異香豆素對(duì)老年癡呆小鼠β淀粉樣蛋白的影響

尹立 韓偉 馬曉健 鄔賢斌 胡繼實(shí) 盧瓊

阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)又稱原發(fā)性老年癡呆(senile dementia), 是一種以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病[1],其發(fā)病率隨年齡的增加而增高，成為僅次于心腦血管疾病和癌癥的高發(fā)性疾病[2]。目前AD的發(fā)病機(jī)制尚未明了，臨床上也缺乏有效的治療藥物，近年來(lái)對(duì)中藥及其提取物治療AD的研究不斷取得進(jìn)展[3]，因此，本研究使用異香豆素觀察其對(duì)老年癡呆小鼠的抗癡呆作用，并探討其相關(guān)的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器 異香豆素為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，Aβ放免試劑盒購(gòu)自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所，小鼠Morris水迷宮裝置及跟蹤系統(tǒng)為成都泰盟公司生產(chǎn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和癡呆模型建立 昆明種小鼠50只，鼠齡2～3個(gè)月，體重30～34g，雌雄各半，由我校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。小鼠按體重隨機(jī)分為對(duì)照組（10只）和模型組（40只），模型組再分為：模型對(duì)照組（10只）、低劑量異香豆素治療組（10只）、中劑量異香豆素治療組（10只）、高劑量異香豆素治療組（10只）。對(duì)照組和模型對(duì)照組給予生理鹽水處理，異香豆素治療組分為低（5mg/Kg）、中（10mg/Kg）、高（20mg/Kg）三個(gè)劑量每日灌胃一次。

癡呆模型建立：參照Alsei等[4]的方法構(gòu)建老年癡呆小鼠模型，簡(jiǎn)述如下：模型組小鼠每日注射D-半乳糖（120mg/Kg）+亞硝酸鈉（90mg/Kg），連續(xù)2個(gè)月。

1.3 小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn) 迷宮圓形直徑80cm，高44cm，安全臺(tái)直徑8cm，高20cm，按照儀器說(shuō)明書完成定向游泳實(shí)驗(yàn)，在安全臺(tái)上停留超過(guò)2s為成功，每天訓(xùn)練2次，共4 d，從入水到到達(dá)安全臺(tái)的時(shí)間為逃避潛伏期，記錄動(dòng)物游泳軌跡。

1.4 放射免疫法測(cè)定小鼠腦組織Aβ含量 實(shí)驗(yàn)結(jié)束，斷頸處死小鼠，分離腦組織，制備單細(xì)胞懸液，裂解細(xì)胞按照放免試劑盒的說(shuō)明操作檢測(cè)各處理組中Aβ的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用方差分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)連續(xù)性資料以（±s）表示，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 異香豆素對(duì)小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)的影響

老年癡呆小鼠模型組與對(duì)照組對(duì)照比較，逃避潛伏時(shí)間出現(xiàn)顯著性的延長(zhǎng)（P＜0.01），平臺(tái)跨越次數(shù)顯著性的減少（P＜0.01）。異香豆素治療后老年癡呆小鼠的逃避潛伏時(shí)間和平臺(tái)跨越次數(shù)得到顯著性的改善（P＜0.05），見表1。

表1 各處理組小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

2.2 異香豆素對(duì)老年癡呆小鼠腦組織Aβ表達(dá)的影響 對(duì)照組、模型對(duì)照組、低劑量異香豆素治療組、中劑量異香豆素治療組、高劑量異香豆素治療組腦組織Aβ的表達(dá)水平分別為（1.01±0.44）pg/ml、（12.89±3.21）pg/ml、（10.45±2.06）pg/ml、（7.18±1.92）pg/ml、（4.07±1.24） pg/ml，各組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。

3 討論

D-半乳糖是目前公認(rèn)的AD小鼠造模方法，D-半乳糖可以誘發(fā)神經(jīng)元退行性變，造成亞急性癡呆模型，本研究就是用此法構(gòu)建了AD小鼠模型。β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein，Aβ)的聚集和神經(jīng)原纖維纏結(jié)是阿爾茨海默病的主要病理變化，也是老年斑的核心成分，Aβ的聚集可以導(dǎo)致氧自由基的升高、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和神經(jīng)系統(tǒng)退行性變，因此，抑制Aβ的生成是治療阿爾茨海默病的更佳方案[5]。異香豆素屬于苯丙吡喃酮類化合物，是一些天然產(chǎn)物的基本結(jié)構(gòu)，廣泛分布于自然界中，具有抗菌、消炎、抗癌、抑制蛋白酶等多種生物活性，有著良好的開發(fā)應(yīng)用前景，近期的研究顯示，一些具有異香豆素母核結(jié)構(gòu)的化合物能有效地抑制Aβ的產(chǎn)量[6-7]。本研究使用異香豆素治療AD小鼠，結(jié)果顯示，異香豆素治療后老年癡呆小鼠的逃避潛伏時(shí)間和平臺(tái)跨越次數(shù)得到顯著性的改善（P＜0.05），而且老年癡呆小鼠腦組織中Aβ的表達(dá)水平也出現(xiàn)劑量依賴性的下降（P＜0.01），說(shuō)明了異香豆素具有抗AD小鼠癡呆的活性。

綜上所述，異香豆素具有抗AD小鼠癡呆的活性，減少AD小鼠腦組織Aβ的生成是其主要的作用機(jī)制，有望將異香豆素開發(fā)為靶向治療AD的一類新藥。

[1]蘇燕,何粵紅,李超.阿爾茨海默病β淀粉樣蛋白藥物治療的研究進(jìn)展[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2011,17(3):32-33.

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[7]李麗,楊錦飛,袁相愛.異香豆素類化合物的合成研究及新進(jìn)展[J].南京師范大學(xué)學(xué)報(bào)(工程技術(shù)版),2005,5(2):64-67.