正交實驗優選姜炭炮制工藝的研究

劉光明

廣東省新興中藥學校，廣東 新興 527400

姜炭為姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根莖經炒炭形成的炮制品。其性熱，辛味消失，守而不走，長于止血溫經，其溫經作用弱于炮姜，是中醫治療出血證的常用藥物，可用于各種虛寒性出血且出血較急、量較多者［1]。《中國藥典》2010年版一部炮制通則附錄ⅡD項及《全國中藥炮制規范》中姜炭的炮制方法均為傳統炒炭法。該法為手工操作，器具敝開，原藥氣味散失大，所用“武火”、“中火”、“文火”等“火候”無客觀的溫度參考，完全依靠個人經驗判斷，各地姜炭的炮制程度及內在質量也存在較大的差異，這些因素都直接影響姜炭的成品質量及臨床療效。因此，優選姜炭炮制新工藝有重要的意義。但目前均沒有關于研究姜炭炮制新工藝的系統報道。本研究以浸出物含量、凝血時間為指標，結合成品性狀，對姜炭的炮制工藝進行優選，對提高炮姜炭成品質量有重要的意義，并為制定姜炭飲片質量標準提供依據。

1 儀器與材料

1.1 藥材

干姜，購自云浮市大森林藥房 (產地：廣東;批號：20110812)，經廣東省新興中藥學校彭瑞松副主任中藥師鑒定為姜科植物姜Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥塊根。

1.2 儀器

箱形電阻爐，型號Sxz-4-10，佛山電爐廠制造;便攜式溫度計，WREU一892型，上海浦江電表廠生產;BP211D型電子天平，德國Sartorius公司;101-1型數顯鼓風干燥箱，廣州紅星儀器有限公司;內徑0.9-1.1mm毛細管，華西醫科大學儀器修造廠;秒表;手術剪;毫米尺等。

1.3 動物

KM系小鼠，18～22g，購自廣州中醫藥大學實驗動物中心。

2 方法和結果

2.1 姜炭的炮制

表1 姜炭炮制正交設計因素水平表

表2 姜炭炮制結果

以姜炭的傳統炮制工藝為參照［2]，對炮制過程中的溫度、時間及加熱方式3項影響炭藥飲片質量的主要因素進行考察。前2因素各選取3水平，后1因素選取2水平，按L9(3)4正交表進行實驗設計，并按正交表所示條件對干姜進行炮制。炮制過程中準確記錄加熱溫度、時間、成品性狀，并計算成品得率。結果顯示樣品5炭品的外觀性狀符合《中國藥典》2010年版一部姜炭外觀質量標準 (表面黑色，內部棕褐色)。炭品得率最高為樣品1，其依次為樣品2、樣品3、樣品7、最少為樣品9。結果見表l、表2。

炭品得率%=成品炭量/樣品量×100%。

2.2 浸出物測定

精密稱取各樣品姜炭粉4g，每樣品各取3份，按《中國藥典》2010年版一部附錄XA浸出物測定法［3]，水溶性浸出物測定法項下冷浸法進行測定［2]，計算各樣品中水溶性浸出物的含量。結果表明干姜經制炭后，除樣品5的水浸出物含量略有升高外，其余樣品浸出物含量均不同程度地降低，結果見表3。各姜炭組水溶性浸出物與干姜組水溶性浸出物經統計學比較 P＞0.05，無明顯差異。

表3 各樣品姜灰水溶性浸出物含量測定結果表 (n=10)

2.3 凝血時間的測定

2.3.1 藥液的制備

稱取樣品 1至樣品 10各 100g，加水 500ml，浸泡30min，武火煮沸改文火煎30min，雙層紗布過濾，藥渣分別加水300 ml、200ml，煎煮30、20min，過濾，合并濾液，于水浴上濃縮至100ml，冰箱冷藏備用。每ml供試品相當于姜炭樣品1 g。

2.3.2 對小鼠斷尾出血時間的影響［4]

表4 姜炭水煎劑對小鼠斷尾凝血時間的影響 (±SD，n=10)

表4 姜炭水煎劑對小鼠斷尾凝血時間的影響 (±SD，n=10)

注：與對照組比較，*P＜0.01。

樣品 劑量 (ml/20g) 給藥途徑 出血時間 (s)1 ig 213.6 ±34.7 2 1 ig 212.6 ±37.1 1 3 ig 231.6 ±36.3 4 1 ig 219.6 ±32.5 1 5 ig 176.7 ±27.3*6 1 ig 182.3 ±35.2*1 7 ig 191.5 ±40.1*8 1 ig 221.2 ±25.9 1 ig 234.6 ±36.2 10 1 ig 261.3 ±36.8對照組9 1 ig 380.6 ±60.5-

取18～22g健康KM小鼠110只，雌雄各半，隨機分為11組，以1ml/20g劑量，每日灌胃給藥1次，連續3 d，對照組給等量的蒸餾水，末次給藥后60 min將小鼠固定，在距尾尖8mm處標記，用手術刀片從標記處迅速橫斷，待血液自行溢出時開始計時，每隔30 s用濾紙將流出的血滴吸去，直至出血自然停止 (濾紙吸時無血)為止，即為出血時間(室溫20℃ ～25℃條件下進行)。結果發現樣品5、樣品6、樣品7對小鼠的出血時間有明顯的縮短作用，其中出血時間最少為樣品5組炭品176.7±27.3 s。具體結果見表4。

2.3.3 對小鼠凝血時間的影響［5]

取18～22g健康KM小鼠110只，雌雄各半，隨機分為11組，以1ml/20g劑量，每日灌胃給藥1次，連續3 d，對照組給等量的蒸餾水，末次給藥后60 min用眼科彎鑷迅速摘去小鼠一側眼球，于載玻片兩端各滴一滴血，血滴直徑約5 mm，秒表計時，每隔20 s用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕輕挑動一次，觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止，所歷時間即為凝血時間 (室溫20℃ ～25℃條件下進行)。結果發現各樣品對小鼠的凝血時間均有一定的縮短作用，其中用時最短為80.1±14.2 s(樣品5組炭品)，其次分別為樣品9、樣品6….用時最長為對照組，具體結果見表5。

表5 炮姜炭水煎劑對小鼠凝血時間的影響 (±SD，n=10)

表5 炮姜炭水煎劑對小鼠凝血時間的影響 (±SD，n=10)

注：與對照組比較，*P＜0.01。

樣品 劑量 (ml/20g) 給藥途徑 凝血時間 (s)1 ig 90.6 ±11.6 2 1 ig 96.4 ±10.6 1 3 ig 95.1 ±12.4 4 1 ig 92.1 ±13.5 1 5 ig 80.1 ±14.2*6 1 ig 83.8 ±11.3*1 7 ig 84.6 ±12.5*8 1 ig 87.2 ±16.1 1 ig 117.2 ±11.5 ig 83.1 ±14.6*10 1 ig 86.2 ±12.3對照組9 1-

3 討論

3.1 通過正交實驗優選姜炭炮制工藝的研究，結果發現樣品5組炭品外觀性狀最符合《中國藥典》2010年版一部姜炭外觀質量標準，水溶性浸出物、鞣質含量均最高，其凝血、止血時間最短。統計學表明，樣品5組與對照組均有較大差異性 P＜0.01。因此，姜炭炮制最佳工藝應選為A2B2C2即250℃、加熱15 min(烘法)。

3.2 該炮制工藝操作簡便，勞動強度低，對環境污染少，成品質量高，較好解決了炮制工作中影響姜炭飲片質量存在的主要問題，規范了炮姜炭炮制的時間、溫度和炮制方式，可規范化生產并能為制定炮姜炭飲片質量標準提供依據。

［1]崔國靜，劉芳.干姜、炮姜與炮姜炭［J].傳統中醫藥，2011，4：52～52.

［2]張鏡潮，何鏡華，藍水中.實用中藥炮制［M].第1版.廣州：廣東科技出版社，1993：204.

［3]中國藥典 ［S].一部.2010：附錄56-57.

［4]李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M].第1版.上海：上海科學技術出版社，1991：496.

［5]陳奇.中藥藥理研究方法學［M].第1版.北京：人民衛生出版社，1993：275.