分光光度法測定肝病患者血漿中吲哚菁綠的滯留率

郝燕勤，鄒繼紅

（赤峰學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

分光光度法測定肝病患者血漿中吲哚菁綠的滯留率

郝燕勤，鄒繼紅

（赤峰學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

目的：采用分光光度法測定肝癌和肝硬化患者血漿中吲哚菁綠的滯留率.方法：采用分光光度法，檢測波長為805 nm.結(jié)果：肝癌及肝硬化患者血漿中吲哚菁綠的滯留率均大于10％.結(jié)論：所用方法簡便、快速、準(zhǔn)確，適用于肝癌和肝硬化患者血漿中吲哚菁綠滯留率的測定，可以為患者是否施行肝臟切除術(shù)提供可靠數(shù)據(jù).

分光光度法；吲哚菁綠；肝病；含量測定

吲哚菁綠（indocyanine green，ICG）是一種合成的三羧基花青類紅外感光染料，又稱靛青綠，1955年由美國柯達(dá)實驗室研制成功，1956年Fox等首先將其應(yīng)用于肝功能及循環(huán)功能檢查，1970年以后廣泛應(yīng)用于眼科血管造影[1].吲哚菁綠進(jìn)入血液后可與血清蛋白結(jié)合，選擇性地被肝細(xì)胞攝取，以游離形式隨膽汁排泄至腸.ICG具有不參與腸肝循環(huán)，無肝外代謝，無腎臟排泄，在肝細(xì)胞內(nèi)無結(jié)合，幾乎無毒副作用等特點.很多學(xué)者將ICG 15min滯留率試驗（ICG R15）作為反映肝血流量與主動轉(zhuǎn)運機(jī)能，了解肝儲備功能的一項敏感指標(biāo).針對赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院在2010年至2011年期間收治的肝病患者，筆者采用分光光度法測定肝癌及肝硬化患者血漿中的吲哚菁綠的滯留率，為臨床醫(yī)師施行肝切除術(shù)提供理論依據(jù).

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

UV-765紫外-可見分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLER AE240電子天平（瑞士梅特勒公司）；L80-2離心沉淀機(jī)（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）.注射用吲哚菁綠（丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：20100701）；生理鹽水（赤峰榮濟(jì)堂藥業(yè)有限公司，批號：20100902）；水為蒸餾水.

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取注射用吲哚菁綠10.4mg，置100mL量瓶中，用水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得104mg·L-1的吲哚菁綠對照品溶液.

1.2.2 線性范圍的考察

分別精密吸取 1.0、2.0、3.0、5.0、10.0mL吲哚菁綠對照品溶液，置100mL量瓶中，再立刻加入0.5mL空白血漿，混勻，用水稀釋至刻度，即得系列濃度的吲哚菁綠對照品溶液.分別準(zhǔn)確吸取上述各濃度溶液 1.0mL，放入 A、B、C、D、E 五個 10mL試管中，各加入1.0mL生理鹽水，充分混勻.將1.0mL蒸餾水、1.0mL生理鹽水和1.0mL正常血漿混勻，作為空白對照溶液.在805nm波長處，分別測定各管的吸光度.以濃度（mg·L-1）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:Y=0.0946X+0.0105，（r=0.9995）.結(jié)果表明：吲哚菁綠的濃度在1.04～10.4mg·L-1范圍內(nèi)與吸光度具有良好的線性關(guān)系.

1.2.3 血漿樣品的制備

肝病患者早晨空腹，安靜取平臥位.自肘靜脈采血5mL，置經(jīng)肝素處理的離心管中，混勻，以3000r·min-1的轉(zhuǎn)速離心10min，取上清液作為空白血漿.同時，以5mL注射用水溶解25mg注射用吲哚菁綠，按每公斤體重取0.5mg的吲哚菁綠溶液，自肘靜脈在30s內(nèi)注入.準(zhǔn)確計時，靜注后15min自另一肘靜脈采血5mL，置經(jīng)肝素處理的離心管中，混勻，以 3000r·min-1的轉(zhuǎn)速離心 10min，取上清液作為測定樣品.

1.2.4 樣品的測定

準(zhǔn)確吸取上述空白血漿和測定樣品各1.0mL，分別加入2mL生理鹽水，充分混勻，在805nm處，以空白血漿為空白調(diào)節(jié)分光光度計的零點，然后測定樣品吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線求出其濃度，計算吲哚菁綠的血中平均滯留率，結(jié)果見表1.

表1 吲哚菁綠血中平均滯留率測定結(jié)果

2 討論

以分光光度計掃描吲哚菁綠溶液，其最大吸收波長為805nm，故選取檢測波長為805nm.由于吲哚菁綠遇光易分解，因此在靜脈注射和抽血時，速度要快，而且要避光操作.采用紫外-可見分光光度法測定樣品濃度時同樣需要避光操作，以減少測量誤差.

〔1〕張承芬，陳有信.開展吲哚菁綠脈絡(luò)膜血管造影研究，提高眼底病臨床診治和研究水平[J].中華眼底病雜志，1988，14（2）:66-67.

〔2〕王偉，陳秀文，吳巖.肝臟儲備功能檢測要點及護(hù)理干預(yù)效果 [J].吉林醫(yī)學(xué)，2009，30（20）：2438-2439.

〔3〕王鈍，金文淑，秦恩偉，等.吲哚菁綠的合成[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2006，37（9）：584-585.

〔4〕楊亞英，張霽.吲哚菁綠潴留試驗評估肝儲備功能與護(hù)理操作[J].重慶醫(yī)學(xué)，2002，31（4）：316-317.

〔5〕孫文兵，李昆，陳莉，等.吲哚菁綠潴留率 15在可切除性肝癌外科治療中的意義[J].中華肝膽外科雜志，2002，6（1）：62-63.

〔6〕高文濤，黎一鳴，吉鴻，等.聯(lián)合測定叫噪著綠和一山梨醇評價肝儲備功能[J].中華肝膽病雜志，2003，11（6）：350-353.

R927.2

A

1673-260X（2012）01-0057-02