復方消渴降糖膠囊降糖作用初探

陸翠林 陸海鵬

1.廣西中醫學院附屬瑞康醫院，廣西南寧 530011；2.廣西民族醫院，廣西南寧 530001

復方消渴降糖膠囊為我院多年用于臨床治療2 型糖尿病的有效復方制劑，其處方由番石榴葉、天花粉、生地、山藥、山茱萸、甘草等6 味藥組成，具有清熱生津，除煩止渴的作用，用于熱病津傷口渴、多飲、多尿、多食、消瘦、體倦無力、尿糖及血糖升高之消渴癥。本文旨在研究復方消渴降糖膠囊的急性毒性及對四氧嘧啶性糖尿病小鼠的影響，現報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

棱光-722 型可見分光光度計，上海第三分析儀器廠；ML204 型電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.2 試藥

1.2.1 試劑 四氧嘧啶 （美國Sigma公司產品，批號：12k1460）；葡萄糖測定試劑盒（上海榮盛生物技術有限公司，批號：20100812）；苯乙雙胍片（北京雙鶴藥業股份有限公司，批號：20100505）。

1.2.2 藥物 番石榴葉采集地點分別為廣西南寧、桂林、百色、河池、柳州、欽州、防城等地，經鑒定為桃金娘科植物番石榴Psidium guajavae L.的干燥葉[1]；天花粉、生地、山藥、山茱萸、甘草等藥材均購南寧一心藥業有限公司。復方消渴降糖膠囊稠膏制備：番石榴葉、生地、山藥、山茱萸、甘草等洗凈，加水12 倍量水浸泡2 h，煎煮1.5h，第2次加10 倍量水，煎煮1 h，濾液過濾，合并，放冷，加入3 倍量95%乙醇，攪拌均勻，放置過夜，過濾，濾液回收乙醇后，濃縮成可供小鼠灌胃（ig）給藥的最大濃度的稠膏，加入天花粉（破壁）混合，既得，相對于3.56 g生藥/mL，使用時按要求用蒸餾水稀釋，藥品批號：20100620。

1.3 實驗動物

清潔級昆明種小鼠，體重18～22 g，由廣西醫科大學實驗動物中心提供，動物許可證號：2010A032。

2 方法與結果

2.1 方法

2.1.1 復方消渴降糖膠囊最大耐受量實驗 清潔級昆明種小鼠，18～22 g，雌雄各半，隨機分正常對照組、復方消渴降糖膠囊組，每組動物20只。小鼠禁食不禁水12 h后按小鼠體重灌胃給藥2次，體積為0.4 mL/10 g（3.56 g生藥/mL），給藥時間間隔8 h，間隔期禁食不禁水，空白對照組則同時給予等體積的生理鹽水。給藥后動物正常飲食，連續觀察小鼠7 d內的飲食、體重變化、毛發、分泌物及大小便等指標。7 d后處死小鼠尸檢，觀察各鼠主要臟器（肝、心、脾、肺、腎），觀察是否有任何異常改變。

2.1.2 復方消渴降糖膠囊對正常小鼠血糖的影響[2-3]清潔級昆明種小鼠48只，18～22 g，雌雄各半，隨機分為4 組，即正常對照組（A組）、復方消渴降糖膠囊高、中、低劑量（30.0、15.0、7.5g/kg，以原生藥材計，下同）組（B、C、D 組），每組 12只。各組小鼠均按相應劑量灌胃給藥，A組給予等量生理鹽水，每天2次，連續10 d，于末次給藥前禁食12 h，末次給藥后2 h，小鼠靜脈取血測空腹血糖值。

2.1.3 復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影響[4]清潔級昆明種小鼠約120只，18～22 g，雌雄各半，取12只作為正常對照組（A組），靜脈注射20 mL/kg生理鹽水，其余造四氧嘧啶性糖尿病模型小鼠，靜脈注射四氧嘧啶0.1 g/kg，72 h后靜脈取血測血糖值，去除血糖值<11.0 mmol/L小鼠后，隨機分為5 組，即四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組（B組）、苯乙雙胍陽性對照組（C組）、復方消渴降糖膠囊組（高、中、低劑量）（D、E、F組），每組12只。A組灌胃給予等體積生理鹽水，B組灌胃給予苯乙雙胍片0.2 g/kg，C、D、E分別灌胃給予復方消渴降糖膠囊30.0、15.0、7.5g/kg，每天 2 次，連續 10 d，末次給藥后禁食2 h，靜脈取血測血糖值。

2.1.4 復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響[5]實驗分為5 組，即正常對照組（A組）、四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組（B組）、復方消渴降糖膠囊組（高、中、低劑量）（C、D、E 組），每組 12 只，造模及給藥同“2.1.3”項下，末次給藥后禁食2 h，小鼠靜脈抽取血樣后以該血糖值作為0 h血糖濃度，同時各組小鼠立即灌胃葡萄糖2.5g/kg，于0.5、2.0 h抽取血樣并測量血糖值，觀察復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響。

2.1.5 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件處理， 計量資料數據以均數±標準差（±s）表示，采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2.2 結果

2.2.1 復方消渴降糖膠囊最大耐受量實驗結果 各組小鼠未見死亡，在第2次給藥后，B組小鼠進食減少及活動表現減少，第2 天能恢復正常活動及進食。所有小鼠體重自然增長，兩組動物體重比較無顯著性差異。小鼠毛色、常分泌物及大小便正常。7 d后處死小鼠，檢視心、肝、脾、肺、腎、胃腸等重要臟器，結果未見異常改變。按生藥量計復方消渴降糖膠囊對小鼠灌胃給藥的最大耐受量為142.4 g生藥/g。

2.2.2 復方消渴降糖膠囊對正常小鼠血糖的影響 與正常對照組比較，復方消渴降糖膠囊高劑量組能顯著降低正常小鼠血糖（P<0.05），復方消渴降糖膠囊中劑量及低劑量組雖然也能降低正常小鼠血糖水平，但經比較差異無統計學意義（P>0.05）。 見表1。

2.2.3 復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影響 與正常對照組比較，四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組血糖水平顯著升高（P<0.05），與四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組比較，苯乙雙胍陽性對照組、復方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組能顯著降低四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖 （P<0.05），與苯乙雙胍陽性對照組比較，復方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組著降低四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖效果相當 （P>0.05），而復方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組組間比較無統計學意義（P>0.05）。 見表2。

表1 復方消渴降糖膠囊對正常小鼠血糖的影響（±s，n=12）

表1 復方消渴降糖膠囊對正常小鼠血糖的影響（±s，n=12）

注：與A組比較，*P<0.05

組別 動物數（只）劑量（g/kg）血糖值（mmol/L）正常對照組（A組）復方消渴降糖膠囊組高劑量組（B組）復方消渴降糖膠囊組中劑量組（C組）復方消渴降糖膠囊組低劑量組（D組）12 12 12 12-30.0 15.0 7.56.02±1.154.64±0.96*5.44±1.16 5.82±1.28

表2 復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影響（±s，n=12）

表2 復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影響（±s，n=12）

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，△P<0.05

組別 動物數（只）劑量（g/kg）血糖值（mmol/L）正常對照組（A組）四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組（B組）苯乙雙胍陽性對照組（C組）復方消渴降糖膠囊組高劑量組（D組）復方消渴降糖膠囊組中劑量組（E組）復方消渴降糖膠囊組低劑量組（F組）12 12 12 12 12 12--0.2 30.0 15.0 7.56.27±1.08 22.51±3.13*15.46±2.52*△13.95±3.98*△15.39±2.27*△16.08±3.80*△

2.2.4 復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響 與正常對照組比較，四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組在 0、0.5、2.0 h時間點的血糖顯著升高（P<0.05）；與四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組比較，復方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組能顯著控制模型小鼠血糖的升高（P<0.05），復方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組組間比較無明顯差異（P>0.05）。見表3。

表3 復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響（±s，n=12）

表3 復方消渴降糖膠囊對四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響（±s，n=12）

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，△P<0.05

組別 動物數（只）劑量（g/kg）血糖值（mmol/L）0 h 0.5h 2.0 h正常對照組（A）四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組（B組）復方消渴降糖膠囊組高劑量組（C組）復方消渴降糖膠囊組中劑量組（D組）復方消渴降糖膠囊組低劑量組（E組）12 12--6.27±1.08 22.51±3.13*10.76±1.87 37.55±3.72*7.82±1.1527.74±2.73*1230.013.95±3.98*△25.19±5.23*△19.01±3.61*△1215.015.39±2.27*△25.60±3.50*△20.50±2.37*△127.516.38±3.80*△25.65±4.31*△21.75±4.00*△

3 討論

復方消渴降糖膠囊為在研中藥6 類新藥，其處方由番石榴葉、天花粉、生地、山藥、山茱萸、甘草等6 味藥組成。番石榴葉系桃金娘科番石榴屬植物番石榴的干燥葉及帶葉嫩枝，廣東、廣西、四川和云南等地區均有野生及人工栽培[6]，其含有黃酮類化合物、三萜類、鞣質類、揮發油、有機酸等多種活性化學成分[7]，具有明顯的降血糖功降血脂及降血壓作用[8]，能生津止渴，甘平養胃，斂澀固陰，在中外民間均有廣泛使用，為處方中君藥。天花粉Trichosanthis Radix味甘、微苦、性微寒，具有清熱瀉火、生津止渴、消腫排膿之功效；用于熱病煩渴、肺熱燥咳、內熱消渴、瘡瘍腫毒[9]，為臣藥；生地、山藥、山茱萸、甘草共奏養陰生津、滋陰清熱之功效，為佐使藥。全方具有清熱生津，除煩止渴的作用，臨床用于熱病津傷口渴、多飲、多尿、多食、消瘦、體倦無力、尿糖及血糖升高之消渴癥，臨床使用中具有良好的療效。本實驗通過進一步研究其急性毒性及降糖作用，對于該藥物的開發提供數據支持。

糖尿病發病機制復雜，為多種因素綜合的結果[10]，是以慢性血糖水平增高為特征的代謝性疾病群，臨床治療藥物種類大多數為西藥，其不良反應較大，在改善胰島素抵抗方面不理想，而從天然藥物中尋找降血糖有效成分的研究日益受到重視[11]。復方消渴降糖膠囊急性毒性實驗結果顯示，對小鼠灌胃給藥的最大耐受量為142.4 g生藥/kg，當于成人日用量的100 倍以上，安全無毒性[12]。四氧嘧啶是特異性的β細胞毒劑，其在體內通過產生超氧自由基并破壞胰島的β細胞，導致細胞內DNA受到損傷，同時激活多聚ADP核糖體合成酶的活性，進而導致mRNA功能受損，致使β細胞合成前胰島素顯著減少，并引起實驗性糖尿病[13-14]。通過實驗表明，復方消渴降糖膠囊（高劑量組）能顯著降低正常小鼠血糖，能顯著性控制四氧嘧啶性糖尿病小鼠的血糖的升高，并且對于四氧嘧啶性糖尿病小鼠的糖耐量的控制具有良好的效果，研究結果提示復方消渴降糖膠囊具有相似于磺脲類和雙胍類降糖藥的作用[5]，值得進一步研究。目前多數研究表明，復方中藥在降低血糖作用機制方面可能與刺激胰島β細胞釋放胰島素、增加胰島素與靶組織及受體的親和力、促進外周組織對葡萄糖利用或影響到一些和糖代謝途徑關系密切的酶的作用等有關[11]，本研究雖然觀察到復方消渴降糖膠囊具有良好的控制血糖的效果，但其作用機制尚不能解釋清楚。由于復方中藥在治療糖尿病療效方面體現在多靶點，多路徑的調控，所以研究復方消渴降糖膠囊對促進胰島素的分泌，調節體內糖、蛋白質、脂肪的代謝及自由基的影響以及其抗炎及免疫調節作用[15]是下一步研究的方向。

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