HPLC法測定孕坤通膠囊中芍藥苷的含量

宋志釗 劉 元 李星宇

廣西中醫藥研究院，廣西 南寧 530022

孕坤通膠囊處方來源于廣西民間經驗方，主要由赤芍、千斤拔等11味中藥組成，具有活血化瘀，通經活絡之功效，用于血瘀證女性不孕。中醫學認為女子不孕最常見原因之一是血瘀停滯，赤芍在方中起祛瘀止痛，活血通經作用。研究表明赤芍抑制血小板聚集引，改善紅細胞的通透性，增加紅細胞對低滲張力的抗性，有一定穩定紅細胞膜結構的作用［1，2]。另外，赤芍總苷能明顯延長大鼠和小鼠的凝血時間，并能延長電刺激大鼠頸總動脈血栓形成的時間。因此，摸索本方中赤芍的指標成分芍藥苷的含量測定方法，可作為控制本品質量標準的指標之一。現參考《中國藥典》2005年版一部［3]，測定孕坤通膠囊中芍藥苷的含量。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，SPD-10AVP紫外檢測儀;威瑪龍色譜工作站;TC-C18柱 (4.6mm×250mm，5μm);KQ-100VDB雙頻數控超聲清洗儀。甲醇為色譜純，水為超純水，其余所用試劑均為分析純。芍藥苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，批號110736-200526);孕坤通膠囊3批，批號為：100401、100402、100403，由南寧市冠峰制藥有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Appollo C18色譜柱 (4.6mm×250mm，5mm);檢測波長為230nm;流動相：甲醇 -0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 (28：72);流速：1.0 mL·min-1;柱溫為室溫。理論塔板數按芍藥苷峰計算不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品9.9mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成396μg/ml對照品溶液，備用。精密吸取上述對照品溶液1.0mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得 (39.6μg·mL-1)。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品內容物20粒，精密稱定，研細，混勻，取約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇 20ml，超聲處理 30分鐘 (頻率45kHz、功率90W)，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 標準曲線及線性范圍考察 精密稱取芍藥苷對照品9.9mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成396μg/ml對照品溶液，備用。分別精密吸取0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml，分別置 10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣10ul，測定。以芍藥苷對照品進樣量μg為橫坐標 (X)，峰面積積分值為縱坐標 (Y)繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=6.94×105X+1.43×104，r=0.9997。結果表明：芍藥苷進樣量在0.099 ～1.584μg之間與峰面積積分值呈線性關系。

2.5 精密度試驗 分別吸取同一供試品溶液 (100401)，進樣5次，依次測定，即得。測得供試品RSD為0.42%。

2.6 重復性試驗 取同一批號 (100401)樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進樣，測定，即得。結果測得芍藥苷為0.835mg/粒，RSD=0.48%(n=6)。表明該方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液分別于0，4，8，12，16h進行測定，即得。結果供試品中槲皮苷含量的RSD為0.47%，表明供試品溶液在16h內保持穩定。

表1 加樣回收試驗測量結果 (n=6)

2.8 加樣回收試驗 取已測知含量 (0.835mg/粒，批號100401)的供試品0.25g，精密稱定，精密加入396μg/ml芍藥苷對照品溶液1.2ml，按供試液制備項下的方法制備。結果芍藥苷平均回收率為98.2%，RSD為1.25%(n=6)，結果見表1。

2.9 樣品測定 按供試液的制備及檢測方法，測定3批孕坤通膠囊中芍藥苷含量 (mg/粒)分別為 0.846、0.732、0.798 。

3 討論

3.1 對芍藥苷對照品溶液進行紫外掃描，其結果在230nm處有最大吸收，故確定檢測波長為230nm。參照《中國藥典》2005年版一部里有關芍藥苷含量測定方法，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相，考察多個比例，最后確定甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 (28：72)的比例較為適合。

3.2 采用超聲處理30min、加熱回流1h、索氏提取2h進行提取方法考察，結果三者提取結果相差不大，但超聲處理更簡便、快捷，故采用超聲處理法。采用甲醇、水、50%甲醇作提取溶劑進行考察，用甲醇提取所得含量比高，且雜質較少，故采用甲醇作為提取溶劑。以超聲處理15min、30min、45min，進行提取時間考察，超聲處理15min，測得結果較低，超聲處理30min、45min，兩者無明顯差別，故超聲處理時間定為30min。

［1]劉超，王靜，楊軍.赤芍總甙活血化瘀作用的研究 ［J].中藥材，2000，23(9)：557-560.

［2]趙春景，王芳，赫飛.赤芍對乙肝黃疸患者紅細胞通透性的影響［J].中醫藥研究，1999，15(5)：42-43.

［3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部)［S].2005：109.