聯合檢測ASAb、EMAb和AMH對不孕不育癥的臨床研究

王燕

不孕癥是指在有正常性生活的情況下，未經避孕一年未妊娠者。該病的發病率近年來呈上升趨勢，我國的發病率約為7%～10%，這一定程度上危機了家庭生活的穩定。不孕癥病因復雜，有約10%～20%的患者病因不明，免疫性因素常常是導致其發生的主要原因之一［1－3］。另外男性精液質量及女方因素均在不孕的過程中發揮這重要作用。Weenen等［4］的研究發現抗苗勒管激素(AMH)可以抑制卵泡對卵泡刺激素的敏感性，并能抑制卵巢始基卵泡的起始募集，對卵泡的生長發育具有調節作用，可以較好的評估卵巢的儲備功能。本研究以抗精子抗體(ASAb)、抗子宮內膜抗體(EMAb)及抗苗勒管激素(AMH)為觀察指標，分析其在不孕不育患者體內的分布情況，探討其與不孕發生的關系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年5月至2011年5月來我院就診的不孕不育夫婦100對，為觀察組，年齡23～37歲，平均年齡(26.1±2.0)歲，婚后未采取任何避孕措施的不孕時間為2～4年，平均(2.5±1.3)年。入選條件:結婚1年以上、夫婦性生活正常、未采用任何避孕措施而無孕育史的夫婦;男方無遺傳性疾病家族史，無慢性疾病，泌尿外科檢查未發現睪丸、附睪及輸精管異常;女方無遺傳性疾病家族史，無慢性疾病，卵泡發育正常，有正常的排卵周期，婦科檢查陰道、子宮、輸卵管及卵巢未發現異常。以同時期有正常生育史的健康夫婦50對為對照組:體格檢查健康的有正常育史的育齡非孕狀態夫婦50對，泌尿外科及婦科檢查無異常。2組研究對象均知情同意，且在年齡、體重指數、文化程度上的差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 測量方法 所有研究對象與清晨空腹抽取靜脈血2 m l，女性患者與月經后第2天清晨空腹抽取，離心分離血清，－20℃保存待檢。男性均在禁欲5～7 d后，手淫法采取精液進行精液分析。選用酶聯免疫法(ELISA)檢測研究對象血清或精液中的抗體。檢測試劑盒為美迪科生物技術有限責任公司生產，并按其操作說明進行試驗。用酶標儀分別測處對照孔及標本孔的OD值。由對照孔OD值計算Cutoff值，標本孔OD值＜Cutoff值為陰性，反之為陽性;用美國DSL公司生產的試劑盒，采用ELSA方法定量測量血清AMH值。

1.3 統計學分析應用SPSS13.0統計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗或精確概率法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組血清各指標水平的比較 男性觀察組中，血清ASAb陽性［29例(29%)］，高于觀察組［1例(2%)］，差異有統計學意義(χ2=4.57，P ＜0.01);女性不孕組血清 ASAb、EMAb 陽性率均顯著高于對照組(P＜0.01);AMH水平也較對照組高(P＜0.01)，聯合檢測ASAb及EMAb陽性率顯著提升(P ＜0.01)，并高于單獨檢測(P ＜0.05)。見表1。

表1 2組女性研究對象血清各指標水平的比較 例(%)

2.2 男性精液ASAb分析 觀察組精液分析異常者57例(57%)，顯著高于正常對照組2例(4%，P ＜0.01);觀察組異常精液ASAb陽性者23例(40.4%)顯著高于精液正常者(6例，14.0%;χ2=3.27，P=0.037)。

2.3 各觀察指標相關性分析 觀察組中，ASAb陽性組中EMAb陽性率48.3%要高于 ASAb陰性組23.9%(P ＜0.05);同時EMAb陽性組中ASAb陽性率45.2%要高于EMAb陰性組21.7%(P ＜0.05)，說明無論是ASAb或EMAb任何一項出現陽性，另一項指標出現陽性的概率也性相應增加;但該兩項指標出現陽性均與AMH水平的高低無關。見表2、3。

表2 觀察組ASAb陽性與ASAb陰性患者血清EMAb、AMH的比較

表3 觀察組EMAb陽性與EMAb陰性患者血清ASAb、AMH的比較

3 討論

不孕癥指婚后有正常性生活，未避孕1年以上未懷孕者，多與精液異常、生殖器炎癥、女性排卵功能異常，性傳播疾病、內分泌失調、生殖器異常、過度減肥等有關。免疫因素在不孕的發生中發揮了重要作用。精子對女性來說雖為異物，但通常情況下并不產生抗體，這是由于女性體內的免疫自動調節及精漿內的免疫抑制因子共同所致。但某種情況下，如子宮內膜炎、經期時接觸精子或生殖道損傷、精漿內免疫抑制因子等，均可造成精子被抗原提呈細胞處理，誘發機體免疫反應而產生抗體［5］。同樣，由于血睪屏障的存在，男性精液中一般也無抗ASAb出現，但當屏障破壞、炎癥，生殖道阻塞等發生時，可產生針對精子的抗原［6］。精液中 ASAb的出現使得精液質量下降［7］。本研究中，男性不孕患者精液質量異常者ASAb含量顯著高于正常者，提示ASAb是造成精液質量下降的原因，與文獻報道類似。研究表明在女性生殖道和血清中的AsAb可影響受精的一系列過程，從而引起免疫性不孕。國外報道不明原因不孕婦女血清中AsAb陽性率為1.3% ～7.3%［8］，宮頸黏液中陽性率高達29.6%［9］。本研究中不孕組ASAb陽性率為29%，高于國外報道，但與國內學者研究結果［10］類似。

與ASAb類似，正常情況下人體并無EMAb產生，但在某些情況下如子宮內膜異位癥、人流創傷、慢性炎癥等使得子宮內膜碎片被抗原遞呈細胞處理而產生抗體。另外，患者出現免疫功能失調時，也會產生EMAb。EMAb除了與異位的子宮內膜反應，也與正常子宮內膜發生免疫反應，激活補體系統，產生局部免疫病理變化，直接影響子宮內膜腺體的功能，從而導致孕卵著床失敗或 (和)不育，最終以不顯性的早期流產而告終［11，12］。本研究中，不孕組血清/精液中 ASAb，EMAb 陽性率要顯著高于正常對照組，提示抗體在不孕的發生中發揮了一定的作用，且該兩項指標的出現具有一定的相關性，可能與患者免疫功能異常有一定關系。

AMH最初是由于其可以促進雄性胎兒苗勒管退化得名［13］。研究發現 AMH可用于 PCOS和 POF疾病的輔助診斷［14］。另外，AMH可用來預測絕經期的到來［15］，以及繼發性閉經的鑒別診斷［16］。動物試驗表明，AMH可以抑制卵泡生長［17］，并能準確地反映卵巢的功能狀態，本研究中不孕組血清AMH水平高于正常組，提示不孕患者卵巢功能存在異常;但其與ASAb，EMAb陽性結果并無相關性，其可能作為一個獨立的因素影響不孕的發生。影響血清AMH水平的因素很多，目前尚無權威機構報道其正常值范圍，但已經確定年齡因素對其影響較大［18］，且通過對其水平的測定，可以較好的預測卵巢對促排卵藥物的反應性［19］。

總之，不孕患者體內ASAb，EMAb陽性率，血清AMH水平高于正常對照人群，提示它們在不孕的發生中發揮了一定的作用;ASAb與EMAb陽性表達存在一定相關性，但二者均與AMH不存在相關性，提示AMH作為一個獨立的因素影響不孕的發生;聯合檢測對尋找不孕原因及采取相應政策具有重要意義。

1 Collins JA，Cxosignani PG.Unexplained infertility:a review of diagnosis，prognosis，treatment etticacy and mangenment.Int J Gynecol Obstet，1992，39:267.

2 Nagaraja AK，Andreu-Vieyra C，Franco HL，et al.Deletion of Dicer in somatic cells of the female reproductive tract causes sterillity.Mol Endocrinol，2008，22:2336-2352.

3 楊再國，姚安延.876例不孕不育患者免疫性抗體檢測結果分析.四川生殖衛生學院學報，2008，28:4-5.

4 Weenen C，Laven JS，Von Bergh AR，et al.Anti-Mttllerian hormone expression pattern in the human ovary:potential implications for initial and cychc follicle recruitment.Hum Reprod，2004，10:77-80.

5 Seifer DB，Maclaughlin DT.Mullerian inhibiting substance levels and ovarian response.Fertil Steril，2007，88:539-546.

6 樂杰主編.婦產科學.第6版.北京:人民衛生出版社，2004.381.

7 蔣玉清，林英立，馬建國，等.抗精子抗體和抗心磷脂抗體在不育夫婦血清中的表達及意義.中國性科學，2010，19:11-14.

8 Hadinedoushan H，Ghafourzadeh M.A survey of anti-sperm antibodies in infertile couples.Iranian JReprod Med，2007，5:39-40.

9 Menge AC，Beitner O.Interrelationships among semen characteristics，anti-sperm antibodies，and cervicalmucus penetration assays in infertile human couples.Fertil Steril，1989，51:486-492.

10 屈萍，武雅莉，劉郁明.不孕(育)癥患者精漿、宮頸分泌物中抗精子抗體檢測結果.中國優生與遺傳雜志，2009，17:128.

11 Meek SC，Hodge DD，Musich JR，et al.Autoimmunity in infertile patients with endometrosis.Am JObstet Gynecol，1998，158:1365.

12 Arici A.Local cytokines in endometrial tissue:the role of interleukin-8 in the pathogenesis of endometriosis.Ann NY Acad Sci，2002，955:101-109.

13 Di Clement N，Belvi Ue C.Mullerian hormone receptor defect.Best Praet Res Clin Endocrinol Metab，2006，20:599-610.

14 Broekmans FJ，Visser JA，Laven JS，et al.Anti-Müllerian hormone and ovarian dysfunction.Trends Endocrinol Metab，2008，19:340-347.

15 Rohr J，Allen EG，Charen K，et al.Anti-Mullerian hormone indicates early ovarian decline in fragile X mental retardation(FMR1)premutation carriers:a preliminary study.Hum Reprod，2008，23:1220-1225.

16 Broer SL，EijkemansMJ，Scheffer GJ，etal.Anti-mullerian hormone predictsmenopause:a long-term follow-up study in normoovulatory women.JClin Endocrinol Metab，2011，96:2532-2539.

17 Durlinger AL，Gruijters MJ，Kramer P，et al.Anti-Mullerian hormone attenuates the effects of FSH On follicle development in themouse ovary.EndocrinoI，2001，142:4891-4899.

18 任妞，劉彥.生育期女性血清抗苗勒管激素水平的研究.中國婦產科雜志，2011，12:281-283.

19 Gustafson ML，Lee MM，Scully RE，et al.Mullerian inhibiting substance as amarker for ovarian sex-cord tumor.N En JMed，1992，326:466-471.