紅細胞懸液輻照前后在不同貯存期游離血紅蛋白含量的比較

王九兵 王永維 重慶市精神衛生中心檢驗科 4047； 重慶市涪陵區中心血站

血站的血液制品主要是紅細胞懸液，近來一些血站開展了對血液制品的輻照，以降低輸血相關性移植物抗宿主病（TA－GVHD）。其制備、輻照、保存等過程中可能影響紅細胞的生存質量，導致其中的游離血紅蛋白含量比正常全血的高，必須控制好各環節，保證臨床的輸注質量與安全。

1 儀器設備

1.1 輻照設備 GC－3000－Ⅰ血液輻照儀（Cs137，中心劑量5Gy／min），加拿大諾迪安公司。

1.2 離心設備 80－2型離心沉淀器，上海手術器械廠。

1.3 加樣設備 移液器100～1 000μl，德國eppendorf公司。

1.4 孵育設備 HH W 21 600型電子恒溫水箱，上海科析試驗儀器廠。

1.5 檢測設備 eppendorf 6124型半自動生化分析儀，德國eppendorf公司。

2 試劑

成品血漿游離血紅蛋白測定試劑，北京瑞爾達生物科技有限公司，批號：C1001003。

3 檢測方法與結果

3.1 操作步驟

3.1.1 紅細胞懸液的準備：將采集的全血在全程冷鏈控制的情況下，于采后6h內制備成紅細胞懸液，并分為兩組，一組將紅細胞懸液置于輻照儀中，通過γ射線中心靶計量≥25Gy輻照［1］；另一組不輻照。

3.1.2 將輻照前、后的紅細胞懸液，均置于（4±2）℃下保存。

3.1.3 在無菌條件下，從血袋中取出紅細胞懸液約5ml，3 000r／min離心5min〔在（4±2）℃下保存原袋紅細胞懸液，供下次不同時期取樣使用〕。

3.1.4 取離心后的上清液，按以下步驟操作，見表1。

表1 操作步驟（ml）

3.2 結果 分別取已制備保存的當天、1周、2周、3周、4周后的紅細胞懸液進行檢測，結果如表2。將輻照前后不同儲存時期的游離血紅蛋白含量進行比較（實驗組不包含第17號標本結果），對檢測結果作t檢驗，其中當天、第1周、第2周P＞0.05，說明輻照前、后含量無顯著差異；第3周與第4周P＜0.05，說明輻照前、后含量有顯著差異。

混勻，恒溫水箱37℃反應20min，于生化分析儀上測定，光徑10mm，波長505nm，空白管調零比色。

表2 輻照前、后不同貯存期紅細胞懸液中游離血紅蛋白含量（mg／L）

4 討論

由于紅細胞懸液的制備過程、輻照、保存對紅細胞本身有影響，所以游離血紅蛋白的含量比正常全血高。國家標準《全血及成分血質量要求》GB－18469［2］，沒有對輻照后紅細胞懸液中游離血紅蛋白的含量作出明確的要求。但制備人員也應通過控制制備過程的操作等方式來延長紅細胞的壽命，控制其中的游離血紅蛋白的含量。

4.1 從檢測結果比較，在未輻照紅細胞懸液的保存期（CPDA保存液，35d）內和輻照后紅細胞懸液的保存期（參照FDA推薦輻照后紅細胞保存期不能超過28d）［3］內，前3周內輻照前、后的紅細胞懸液中游離血紅蛋白的含量沒有明顯的變化；但從第3周到第4周變化明顯，雖然都在正常范圍內，但筆者仍建議每天根據臨床用血計劃對庫存血液進行輻照，盡量縮短輻照后的保存時間，控制在21d以內更為安全。

4.2 隨著保存期的延長，游離血紅蛋白含量逐漸增加，但直到末期也能達到臨床輸注要求范圍（按《全血及成分血質量要求》GB－18469中冰凍紅細胞洗滌后的游離血紅蛋白含量≤1g／L要求推算）［4］。本次實驗中1例超出范圍，屬于檢測取樣的操作不當所致（第3次取樣后血辮熱合不全，血液已污染），在統計分析時已舍該值。

4.3 導致游離血紅蛋白檢測含量增高的因素有：（1）輻照后儲存對紅細胞代謝、功能等造成不同程度的影響，隨保存期的延長，紅細胞代謝廢物的產生，血袋中紅細胞的生存條件變化，部分紅細胞壽命縮短，損傷增加。（2）每次從原血袋中取樣，都會對每袋懸液中的紅細胞造成影響，所以控制取樣的環境條件（特別控制污染）和輕拿輕放等。（3）檢測過程中，標本的處理也會影響紅細胞的質量，導致游離血紅蛋白含量增高。

4.4 要求制備紅細胞懸液時，嚴格執行好各項操作規程，控制制備環境條件和存儲條件；在對紅細胞懸液進行輻照的過程中，注意一次照射的血量，防止在放入和取出容器時的擠壓，最大程度保證紅細胞懸液中的細胞質量，保證輸注有效及降低危害。

［1］梁華欽，鄧晶，田兆嵩，等.γ射線輻照對血液質量的影響〔J〕.中國輸血雜志，2002，15（3）：177－178.

［2］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.GB18469－2001全血及成分血質量要求〔S〕.北京：中國標準出版社，2004.

［3］呂秋霜，任芙蓉，李慧，等.不同保存期全血輻照后紅細胞保存損傷的研究〔J〕.中國輸血雜志，2003：16（3）：170－172.

［4］劉菲，劉春蓮.不同貯存期紅細胞懸液中游離血紅蛋白量的變化〔J〕.貴陽醫學院學報，2005，30（6）：564.