氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用定性檢測保健食品和中成藥中非法添加的鎮(zhèn)靜催眠類藥物＊

朱小紅，馬鵬飛，徐 翔

(陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710061)

隨著現(xiàn)代社會(huì)生活壓力的逐漸加大，越來越多的人面臨失眠的困擾，安神類保健食品及中成藥的市場需求日益增長。某些不法廠商為了增強(qiáng)改善睡眠功效、牟取暴利，在安神類保健食品及中成藥中非法添加鎮(zhèn)靜催眠藥，但長期服用含有鎮(zhèn)靜催眠類藥物的保健食品及中成藥，會(huì)嚴(yán)重影響身體健康[1]。鎮(zhèn)靜催眠類藥物最常用的檢測方法主要有薄層色譜法[2]、高效液相色譜(HPLC)法[3]、高效液相色譜 － 質(zhì)譜 /質(zhì)譜(HPLC －MS/MS)法[4]、氣相色譜氮磷檢測法[5]和氣相色譜－質(zhì)譜(GC－MS)法[6]，但多見于某一類藥物在尿樣或血樣中的分析，未見有系統(tǒng)的研究方法，尤其是保健食品和中成藥中的檢測方法報(bào)道。GC－MS聯(lián)用技術(shù)以其特有的優(yōu)勢在非法添加藥物檢測中發(fā)揮著重要的作用。它同時(shí)具有氣相色譜高分離性能及質(zhì)譜準(zhǔn)確鑒定化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，利用計(jì)算機(jī)譜庫檢索技術(shù)，可以不用標(biāo)準(zhǔn)品對照就可推測最大可能的藥物結(jié)構(gòu)，此時(shí)如再用標(biāo)準(zhǔn)化合物進(jìn)行比較，既快速又準(zhǔn)確。為此，筆者建立了定性檢測保健食品及中成藥中非法添加的鎮(zhèn)靜催眠類藥物的GC－MS法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津GCMS－QP2010型氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀;NIST05，NIST05s，WILEY7標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫;DB－5 ms毛細(xì)管色譜柱;低溫冷凍高速離心機(jī)(Anke－GL－20G，上海安亭科學(xué)儀器廠);氮?dú)獯蹈裳b置(MTN－1800W，Auto Science)。巴比妥(批號(hào)為 171220－200602)、異戊巴比妥(批號(hào)為 171221 －200402)、奧沙西泮(批號(hào)為 171229－200603)、勞拉西泮(批號(hào)為 171253 －200401)、地西泮(批號(hào)為 171225 －200903)、氯氮(批號(hào)為 171248－200301)、咪噠唑侖(批號(hào)為 171250－201002)、硝西泮(批號(hào)為 171217－200402)、氯硝西泮(批號(hào)為171227－200302)、艾司唑侖(批號(hào)為1219 －0102)、阿普唑侖 (批號(hào)為 1218－9702)、三唑侖 (批號(hào)為17230－200602)12種對照品，均購于中國藥品生物制品檢定所;司可巴比妥(批號(hào)為9201)、苯巴比妥(批號(hào)為171222－200504)2種對照品，購自國家麻醉實(shí)驗(yàn)室;氯仿、丙酮、無水乙醇均為分析純;20批樣品均為市售品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:采用DB－5 ms彈性石英鍵合毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm × 0.25 μm);程序升溫條件:初始溫度 120 ℃ ，保持1 min，以10℃ /min升溫至230℃，以15℃ /min升溫至270℃，保持 20 min;分流比 5 ∶1;載氣(He，純度大于 99.99%)流速1.7 mL/min;進(jìn)樣口溫度280℃;接口溫度300℃;采用恒壓模式，柱壓135 kPa;進(jìn)樣量1 μL。質(zhì)譜條件:電子轟擊電離源(EI，70 ev)溫度為250℃;Scan模式采集，掃描的質(zhì)量范圍40～350 amu，溶劑延遲時(shí)間2.5 min。在此條件下，14種對照品溶液的色譜圖見圖1，質(zhì)譜圖見圖2。

圖1 序號(hào)1－14的對照品全掃描色譜圖

2.2 溶液配制

對照品溶液:各取14種對照品適量，根據(jù)表1分別選擇無水乙醇、氯仿作為溶劑，制成每1 mL中含1 mg的對照品貯備液，臨用時(shí)加氯仿稀釋至50 μg/mL。供試品溶液:取樣品(膠囊取2粒內(nèi)容物，片劑取4片，顆粒劑取1袋，均研細(xì);軟膠囊取2粒內(nèi)容物)，分別加無水乙醇、氯仿各10 mL超聲處理20 min，3 000 r/min離心5 min，取5 mL上清液，置另一干燥試管中，氮?dú)饬鞔蹈桑俑髯杂? mL無水乙醇、氯仿溶解，經(jīng)0.45 μm針頭濾器過濾后，待進(jìn)樣分析;取樣品[口服液取10 mL，糖漿取5 mL，酒劑取10 mL(蒸去乙醇)]，加水10 mL，加氯仿振搖提取3次，每次10 mL，合并氯仿提取液，離心5 min，取上清液經(jīng)氮?dú)饬鞔蹈桑俑髯杂? mL無水乙醇、氯仿溶解，經(jīng)0.45 μm針頭濾器過濾后，待進(jìn)樣分析。

2.3 方法學(xué)考察

方法靈敏度:取2.2項(xiàng)下各對照品溶液適量，加氯仿分別稀釋制成 20.0，10.0，5.0，2.0，1.0，0.5 μg/mL 的檢測限試驗(yàn)溶液，按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析。結(jié)果各對照品定量限均在0.5～5 ng之間(見表1，S/N=10∶1)，可滿足定性篩查的需要。

專屬性:選用固體樣品(膠囊劑、片劑、顆粒劑、軟膠囊)和口服液等中成藥或保健食品制劑各1批，并另取以上樣品各1份，分別添加14種對照品混合溶液(各0.1 g/L)1 mL，按擬訂的方法處理和測定，比較色譜及質(zhì)譜圖。結(jié)果只在個(gè)別樣品色譜圖中出現(xiàn)與部分對照品保留時(shí)間接近的色譜峰，經(jīng)與對照品質(zhì)譜碎片離子比對和譜庫檢索后，即排除其干擾;擬檢的14種鎮(zhèn)靜催眠類藥物能與普通制劑中共存物質(zhì)區(qū)分。

適用性試驗(yàn):試驗(yàn)中另選擇了HP－5 ms毛細(xì)管色譜柱以及不同批號(hào)的DB－5 ms和Rtx－5 ms色譜柱，并對程序升溫方式和離子源溫度等進(jìn)行了改變，各測試結(jié)果能夠通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，說明該檢測方法對可變試驗(yàn)因素的抗干擾能力較強(qiáng)。

方法重復(fù)性:取各對照品溶液，依法進(jìn)樣6次。結(jié)果保留時(shí)間的 RSD為0.25%，質(zhì)譜碎片離子一致。

2.4 樣品檢測

本研究共收集安神類保健食品及中成藥20批(樣品來源于企業(yè)或由患者提供和從市場購買)。采用Scan模式得到全質(zhì)譜圖后，進(jìn)行質(zhì)譜定性，初步確定可疑樣品，進(jìn)而根據(jù)各目標(biāo)物的保留時(shí)間和表1中的特征離子，采用SIM模式在不同時(shí)間段選擇不同的特征離子進(jìn)行掃描、定量。

表1 標(biāo)準(zhǔn)譜庫信息

3 討論

文中所選的14種鎮(zhèn)靜催眠類藥物極性較弱，熔點(diǎn)低，加熱易揮發(fā)，一般選用弱極性或中等極性毛細(xì)管色譜柱，程序升溫分離。從GC－MS總離子流圖可以看出，對照品混合溶液中的14種化合物具有良好的分離度，滿足色譜分離要求。14種化合物的質(zhì)譜采集后首先進(jìn)行保留時(shí)間比對，再與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫NIST05，NIST05s，WILEY7數(shù)據(jù)檢索結(jié)果相對照，確認(rèn)結(jié)構(gòu)，初步判斷出所含化學(xué)藥物種類，必要時(shí)利用對照品確證。

巴比妥類藥物為丙二酰脲的衍生物，其結(jié)構(gòu)通式中R1和R2多為烷基取代基，取代基不同，藥物的藥理性質(zhì)有所不同。根據(jù)作用時(shí)間分為3類:長效(6～8 h)，如巴比妥、苯巴比妥;中效(3～6 h)，如戊巴比妥;短效(1～3 h)，如司可巴比妥。根據(jù)4種巴比妥類藥物化合物的質(zhì)譜圖，其質(zhì)譜裂解行為推斷如下:首先，化合物在電子的轟擊下失去1個(gè)電子，產(chǎn)生分子離子峰(M+)，由于分子具有酰脲類結(jié)構(gòu)，使化合物更易發(fā)生裂解而脫掉相應(yīng)的碎片。如巴比妥和異戊巴比妥由于含有碳鏈，容易發(fā)生碳－碳鍵的α裂解和γ－H重排后，再發(fā)生β斷裂脫去中性分子，產(chǎn)生2個(gè)豐度較高的離子，其中1個(gè)為基峰(m/z 156)，然后發(fā)生開環(huán)裂解，但作用較弱，產(chǎn)生較弱的離子峰(m/z 141)。苯巴比妥由于具有苯環(huán)和酰脲環(huán)，2個(gè)六元環(huán)具有共軛作用，從而更容易在碳鏈處發(fā)生碳－碳鍵的α裂解和γ－H重排后，再發(fā)生β斷裂脫去中性分子，產(chǎn)生較強(qiáng)的離子峰(m/z 204)。

根據(jù)各化合物總離子流圖上的色譜保留時(shí)間及提取相應(yīng)的質(zhì)譜圖，對非法添加的化合物進(jìn)行鑒定，同時(shí)將其質(zhì)譜圖存入自建的數(shù)據(jù)庫，為以后非法添加化合物的檢測和鑒定打下了基礎(chǔ)。

本試驗(yàn)嘗試建立安神類保健食品及中成藥中添加鎮(zhèn)靜催眠類化學(xué)藥品的檢測方法，該方法簡單、靈敏度高、穩(wěn)定性好，完全可以滿足對非法添加化學(xué)藥品的檢測要求，為建立此類標(biāo)準(zhǔn)和監(jiān)控方法提供了依據(jù)。

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