子癇前期胎盤組織中STOX1的表達(dá)及意義

姬立芹 陳文萍 范文勇 李大志

[摘要] 目的 探討STOX1在子癇前期發(fā)病中的作用及臨床意義。 方法 免疫組化檢測(cè)正常妊娠及子癇前期胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)情況；Western blot檢測(cè)胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果 STOX1蛋白主要表達(dá)于絨毛的合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞，與正常妊娠組相比，子癇前期胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05），重度子癇前期組胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)明顯高于輕度子癇前期組（P＜0.05），輕度子癇前期組胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)明顯高于正常妊娠組（P＜0.05）。 結(jié)論 STOX1與子癇前期的發(fā)病密切相關(guān)，在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展中可能起到重要作用。

[關(guān)鍵詞] STOX1；子癇前期；胎盤

[中圖分類號(hào)] R714.56???[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A???[文章編號(hào)] 2095-0616（2012）15-31-03

Expression and significance of STOX1 in placenta of preeclampsia

JI?Liqin??CHEN?Wenping??FAN?Wenyong??LI?Dazhi

Department of Obstetrics and Gynecology,People's Hospital of Bao'an District in Shenzhen,Shenzhen 518101, China

[Abstract] Objective To investigate the expression of STOX1 protein in placenta of preeclampsia. MethodsImmunohistochemistry staining assay and western-blot was used to observe the expression of STOX1 protein in placental tissue from 67 cases of preeclampsia and35 cases of nomal pregnancy. Results STOX1 protein were mostly found in syncytiotrophoblast and cytotrophoblast.The expression level of STOX1 protein in preeclampsia placenta was significantly higher compared with the normal pregnancy group(P＜0.05).The expression level of STOX1 protein in group of sever preeclampsia was significantly higher compared with the mild pre-eclampsia group(P＜0.05),the expression level of STOX1 protein in group of mild preeclampsia was significantly higher than that in the group of normal pregnany(P＜0.05). Conclusion STOX1 may have a positive relationship with the degree of hypertensive disorder complicating pregnancy and play an important role in the pathogenesis and development of this disease.

[Key words] STOX1;Preeclampsia;Placenta

子癇前期是妊娠期高血壓疾病的常見類型，嚴(yán)重影響母嬰健康，病因及發(fā)病機(jī)制迄今不明，為研究的重點(diǎn)。子宮-胎盤缺血被認(rèn)為是發(fā)病的重要原因之一，也是重要的病理改變。目前認(rèn)為子宮-胎盤循環(huán)的有效建立與滋養(yǎng)細(xì)胞能否正常浸潤(rùn)胎盤床有關(guān)。STOX1是新發(fā)現(xiàn)的與子癇前期密切相關(guān)的母系印跡基因。研究表明，其在胎盤的生長(zhǎng)發(fā)育中扮演著重要角色[1]。本研究通過免疫組化和Western blot技術(shù)檢測(cè)子癇前期及正常妊娠組織中STOX1蛋白的表達(dá)情況，為進(jìn)一步闡明子癇前期的發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1?資料與方法

1.1?一般資料

選取2010年10月～2011年10月筆者所在醫(yī)院住院分娩的67例子癇前期患者作為觀察組，同期住院分娩患者3 200例中隨機(jī)抽取35例血壓正常且蛋白尿陰性的患者作為對(duì)照組。子癇前期的診斷、分類標(biāo)準(zhǔn)均按照全國統(tǒng)編教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版的標(biāo)準(zhǔn)，其中輕度子癇前期患者34例，重度子癇前期患者33例，正常妊娠分娩患者35例，各組患者均無高血壓家族史及慢性腎炎史，年齡和孕周比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2?材料

兔抗人STOX1多抗為Sigma公司產(chǎn)品，辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗購自加拿大Santa Cruz公司，免疫組化SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。BCA蛋白定量試劑盒購自美國Pierce公司。

1.3?方法

1.3.1?免疫組化檢測(cè)胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)?（1）標(biāo)本采集：胎盤標(biāo)本經(jīng)10%的中性福爾馬林液固定后，低溫石蠟包埋，制成4μm厚連續(xù)切片；（2）采用免疫組織化學(xué)二步法檢測(cè)STOX1在胎盤中的表達(dá)，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。同時(shí)以磷酸鹽緩沖液（PBS，pH=7.4）替代一抗作陰性對(duì)照。（3）結(jié)果判定：陽性細(xì)胞表現(xiàn)為鏡下組織結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞漿著色呈淡黃色，強(qiáng)陽性的地方呈棕黃色，復(fù)染后細(xì)胞呈藍(lán)色。每張切片隨機(jī)選5個(gè)高倍視野（×400），采用IPP圖像分析軟件測(cè)定陽性產(chǎn)物的平均光密度（OD）值，以此反映STOX1蛋白在胎盤組織中的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.2?Western-blot檢測(cè)胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)?按蛋白裂解液說明書提取胎盤組織中的總蛋白，樣本蛋白按5∶1加入上樣緩沖液煮沸變性后待用。取等量蛋白樣本加入SDS-PAGE凝膠槽中進(jìn)行電泳（濃縮膠60 V，20 min，分離膠120 V，60 min）。轉(zhuǎn)至PVDF膜，經(jīng)5%脫脂奶粉室溫封閉4 h，加入1∶5000稀釋的抗STOX1一抗，室溫孵育3 h，TBST洗3次，加入辣根過氧化酶標(biāo)記的二抗（1∶1 000），室溫孵育1 h，TBST洗3次。加ECL化學(xué)發(fā)光劑，X線片暗室曝光，常規(guī)顯影、定影。洗片后用激光掃描儀進(jìn)行定量分析。以β-actin為內(nèi)參照物，STOX1與β-actin的條帶灰度值的比值表示STOX1蛋白表達(dá)水平。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?免疫組化檢測(cè)胎盤組織中STOX1蛋白的定位及表達(dá)

STOX1主要表達(dá)于絨毛的合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞，其中子癇前期的染色更強(qiáng)。用IPP圖像分析系統(tǒng)測(cè)定各組STOX1陽性產(chǎn)物的平均光密度值，重度子癇前期組明顯高于輕度子癇前期組，輕度子癇前期組明顯高于正常妊娠組，兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1、表1。

2.2?Western blot 檢測(cè)胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)量

與正常妊娠組相比，子癇前期胎盤組織中STOX1蛋白表達(dá)量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。重度子癇前期組患者胎盤組織中STOX1相對(duì)蛋白含量（0.67±0.15）與輕度子癇前期組（0.49±0.11）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。輕度子癇前期組患者STOX1相對(duì)蛋白含量明顯高于正常妊娠組（0.32±0.15），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2、表2。

3?討論

子癇前期是以高血壓和蛋白尿?yàn)橹饕卣鞯娜焉锲谔赜械募膊。梢詫?dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥，是孕產(chǎn)婦和圍生兒死亡的主要原因之一，嚴(yán)重威脅母嬰健康。其病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，迄今不明。國內(nèi)外大部分研究集中在其病因和發(fā)病機(jī)制，目前認(rèn)為可能與免疫機(jī)制、遺傳因素、胎盤缺血等因素有關(guān)。妊娠期高血壓疾病的基本病理變化是全身小動(dòng)脈痙攣，研究發(fā)現(xiàn)子癇前期胎盤血流量較正常妊娠明顯減少[2]，表明該疾病的發(fā)生與胎盤血流量減少密切相關(guān)。近年來隨著細(xì)胞分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，子宮缺血學(xué)說得到了新的進(jìn)展。正常妊娠時(shí)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮蛻膜有兩個(gè)過程，第一時(shí)期為受精卵種植過程，第二時(shí)期為妊娠早中期合體滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮螺旋動(dòng)脈，逐漸取代血管內(nèi)皮，使管腔擴(kuò)大，阻力下降，血流量增加，此生理現(xiàn)象稱為血管重鑄，以滿足胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的需要[3]。若滋養(yǎng)細(xì)胞侵入和螺旋動(dòng)脈重鑄不足，則管腔狹窄，導(dǎo)致胎盤缺血缺氧，胎盤發(fā)育受阻，此現(xiàn)象稱為“胎盤淺著床”，也稱為“滋養(yǎng)細(xì)胞淺浸潤(rùn)”，目前認(rèn)為子宮-胎盤缺血原因可能是子宮螺旋動(dòng)脈生理性重鑄過程障礙，導(dǎo)致“胎盤淺著床”和胎盤病理生理改變，進(jìn)而導(dǎo)致全身血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷引起一系列臨床癥狀。STOX1又稱為10號(hào)染色體上的開放閱讀框24，是新近發(fā)現(xiàn)的與子癇前期密切相關(guān)的母系印跡基因。Van Dijk等[4]研究提出STOX1能控制絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞的多倍體化過程，使滋養(yǎng)細(xì)胞植入障礙，是子癇前期的一個(gè)新的母系印跡基因。Rigourd等[5]發(fā)現(xiàn)STOX1與子癇前期誘導(dǎo)的胎盤基因轉(zhuǎn)錄修飾具有很高的相關(guān)性，表明STOX1可能參與子癇前期的發(fā)生發(fā)展。STOX1目前已成為子癇前期病因發(fā)病機(jī)制方面的一個(gè)研究熱點(diǎn)[6]。

筆者的研究初步發(fā)現(xiàn)子癇前期胎盤組織中STOX1蛋白的表達(dá)明顯高于正常妊娠者，且重度子癇前期組明顯高于輕度子癇前期組，表明STOX1蛋白表達(dá)增加與滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力下降密切相關(guān)，可能是胎盤淺著床的原因之一，可能在子癇前期的發(fā)病發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[7-8]。其中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，需要進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2012-06-12）