測靈敏度為0.2 pmol/L。

全部過程實行嚴格的雙盲法操作，TK-1印跡免疫-增強化學發光法試劑盒和CIS-1化學發光數字成像分析儀由華瑞同康生物技術(深圳)有限公司提供。

1.3 療效評價 根據介入治療前及治療后4～6周CT檢查，參照《常見惡性腫瘤診治規范》的肝癌療效標準進行評價，近期療效判斷分為4級［3］:腫瘤病灶最大的2個相互垂直直徑的乘積縮小(壞死)≥50% 為完全緩解(CR);縮小(壞死)25% ～50% 為部分緩解(PR);縮小(壞死)＜25% 或增大≤50% 為穩定(SD);增大＞50% 或出現新病灶為進展(PD)。CR+PR為有效，而SD+PD為無效。本研究54例中有效31例，無效23例。

1.4 隨訪 采用住院隨訪及門診隨訪，隨訪間隔為每月1次。門診隨訪內容包括血常規、生化肝功能、凝血時間、TK-1、甲胎蛋白、肝臟增強CT或MR(每2月1次)，藥物不良反應及體能狀況(ECOG PS)評分。

1.5 統計學處理 數據處理均用SPSS 15.0進行。計量資料以均數±標準差表達，各組之間TK-1水平的比較用student's t檢驗，組間計數資料比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組TK-1水平及TK-l陽性數比較 肝癌組治療前TK-1水平［(3.30±2.30)pmol/L］顯著高于對照組［(1.32±0.86)pmol/L］，在介入治療1周后TK-1水平于治療前比較無顯著差異(P＞0.05)，但在治療1月后顯著下降，為(2.81±2.48)pmol/L，差異有統計學意義(P＜0.01)。肝癌組TK-1陽性37例(68.52%)，顯著高于對照組3例(16.67%)，差異亦有統計學意義(P＜0.01)。

2.2 介入治療1月后血清TK-1水平與療效的關系介入治療1月后血清TK-1水平＜2 pmol/L組的治療效果明顯好于＞3 pmol/L組，差異有統計學意義(P＜0.01)。見表1。

表1 介入治療1月后血清TK-1水平與療效相關比較(n)

3 討論

原發性肝癌是一種常見的惡性腫瘤。甲胎蛋白(AFP)被認為是原發性肝癌的特異性好、陽性率高的首選血清腫瘤標志物，但其陽性率僅為60%左右［4］，約三分之一的患者無法根據此指標做出診斷及療效評價，因此如果能找到AFP以外的肝癌腫瘤標志物，對原發性肝癌的診斷和治療有很重要的意義。

TK-1基因定位在17q13.2～25.3，靠近半乳糖激酶基因，與DNA的合成密切相關，是S期特異性的激酶。TK-1水平取決于細胞的增殖度，正常情況下成人體內TK-1含量極微［5］，腫瘤疾病是一種細胞異常增殖性疾病，正常細胞生長一旦失控，將導致細胞惡性增殖，DNA合成速度急劇升高。由于 TK-1與DNA合成呈正相關，TK-1活力增加會引起細胞DNA合成速度提高，所以腫瘤惡性程度越高，TK-1的含量也相應升高。95%的惡性腫瘤病人的血清中都存在TK-1水平不同程度的升高［2］。因此，近年來這一新的細胞增殖標志已逐漸受到人們的關注，應用于臨床腫瘤的療效監測和預后評估，以及對健康人群早期發生惡性腫瘤風險的預測和篩查［6-8］。

高水平的TK-1主要存在于胎兒組織和成人的增殖細胞質中，在非增殖細胞和健康人血清中，TK-1含量極微或檢測不到。針對血清TK-1在肝癌患者中表達水平變化的研究較少。本研究結果顯示，與健康對照組比較，肝癌組TK-1水平及陽性檢出率顯著升高(P＜0.05)，與相關文獻的報道一致［9］。

據文獻報道TK-1半衰期為30 d左右［10-12］。本研究比較了介入治療前后肝癌患者的血清TK-1水平，發現治療1周后TK-1水平與治療前無顯著差異，分析原因可能是因為介入治療1周后尚處于TK-1的半衰期內，血清中仍有殘留的TK-1。而介入治療1月后復查的患者血清中TK-1水平明顯下降，其原因可能為:介入治療后腫瘤細胞生長受抑制，腫瘤組織增殖速度減緩。

本研究對介入治療后血清TK-1不同水平組的治療療效進行了比較，結果提示介入治療1月后，血清TK-1水平＜2 pmol/L組，療效明顯好于血清TK-1＞3 pmol/L組，證實血清TK-1水平與介入治療療效相關，提示其可以作為判斷肝癌介入治療療效的指標。

本研究采用印跡免疫-增強化學發光法檢測血清TK-1水平，該方法靈敏度高，可達0.1～1 pg。與放射性同位素法相比，該方法具有快速、靈敏、無環境危害等特點，具有廣泛的應用前景。

本研究認為，TK-1作為一種新的血清腫瘤標志物，檢測重復性好，可靠性高，可作為一種評估肝癌介入治療療效的有效指標，值得臨床逐步推廣使用。但是由于研究時間過短，未能隨訪肝癌患者介入治療后長期的TK-1水平變化趨勢，TK-1水平能否對肝癌復發及長期預后進行有效預測還需要進一步研究。

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