分光光度法測定雞矢藤中總環烯醚萜苷的含量

2012-10-19 14:58:30王永昌高克立樊錦慧

衛生職業教育 2012年2期

王永昌，高克立，樊錦慧，李娟

（甘肅省醫學科學研究院分析實驗中心，甘肅蘭州 730050）

王永昌，高克立，樊錦慧，李娟

（甘肅省醫學科學研究院分析實驗中心，甘肅蘭州 730050）

目的建立雞矢藤藥材中總環烯醚萜苷的含量測定方法。方法采用分光光度法，以雞矢藤苷為對照品，經香草醛-乙酸顯色，紫外-可見光全波長掃描在620 nm處有最大吸收，并在此處測定其含量。結果雞矢藤苷及其藥材在620 nm處有最大吸收，測得含量穩定，重現性好，雞矢藤苷在10．3～51．5μg/m l范圍內線性關系良好（R2=0．999 5）。結論建立雞矢藤中總環烯醚萜苷的含量測定方法，該方法簡便、準確、可靠，可作為雞矢藤提取、分離、純化過程的質量控制方法。

分光光度法；雞矢藤；總環烯醚萜苷；含量測定

雞矢藤為茜草科雞矢藤屬多年生草質藤本植物，雞矢藤[Paederia scandens（Lour．）Merr．]或毛雞矢藤[P．scandens（lour．）merr．var．tomentosa（Bl．）H．-M．]全草或根是我國傳統的中草藥，具有祛風活血，止痛解毒，消食導滯，除濕消腫的功效，在我國分布廣泛。雞矢藤含有多種化學成分，包括揮發油、環烯醚萜苷類、多種烷醇、齊墩果酸等油脂及甾醇類化合物[1]。現代研究證明，雞矢藤提取物具有良好的保肝、鎮痛、抗驚、解毒、消炎、抗病毒和抗腫瘤等作用[2～7]。研究表明，雞矢藤總環烯醚萜苷是一類有效成分[8～9]。目前，對雞矢藤中總環烯醚萜苷的質量控制研究較少[10]。我們通過分光光度法建立了雞矢藤中總環烯醚萜苷含量的測定方法，此法簡便、快速、準確、易行，適于對雞矢藤中總環烯醚萜苷的含量進行測定。

1 材料及儀器

1.1 材料

雞矢藤藥材采自甘肅隴南地區，標本經甘肅省醫學科學研究院石長栓副研究員鑒定為茜草科雞矢藤屬植物雞矢藤的全草。

雞矢藤苷對照品由本研究室分離純化并鑒定結構，采用HPLC歸一法測定其含量為98．60%。

薄層層析硅膠G（批號：040212，青島海洋化工有限公司生產）、層析用硅膠（100～140目，青島海洋化工有限公司生產）、D101 型大孔吸附樹脂[非極性，批號：04/05/12（1-2）]、活性炭（粒狀，批號：020226，天津市天達凈化材料精細化工廠生產）、冰醋酸、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇及其他試劑均為市售AR級。

1.2 儀器與設備

AE260（萬分之一）型電子分析天平（上海）、DHG-9030型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海）、SHB-Ⅲ型循環水式多用真空泵（鄭州）、KDM型調溫電熱套（山東）、B3200S-T型超聲波振蕩儀、BüCHI 461型旋轉蒸發儀（瑞士）、UV-240型紫外-可見分光光度儀（日本島津）、Aligent-1100型高壓液相色譜儀（德國）、DLSB-5/10型低溫循環泵（鄭州）。

1.3 對照品溶液的制備

精密稱取雞矢藤苷對照品10．0 mg置10 m l容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成1．03mg/m l的對照品溶液備用。

1.4 供試品溶液的制備

精密稱取在60℃干燥后粉碎的雞矢藤粗粉10．0g，用甲醇索氏提取2 h，過濾取濾液，定容至100 ml容量瓶中，搖勻，作為供試品溶液。

2 實驗

2.1 顯色條件

精密吸取對照品溶液、供試品溶液和甲醇0．5m l于10 m l試管中，水浴蒸干，冷卻至室溫后，加入0．2 ml的5%香草醛冰醋酸溶液和0．8m l的高氯酸，經60℃水浴加熱15 min，取出立即置冰水浴中3min[11]，用冰醋酸定容至刻度，搖勻，以甲醇管為空白，用紫外-可見分光光度計于620 nm處測定吸光度。

2.2 吸收波長的選擇

精密吸取對照品溶液、供試品溶液和甲醇 0．5 m l，按“2．1”項下顯色條件顯色，用紫外-可見分光光度計于200～700 nm范圍掃描，結果對照品和供試品溶液在620 nm處具有相似最大吸收，故選擇620 nm為測定吸收峰。

2.3 線性關系

精密吸取對照品溶液 0．10、0．15、0．20、0．25、0．30、0．35、0．40、0．45、0．50 ml，水浴蒸干，按“2．1”項下顯色條件顯色，在620 nm 處測定吸光度值，分別為 0．091、0．186、0．287、0．372、0．293、0．557、0．638、0．742、0．843。以對照品溶液濃度（c）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，結果雞矢藤苷在10．3～51．5μg/ml范圍內具有良好的線性關系，得回歸方程：A=0．018c-0．091 8，R2=0．999 5。

2.4 穩定性試驗

精密吸取對照品溶液1．0m l，用甲醇定容至10m l容量瓶中，搖勻。精密吸取 0．5ml，水浴蒸干，按“2．1”項下顯色條件顯色后1～2 h內，每隔10min在620 nm處測定其吸光度，其吸光值分別為 0．047，0．047，0．047，0．047，0．048，0．047，0．047，0．048，0．047，0．047，0．046，0．046，平均值為 0．047，RSD=0．02%（n=12），表明在0～2 h內穩定性良好。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液 0．5 m l，水浴蒸干，按“2．1”項下顯色條件顯色，顯色后 1 h 內連續測定 6 次吸光度，RSD=0．02%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

精密稱取雞矢藤粗粉 6 份，每份 10．0 g，按“2．2”項下方法制成供試品溶液。以“2．1”項下方法顯色，測定結果平均含量為1．53%，RSD=2．33%（n=6），說明該法重復性良好。

2.7 加標回收試驗

精密吸取“2．7”項各供試品溶液 5．0ml，分別精密加入對照品溶液 1．0m l，甲醇定容至 10．0ml，混勻，制成樣標供試液。按“2．1”項下方法顯色，測定并計算回收率，具體見表1。

表1 加標回收率試驗結果

2.8 樣品測定

精密稱取雞矢藤粗粉 6 份，每份 10．0 g，按“2．2”項下方法制成供試品溶液。以“2．1”項下方法顯色，測定吸光度，根據標準曲線計算得出甘肅產地雞矢藤中總環烯醚萜苷平均含量為1．50%。

3 討論

（1）雞矢藤中含有多種化學成分，包括揮發油、環烯醚萜苷類、多種烷醇、齊墩果酸等油脂及甾醇類化合物，僅對某一成分進行含量測定很難全面評價其質量的優劣。曲銀鋒等[12]對雞矢藤注射液中的揮發油成分進行分析及測定，孫素珍[10]利用超高壓液相色譜法測定了雞矢藤熊果苷含量[10]，我們認為也應該對作為雞矢藤抗炎鎮痛的有效部位之一的環烯醚萜苷類，進行質量控制，并以雞矢藤苷為對照品測定其總環烯醚萜苷較為合理。

（2）在試驗過程中，曾選擇香草醛-冰醋酸法[13]，對二甲氨基苯甲醛-鹽酸法[14]，對二甲氨基苯甲醛-醋酸法[13]，用紫外-可見分光光度計在400～700 nm范圍內掃描，3種顯色方法均在620 nm處有最大吸收，香草醛-冰醋酸法中標準溶液顯天藍色，呈色較穩定，含量測定在2 h內較穩定。而對二甲氨基苯甲醛-鹽酸法和對二甲氨基苯甲醛-醋酸法顯色不明顯，且不穩定。故認為選擇香草醛-冰醋酸法測定雞矢藤總環烯醚萜苷類成分較為理想。

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