GC法測定凝膠膏劑中薄荷腦的含量

郭景瑞，王彥厚，王鳳山

(1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東濟南250012;2.淄博市藥品檢驗所，山東淄博255086;3.濟寧市市中區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局，山東濟寧272000)

凝膠膏劑是由無紡布上涂布一層含有大量水分和藥物的水溶性高分子框架結(jié)構(gòu)物質(zhì)制成，由于含藥的水溶性高分子結(jié)構(gòu)中含有近50%～60%的水分，非常接近人體皮膚含水狀況。在這樣的環(huán)境中，小分子藥物(薄荷腦)可以在其中沿著濃度梯度自由移動，貼敷于人體表皮的膏體層中的藥物被吸收一部分后，遠端藥物分子可以自動向濃度低的皮膚表層轉(zhuǎn)移，由此造成膏體內(nèi)藥物最大限度地滲透人體皮膚進入局部組織。

凝膠膏劑具有藥物劑量小、功效強、副作用小的特點，而藥物劑量小給檢測帶來一定的難度，如果采用普通的檢測手段難以達到所要求的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因此需要建立更靈敏的檢測方法。薄荷腦屬于萜類的有機物，本文參考中國藥典氣相色譜法，以氫火焰離子化檢測器(flame ionization detector，F(xiàn)ID)，對以薄荷腦為主要成分的凝膠膏劑含量測定進行了研究［1］。

1 試驗儀器與材料

1.1 儀器 GC－2010氣相色譜儀(島津制造所;彈性石英毛細管柱:0.20 mm ×25 m，0.33 μm);XMTD 電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司);梅特勒AG285精密電子天平、梅特勒AG204電子天平(瑞士產(chǎn))。

1.2 藥品與試劑 薄荷腦(和光純藥工業(yè)株式會社，分析純);水楊酸甲酯(和光純藥工業(yè)株式會社，分析純);甲醇(山東禹王實業(yè)有限公司禹城化工廠，色譜純);凝膠膏劑(天津瑞康巴布醫(yī)藥生物科技有限公司)。

2 試驗方法

2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取水楊酸甲酯約0.4 g，精密稱定，置200 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。

2.2 對照品溶液的制備［2］取薄荷腦對照品約0.8 g，精密稱定，置200 mL量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度。精密量取該溶液5 mL，置200 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。精密量取該溶液5 mL置25 mL量瓶中，準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)溶液3 mL，加甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取供試品1枚(重約相當(dāng)于10 g膏體)，精密稱定，置200 mL的茄形燒瓶中，加甲醇100 mL，在水浴中加熱回流1 h。冷卻后將提取液轉(zhuǎn)移至200 mL量瓶中，殘留物中再加入甲醇20 mL，加熱回流提取15 min，冷卻后將提取液轉(zhuǎn)移至200 mL量瓶中。重復(fù)操作兩次，合并三次提取液，加甲醇稀釋至刻度。精密量取該溶液10 mL置25 mL的量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液3 mL，加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.4 計算方法 膏體100 g中的薄菏腦含量=對照品的采取量

2.5 操作條件 檢測器:氫火焰離子化檢測器，250℃。色譜柱:彈性石英毛細管柱(0.20 mm ×25 m，0.33 μm);柱溫度:160℃;載氣:氮氣;流量:按薄荷腦的保留時間在6 min調(diào)整;進樣量:1.0 μL。理論塔板數(shù)以薄荷腦計不低于4 000;薄荷腦與內(nèi)標(biāo)峰的分離度大于1.5。

3 分析方法驗證

3.1 準(zhǔn)確度 精密稱取3份不同質(zhì)量的薄荷腦對照品，與原輔材料制成供試品，按2.3項制備供試品溶液，并每個濃度分別進樣3次。準(zhǔn)確度測試結(jié)果見表1。

表1 薄荷腦含量測定方法的準(zhǔn)確度結(jié)果

由表1可知薄荷腦的回收率在98%左右，加入量0.027 51、0.033 84 和0.041 68(g/100 g)的 RSD(%)分別為 0.56、0.76、0.41，準(zhǔn)確度良好。

3.2 精密度試驗 取供試品(批號:6084)，按2.3項制備試驗用溶液，供試品溶液連續(xù)進樣6次。6次內(nèi)標(biāo)供試品峰面積比分別為 0.278 2、0.282 1、0.281 9、0.279 9、0.279 8 和0.277 9，RSD為1.19%。表明試驗方法的精密度符合檢測要求。

3.3 專屬性試驗 供試品及空白制劑(批號:6105)，按2.3項下制備樣品溶液。專屬性圖譜見圖譜1、2。

從圖1、2中可看出，空白制劑圖譜中薄荷腦、內(nèi)標(biāo)峰處無色譜峰，供試品圖譜薄荷腦與內(nèi)標(biāo)能完全分離，且與對照品圖譜一致。表明該方法專屬性好，其他組分對測定無干擾。

圖1 空白制劑色譜圖

圖2 供試品制劑色譜圖

3.4 檢測限驗證 精密量取對照品溶液(濃度為1.500 18×10－5)1 mL置100 mL量瓶中并定容到刻度，分別準(zhǔn)確移取稀釋后溶液10 mL、5 mL、3 mL溶液到25 mL量瓶中并定容到刻度作為供試品溶液，則溶液稀釋倍數(shù)分別為100、250、500、833倍。以甲醇作為空白樣品與稀釋后樣品分別進樣并記錄圖譜。檢測限檢測結(jié)果見表2。

表2 檢測限結(jié)果

由表2可知，樣品稀釋到250倍時薄荷腦與噪聲峰面積比約為 2∶1，所以儀器的檢測限定為 6.000 72 ×10－8g·mL－1。

3.5 線性驗證 以已知濃度(7.500 9×10－5g·mL－1)的對照品溶液為100%的濃度，分別配制60%、80%、120%、140%的溶液作為供試品溶液分別進樣。以測得的薄荷腦的濃度為橫坐標(biāo)，薄荷腦與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo)作圖并進行線性回歸，線性回歸方程為Y=4 956X－0.002 3，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，證明薄荷腦在4.500 5 ×10－5～1.050 1 ×10－4g·mL－1內(nèi)線性良好。

3.6 耐用性試驗 取供試品(批號:6105)按2.3項下制備試驗用溶液，放置24 h，期間每隔3 h進樣一次，耐用性檢測結(jié)果見表3。

表3 耐用性檢測結(jié)果

從表3中結(jié)果可知，薄荷腦含量測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.56%，溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，說明小的變動對含量測定結(jié)果無影響。

4 討論

試驗中發(fā)現(xiàn)，在多種可作為內(nèi)標(biāo)物的物質(zhì)中，水楊酸甲酯與被測物質(zhì)具有良好的分離度，故采用水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)物。采用氣相色譜法對凝膠膏劑進行含量測定的同時也可對薄荷腦進行氣相色譜鑒別，既省時簡便，且專屬性較高。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:194－195.

［2］劉克江等.藥品檢驗儀器操作規(guī)程［M］.中國科學(xué)技術(shù)出版社，2005.282 －283