重組海藻糖合酶工程菌高密度發酵條件的研究

陳 穎，楊麗維，齊 欣，陳曉云，李明春，唐 柳，張 峻，*

(1.天津市林業果樹研究所，天津 300112;2.南開大學微生物學系，天津 300071)

重組海藻糖合酶工程菌高密度發酵條件的研究

陳 穎1，楊麗維1，齊 欣1，陳曉云1，李明春2，唐 柳1，張 峻1，*

(1.天津市林業果樹研究所，天津 300112;2.南開大學微生物學系，天津 300071)

目的:通過對前期構建的海藻糖合酶基因工程菌進行高密度發酵的研究，獲得了其高密度工藝條件。方法:采用搖瓶發酵和10L自控罐高密度發酵研究了培養基、pH、發酵方式對工程菌生長及目的蛋白表達的影響，并考察了工程菌中重組質粒的遺傳穩定性。結果:海藻糖合酶基因工程菌高密度發酵的培養基為2YT+0.2%葡萄糖，最適pH為7.0，發酵方式為分批補料，通過10L自控罐高密度發酵最終得到的工程菌細胞密度達到了50.78g/L，酶活達到了3.197U/mL。所構建的重組質粒在宿主中得到了穩定遺傳。結論:優化了海藻糖合酶基因工程菌高密度發酵的條件，為海藻糖規?；a奠定了基礎。

海藻糖合酶，基因工程菌，高密度發酵

海藻糖合酶單酶法生產海藻糖，由于具有嚴格的底物專一性，原料易得，產物組成簡單等特點成為近幾年酶法生產海藻糖的研究熱點［1］。海藻糖合酶由日本株式會社林原生物化學研究所首先發現［2］，隨后，Tsusaki等人利用放射性探針篩選基因組DNA文庫的方法，分別從Pimelobacter sp.R48和水生棲熱菌(Thermus aquaticus ATCC33923)中克隆得到了海藻糖合酶的基因［3－4］，這是最早的對海藻糖合酶基因的報道。隨后不久，De Smet等人克隆了結核分枝桿菌的海藻糖合酶，并在大腸桿菌中實現了異源表達［5］?！?br>