TTF-1在漿膜腔積液肺腺癌細胞中的表達研究

劉焱 劉霖 呂曉梅

近半個世紀以來，傳統體液細胞學檢查在腫瘤防治工作中起到了重要作用。現代醫學對漿膜腔積液細胞學診斷提出了更高要求，僅憑借細胞涂片常規HE染色判斷良惡性是不夠的，還需盡可能找出轉移性腫瘤的原發灶。我們收集65例漿膜腔積液中轉移性腺癌病例，用細胞塊免疫化學染色方法，探討甲狀腺轉錄因子-1(TTF-1)在肺腺癌細胞中的表達，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2009至2011年臨床科室送檢漿膜腔積液轉移性腺癌65例(胸水49例、腹水15例、心包積液1例)，其中男41例，女24例。臨床資料及活檢證實肺腺癌45例，乳腺癌9例，卵巢癌4例，結腸癌4例，胃癌2例，胰腺癌1例。見表1。

表1 漿膜腔積液中的轉移性腺癌 例

1.2 試劑 選用北京中杉金橋生物技術有限公司免疫組化試劑鼠抗人單克隆抗體甲狀腺轉錄因子-1(TTF-1)，按說明書的實驗步驟操作。

1.3 方法 全部標本用一次性膜式細胞采集器制作普通細胞涂片，95%乙醇固定，常規HE染色，顯微鏡下觀察。診斷為腺癌的標本，用市售10 ml塑料試管重新收集，離心機2 000 r/min離心10 min，棄去上清液，在該試管中重新加入標本，重復上述步驟，直到得到足夠的沉渣為止。取沉渣加入10%的中性緩沖甲醛固定、振蕩、再次離心，棄去上清液，沉淀物用棉紙包裹，10%的中性緩沖甲醛固定4 h，常規全自動標本脫水處理機脫水、透明、浸蠟后包埋，制成4 μm厚的細胞塊石蠟切片，選用北京中杉金橋生物技術有限公司免疫組化試劑鼠抗人單克隆抗體TTF-1染色，按說明書的實驗步驟操作，由高年資醫師結合臨床資料閱片診斷。

1.4 判斷標準的設定 免疫組化染色：細胞核出現彌漫的棕黑色顆粒認為是陽性，5%以上的靶細胞出現定位清楚的棕黃色顆粒為陽性表達，完全不著色的為陰性表達，介于二者之間的為不確定表達。根據陽性信號出現的強度分為弱、中、強三級;根據陽性信號出現的范圍分為-(少于5%的癌細胞顯示陽性)、+(6% ～25%的癌細胞顯示陽性)、++(26% ～50%的癌細胞顯示陽性)、+++(超過50%的癌細胞顯示陽性)。

1.5 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HE染色觀察 漿膜腔積液中的腺癌細胞有明顯異型性，核漿比大，其胞核為圓形或卵圓形，核偏位或居中，核膜清晰并增厚，可規整或輕度不規整，核仁清晰并增大，核染色質粗顆粒狀分布不均，胞質內有透亮區。細胞團呈三維立體團結構，呈腺管狀、乳頭狀、小梁狀、球形等外觀(常規細胞學涂片與細胞塊切片的三維立體結構很相似，細胞塊切片中，中空的腺樣結構、囊泡狀結構、乳頭狀結構更多見。)細胞之間連接緊密或松散。

2.2 免疫細胞化學染色 漿膜腔積液普通涂片篩選出轉移性腺癌65例，收集沉渣制成4 μm厚的細胞塊石蠟切片，選用北京中杉金橋生物技術有限公司免疫組化試劑鼠抗人單克隆抗體甲狀腺轉錄因子-1(TTF-1)染色。45例肺腺癌中有39例TTF-1陽性表達，敏感性(86.67%)，20例肺外腺癌有1例TTF-1陽性表達，特異性為(95%)。差異有統計學意義(P＜0.01)。見表2。

表2 TTF-1在漿膜腔積液肺腺癌及肺外腺癌中的表達 例

3 討論

轉移性腺癌是漿膜腔積液中最常見的惡性腫瘤，胸腔積液、腹腔積液及心包積液中，以肺腺癌、乳腺癌、胃癌、腸癌、卵巢癌的癌細胞轉移多見，其中以肺腺癌最為常見［1-3］。傳統體液細胞學檢查在腫瘤防治工作中起了重要作用。但多年來，漿膜腔積液的細胞學診斷停留在“找到瘤細胞”和“未找到瘤細胞”的水平。現代醫學診斷和治療學發展的需要，要求我們對漿膜腔積液的診斷更為明確，既要定良惡性，還要分類、分型，甚至對于臨床表現只有漿膜腔積液而未發現原發灶的患者，還要求通過細胞學診斷判定腫瘤的來源。器官特異性抗體的出現為確定原發灶提供了可能。

TTF-1是最近才認識的一種器官特異性抗體，它是一種分子量為38kDa的核蛋白，是NK×2轉錄因子家族中的一員，表達于肺和甲狀腺的上皮細胞、甲狀腺濾泡旁C細胞、胚胎大腦的某些區域［4，5］。其它部位的上皮細胞如肝細胞，胃腸道上皮細胞，乳腺導管上皮細胞，腎和前列腺的上皮細胞均不表達，間皮源性細胞也不表達，因此TTF-1可以用于鑒別轉移性腺癌細胞和間皮源性細胞，還有助于確定腺癌細胞的來源。組織學研究發現TTF-1在肺腺癌、甲狀腺癌(包括濾泡性癌和髓樣癌)中的敏感性和特異性都很高［6-9］，本組試驗數據表明TTF-1在漿膜腔積液轉移性肺腺癌細胞具有較高的敏感性和特異性，所以在排除甲狀腺癌的可能性后，TTF-1陽性表達很大程度上提示腺癌細胞原發于肺。

細胞塊免疫細胞化學染色操作簡便，所需費用少。TTF-1表現為核陽性，背景清晰，陽性結果容易判斷。有些研究報導，TTF-1在肺和肺外其他器官的小細胞癌、肺硬化性血管瘤也有很高敏感性和特異性［10］，有待于進一步研究。

1 Gomez-Fernandez C，Jorda M，Delgado PI，Ganjei-Azar P.Thyroid transcription factor 1.Cancer，2002，96：289-293.

2 Sears D，Hajdu SI.The cytologic diagnosis of malignant neoplasms in pleural and peritoneal effusions.Acta Cytol，1987，31：85-97.

3 Fluids.In：Demay RM，editor.The art and science of cytopathology.1st ed.Chicago：ASCP Press，1996.257-325.

4 Fabbro D，Di Loreto C，Stamerra O，et al.TTF-1 gene expression in human lung tumours.Eur J Cancer，1996，32A：512-517.

5 Lazzaro D，Price M，de Felice M，et al.The transcription factor TTF-1 is expressed at the onset of thyroid and lung morphogenesis and in restricted regions of the foetal brain.Development，1991，113：1093-1104.

6 Khoor A，Whitsett JA，Stahlman MT，et al.Unility of surfactant protein B precursor and thyroid transcription factor 1 in differentiating adenocarcinoma of the lung from malignant mesothelioma.Hum Pathol，1999，30：695-700.

7 Kaufmann O，Dietel M.Thyroid transcription factor-1 is the superior immunohistochemical marker for pulmonary adenocarcinomas and large cell carcinomas compared to surfactant proteins A and B.Histopathology，2000，36：8-16.

8 Katoh R，Miyagi E，Nakamura N，et al.Expression of thyroid transcription factor-1(TTF-1)in human C cells and medullary thyroid carcinomas.Hum Pathol，2000，31：386-393.

9 Katoh R，Kawaoi A，Miyagi E，et al.Thyroid transcription factor-1 in normal，hyperplastic，and neoplastic follicular thyroid cells examined by immunohistochemistry and nonradioactive in situ hybridization.Mod Pathol，2000，13：570-576.

10 蘇學英，李甘地.TTF-1在漿膜腔積液轉移性肺腺癌細胞中的表達臨床與實驗病理學雜志，2004，6：706-708.