寶曲對家兔實驗性動脈粥樣硬化影響的研究

孟健

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是危害人類健康最常見的一種疾病，累及冠狀動脈、腦動脈及肢體動脈，后果嚴重。近年來大量研究表明寶曲在調節血脂、抗氧化保護血管內皮細胞等方面發揮著重要的作用。本實驗旨在通過寶曲對兔動脈硬化形成的影響，分析其抗動脈粥樣硬化的作用途徑。

1 材料與方法

1.1 材料 ①實驗動物:健康的日本大耳兔24只，雌雄各半，兔齡4個月，由北京科宇動物養殖中心提供(許可證號:SCXK京2010-0003)。②藥品與試劑:寶曲由上海德豐堂生物科技有限公司生產，批號為20100702;總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)檢測試劑盒由上海名典生物工程有限公司提供;高密度脂蛋白(HDL)檢測試劑盒由波音特生物科技有限公司提供;其他試劑均為分析純。③主要儀器:7170全自動生化分析儀(日立公司)。

1.2 方法 ①動物飼養環境:分籠開放飼養，普通兔飼料和高脂兔飼料(普通飼料+10 g/L膽固醇+80 g/L豬油)均由北京科奧協力飼料有限公司提供。②動物分組及模型建立:普通飼料適應性喂養1周后，隨機分為3組，各8只?？瞻捉M給予普通飼料加蒸餾水喂養;模型對照組給予高脂飼料加蒸餾水喂養;寶曲量組給予高脂飼料加蒸餾水喂養。除空白對照組外，其余各組給予兔耳中動脈部一次性注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)，使動脈發生免疫損傷，5周后形成類似人的動脈粥樣硬化病變。③給藥方法:寶曲組給予87.2 mg/kg，灌胃容量2 ml/kg，1次/d。高脂組、空白組每日給與相同劑量蒸餾水一次，試驗周期為7周。

1.3 觀測治標及方法

1.3.1 血脂測定 喂飼12周后，各兔禁食12 h后，于各組兔耳緣靜脈取血分離血清，按試劑盒方法測血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。

1.3.2 主動脈的病理學檢查 ①動脈粥樣斑塊面積、斑塊指數的測算:空氣栓塞法處死實驗動物，取部分頸動脈，包埋做切片，觀察動脈粥樣斑塊;從主動脈弓到腹主動脈髂前分叉處取下主動脈，生理鹽水洗凈后蘇丹染色，數碼相機照相，輸入計算機用Adobe illustrator圖片處理軟件測算斑塊面積。于10×10倍光學顯微鏡下觀察主動脈壁形態，并用測微尺測量斑塊厚度及主動脈壁厚度，計算斑塊指數(斑塊指數=斑塊面積斑塊厚度)。②內膜厚度與中膜厚度比值的測算:在10×10倍放大條件下，用1/10目鏡測微尺測量動脈內膜厚度及中膜厚度。以內膜最厚處為中心，測量該點的內膜厚度及中膜厚度，算出其比值，然后將動脈等距分成5點(包括中心點)，分別測其比值，取該樣本的平均值。③動脈內膜單位面積內泡沫細胞數(內膜泡沫細胞密度):在40×10倍放大條件下，用目鏡測微尺及手控計數器分別計算上述5個點，25個小格內的泡沫細胞數，取該動物全部切片的平均值，算出每mm2內的泡沫細胞數，即為該動脈內膜單位面積內的泡沫細胞數。

2 結果

2.1 寶曲對血脂的影響 結果表明，給予高脂飼料12周后，模型組兔空腹血清TC、TG較空白組顯著升高，而HDL-C值明顯降低。但在相同飼養條件下，給予寶曲組兔的空腹血脂變化和高脂組相比表現為TC、TG顯著降低，HDL-C顯著升高，見表1。

表1 寶曲對兔血脂水平的影響(mg/dl，±s)

表1 寶曲對兔血脂水平的影響(mg/dl，±s)

注:與空白組比較，△△P ＜0.01，△P＜0.05;與模型組比較，＊＊P ＜0.01

組別TC TG HDL-C空白組47.21±14.63 49.05±10.02 24.58±4.38模型組 288.46±19.57△△ 83.27±9.50△△ 19.05±6.33△寶曲組 151.38±8.09＊＊ 60.91±8.85＊＊ 49.32±8.81＊＊

2.2 主動脈形態學變化空白組主動脈內膜等結構完整，內皮下無脂質沉淀或斑塊形成;模型組與空白組比較內膜增厚，內膜厚度/中膜厚度比值顯著增加，同時形成明顯的粥樣斑塊，可見大量泡沫細胞，嚴重者泡沫細胞崩解，膽固醇結晶形成;寶曲組的內膜增厚程度及結締組織成分與模型組比較均顯著減輕，泡沫細胞也少于模型組。表明寶曲據有減輕主動脈AS形成的作用。

表2 寶曲對主動脈形態學的影響表(±s)

表2 寶曲對主動脈形態學的影響表(±s)

注:與空白組比較，△△P＜0.01，△P＜0.05;與模型組比較＊＊P＜0.01，*P＜0.05

2組別 斑塊面積(mm) 斑塊指數 內膜厚度/中膜厚度 泡沫細胞數(個/mm2)空白組0.05±0.01 1.5±1.2模型組 653.4±199.5△△ 296±158△△ 0.94±0.15△△ 14.2±6.9△△寶曲組 273.8±101.1＊＊ 16±6＊＊ 0.11±0.09＊＊ 4.1±1.9 0 0*

3 討論

現代醫學研究表明，血管內皮細胞損傷是動脈粥樣硬化形成的始動環節，兩者又相互影響，兼顧這兩種致病因素是非常必要的。近年研究表明血管壁內中膜厚度(IMT)是AS的早期改變，斑塊形成是AS的明顯特征，它可反應AS的程度［1］。在動脈粥樣硬化形成過程中，由于單核細胞和平滑肌細胞遷移、黏附、增生，并形成泡沫細胞。泡沫細胞崩解后釋放出的脂質形成脂質核心，從而使病變進入不可逆階段并形成粥樣斑塊［2，3］。

本實驗證實，應用寶曲的兩治療組血清中TC、TG顯著降低，HDL-C明顯升高，提示寶曲能通過降低TC、TG和升高HDL-C干預動脈粥樣硬化的發生發展。應用寶曲能顯著減輕內膜增厚程度、結締組織成分以及泡沫細胞，表明寶曲據有減輕主動脈AS形成的作用。

［1］ Raso EM，Kramer C，Castrol.Association between coronary arterya the roscie rosis and the intima-media thickness of the common carotid artery measured on ultrasonography.ArqBras Cardiol，2003，80(3):589-592．

［2］ 李欣，廖新學，廖曉星，等.銀杏葉提取物對動脈粥樣硬化的防治作用研究.中華急診醫學雜志，2004，13(9):609-611．

［3］ GalleJ，Quaschning T，Seibold S，et al.Endothelial dysfunction andi nflammation:what is the link．Kidney Int Suppl，2003(84):45-49．