愈瘍膠囊毒理作用研究

羅倫才，季小平，張仲林，李列平，張孝國，王利平，鐘振東

(1.四川涼山州第二人民醫院，四川 西昌 615000;2.成都醫學院，成都 610083;3.四川省人民醫院實驗動物研究所，成都 610212)

愈瘍膠囊系根據我院協定處方研制而成的院內制劑(院內制劑批號川藥制字Z20080094)，由山藥、蜂蠟等藥物并采用特殊炮制和制劑工藝制備而成的純中藥制劑，該制劑具有泄壅滯、逐痰積、消腫毒、排膿腐、生肌健脾等功效。為給臨床用藥提供安全依據，根據國家新藥相關法規和技術規范［1～5］，我們于2010年6月至2011年8月對愈瘍膠囊進行了毒理作用研究，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 昆明種小鼠 56只，體重 18g～22g;SD大鼠120只，體重90g～110g，均雌雄各半(動物合格證號均為 SYXK(川)2008-049號)由成都中醫藥大學實驗動物中心提供。

1.1.2 藥物 愈瘍膠囊細粉，由涼山州第二人民醫院制劑室提供(批號20100504)，每1g細粉含有 1.5 g生藥。

1.1.3 儀器 KX-21N全自動血液分析儀，由日本東亞Sysmex公司生產;RT-1904C半自動生化儀，由美國Rayto公司生產;Leica-1015切片機，由德國徠卡儀器有限公司生產;TSJ-Q型全自動封閉式組織脫水機、BMJ-Ⅲ型包埋機和HY-Ⅲ型病理組織漂烘儀，均由江蘇常州市中威醫療儀器有限公司生產;Motic BA400顯微鏡，由天津麥克奧迪實業集團有限公司生產。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性毒性試驗 取合格昆明種小鼠20只，雌雄各半，用改良寇氏法計算 LD和95%的可信區間并測定LD;若無法測定LD則測量最大耐受量，動物禁食不禁水12 h后，用最高的藥物濃度(能順利通過灌胃針頭)和動物的最大胃容納量0.4 mL/10 g，3 次/d 給藥，觀察 14 d［6］。

1.2.2 大鼠長期毒性試驗 取90g～110 g大鼠80只，雌雄各半，在動物房適應5 d后，按體重和雌雄隨機分為空白對照組(給生理鹽水)和用藥高、中、低劑量組(分別為 3.6、1.8、0.45 g(kg·d))，每組30只，雌雄各半，分籠飼養，每籠10只。在實驗室飼育1周，觀察各組動物活動、進食、糞便等情況均無異常后，采用臨床給藥途徑灌胃給藥。各劑量組按等容積不同濃度，每100 g體重灌胃1 mL藥液，連續13周。每周停藥1 d并稱重，按體重增減情況調整用藥劑量。實驗期間，觀察動物的行為活動、外觀體征、體重、毛發、進食及糞便等情況。末次給藥后，每組取20只大鼠，雌雄各半，禁食不禁水12 h，主動脈取血，分別進行紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血紅蛋白(HGB)、LPR(淋巴細胞百分率)和凝血酶原時間(PT)等測定;血液離心后取血清進行尿素(UREA)、總膽紅素(TBIL)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)等測定;對臟器進行全面肉眼尸檢，解剖取心、肝、脾、肺、腎、胸腺、子宮、腎上腺、胃、十二指腸，其中心、肝、脾、肺、腎、胸腺、子宮稱取濕重，求出臟器系數，將上述器官用甲醛溶液固定，常規病理切片進行組織學檢查。余下的動物停藥2周后，按上述方法進行檢測，觀察有無藥物所致的延遲性變化。

1.3 統計學方法

用SPSS 13.0統計軟件，組間比較用t檢驗。

2 結果

2.1 小鼠急性毒性試驗

結果發現，愈瘍膠囊的最大耐受量(MTD)為42g/kg，按60 kg人計算相當于臨床用量的933倍。在觀察期內，未發現動物有明顯的中毒癥狀和死亡發生，14 d后體重均有所增長。

2.2 大鼠長期毒性實驗

2.2.1 一般觀察試驗 表1顯示，動物活潑健康、皮毛光亮、行為活動、外觀體征等未見異常，高劑量組大鼠在每次給藥后出現糞便溏爛的現象，1 h～3 h后恢復，其余各組糞便性狀未見異常。給藥13周及停藥2周各組大鼠體重均呈增長趨勢，與空白對照組比較差異無統計學意義;所有變化均在動物正常范圍值內，無明確生物學意義。

2.2.2 臟器檢查 表2顯示，尸檢動物各臟器肉眼觀察未見病變，稱取心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺，腎上腺等臟器濕重，計算出器官系數。并與空白對照組比較，給藥13周時，中劑量組的脾降低，停藥2周后高劑量組的腦升高而中劑量組的胸腺降低，且差異有顯著性(P＜0.01)，其余各給藥組器官系數與對照組比較差異均無統計學意義;所有變化均在動物正常范圍值內，無明確生物學意義。

2.2.3 病理組織學檢查 病理切片觀察給藥13周和停藥后2周(恢復期)各給藥組的心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺、腎上腺、睪丸、附睪、子宮及卵巢等均未見典型的炎癥、增生或萎縮等病理學改變，與對照組比較均未見異常改變;所有變化均在動物正常范圍值內，無明確生物學意義。

2.2.4 血常規檢查 表3、4顯示，給藥 13周時及停藥2周后，愈瘍膠囊各劑量組的血常規指標與對照組比較差異均無統計學意義。血生化檢查:給藥13周時低劑量組GLU降低，停藥2周后中劑量組TBIL升高，且差異有顯著性(P＜0.O5);其余各劑量組各指標在給藥13周時及停藥2周后與對照組比較差異無統計學意義;所有變化均在動物正常范圍值內，無明確生物學意義。

表1 愈瘍膠囊對大鼠體重的影響(珋x±s)

表2 愈瘍膠囊對大鼠器官系數的影響(珋x±s)

3 討論

愈瘍膠囊為醫院自制制劑，是由山藥、蜂蠟等藥物組成，采用特殊炮制和制劑工藝制備而成的純中藥制劑，具有泄壅滯、逐痰積、消腫毒、排膿腐、生肌健脾等功效，臨床應用10余年來，證明其對乳腺增生有顯著療效。藥效學試驗也表明，愈瘍膠囊能通過調節大鼠體內的激素分泌水平，減弱雌激素和孕激素在乳腺的生物學效應而明顯抑制和治療大鼠的乳腺增生［7］。

愈瘍膠囊臨床采用口服給藥途徑，以最高藥物濃度(能順利通過灌胃針頭)和動物的最大胃容納量0.4mL/10 g，3次/d給藥，連續觀察14 d未見死亡。急性毒性試驗表明，愈瘍膠囊的24h最大耐受量為42g/kg，按人臨床日用量2.7g/60kg計算，相當于成人臨床用量的933倍。

本試驗以高、中、低3個劑量(按人臨床日用量2.7g/60kg計算，高中低劑量分別相當于人用量的80、40和10倍)連續給大鼠灌胃90d，進行長期毒性實驗。通過觀察其進食、體重、外觀體征和行為活動、糞便性狀等一般狀況，血常規、肝、腎功能和心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胸腺等臟器系數及病理學組織檢查，與對照組比較均未見異常，提示愈瘍膠囊對上述器官無病理性損害。就體重而言，給藥l3周時與空白組比較，各劑量組動物的體重有所下降，但均無統計學意義(P＞0.05);停藥2周后各劑量組體重均比空白組低，中劑量組有顯著差異(P＜0.05)。就臟器系數而言，除高劑量組胸腺在停藥2周后降低且有顯著性差異，其余臟器就血常規指標而言，與空白組比較各組在給藥13周及停藥2周后，各組各指標變化均無差異。就血生化指標而言，除低劑量組血糖濃度降低、低劑量組總膽紅素含量降低且有顯著性差異外(P＜0.05)，其余各組各指標變化無差異。組織病理檢測結果顯示，各組各臟器均無異常病理變化。以上所有變化均在動物正常范圍值內，無明確生物學意義。綜上，在13周給藥期間未見明顯毒性反應，亦未見延遲毒性反應。

表3 愈瘍膠囊對大鼠血常規指標的影響(珋x±s)

表4 愈瘍膠囊對大鼠血液生化學指標的影響(珋x±s)

本實驗在藥效學研究的基礎上對愈瘍膠囊進行了毒理學研究，通過對上述實驗結果分析認為，愈瘍膠囊在臨床規定日用劑量2.7g/60kg，臨床連續用藥療程1個月，服用是安全可靠的，為其臨床安全性用藥提供了實驗依據。

［1］ 國家食品藥品監督管理局.藥品注冊管理辦法［S］.2007.

［2］ 國家食品藥品監督管理局.中藥、天然藥物急性毒性試驗技術指導原則［S］.2005.

［3］ 國家食品藥品監督管理局.中藥、天然藥物長期毒性試驗技術指導原則［S］.2005.

［4］ 國家食品藥品監督管理局.藥物非臨床研究質量管理規范［S］.2003.

［5］ 衛生部藥政局.中藥新藥研究指南(藥學、藥理學、毒理學)［S］.1994.

［6］ 陳奇主編.中藥藥理研究方法學［M］.2版.北京:人民衛生出版社，2006:107-113.

［7］ 羅倫才，黃蘭雅，季小平，等.愈瘍膠囊對乳腺增生大鼠雌激素影響的實驗研究［J］.中國藥業，2011，20(13):5-6.