GRP78在肝硬化大鼠腸源性內毒素血癥引發心臟病變中的作用*

張麗麗， 呂敏麗， 張慧英△， 王黎敏， 田小霞，賈建桃， 冀菁荃， 來麗娜， 宋麗華， 韓德五， JI Cheng

(長治醫學院 1病理生理學教研室，3機能實驗室，4藥理學教研室，山西 長治 046000；山西醫科大學 2第一附屬醫院神經內科，5肝病研究所，山西 太原 030001； 6美國南加州大學Keck醫學院肝病研究中心，加利福尼亞州 洛杉磯 90089)

1000-4718(2012)04-0577-06

2011-03-09

2012-02-01

國家自然科學基金資助項目(No.81070339)；山西省國際科技合作計劃資助項目(No.2010081068)；山西省回國留學人員科研基金資助項目(No.2008-88)；山西醫科大學細胞生理學省部共建教育部重點實驗室主任基金資助項目(No.2010-09)

△通訊作者 Tel:0355-3151441; E-mail:zhanghy2001@163.com

·論著·

GRP78在肝硬化大鼠腸源性內毒素血癥引發心臟病變中的作用*

張麗麗1， 呂敏麗2， 張慧英1△， 王黎敏3， 田小霞1，賈建桃1， 冀菁荃1， 來麗娜4， 宋麗華4， 韓德五5， JI Cheng6

(長治醫學院1病理生理學教研室，3機能實驗室，4藥理學教研室，山西 長治 046000；山西醫科大學2第一附屬醫院神經內科，5肝病研究所，山西 太原 030001；6美國南加州大學Keck醫學院肝病研究中心，加利福尼亞州 洛杉磯 90089)

目的探討葡萄糖調節蛋白78(GRP78)在肝硬化大鼠腸源性內毒素血癥引發心臟病變中的作用。方法51只Wistar雄性大鼠隨機分為肝硬化模型4周組、6周組、8周組和同期正常對照組。于第8周檢測大鼠心功能；檢測各組心肌組織勻漿中腫瘤壞死因子α(TNF-α)和丙二醛(MDA)水平；甲苯胺藍染色和van Giesan染色分別觀察心肌細胞數量的變化和計算心肌膠原容積分數(CVF)；免疫組化法檢測心肌組織GRP78和缺氧誘導因子1α(HIF-1α)蛋白表達情況。結果隨肝硬化病程進展：(1)肝硬化8周組大鼠左室舒張末期壓(LVEDP)及左室內壓最大上升和下降速率(±LV dp/dtmax)均較對照組降低(P<0.05)；(2)心肌組織中TNF-α、MDA、CVF、GRP78蛋白和HIF-1α蛋白水平均逐漸升高并顯著高于正常對照組(P<0.05)；(3)甲苯胺藍染色顯示模型各組心肌細胞數量逐漸減少并顯著低于正常對照組(P<0.05)；(4)血漿中內毒素水平分別與丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、同型半胱氨酸(Hcy)、TNF-α、GRP78和MDA呈顯著正相關(P<0.05)；(5)GRP78蛋白分別與HIF-1α、Hcy、MDA、ALT和CVF呈顯著正相關(P<0.05)。結論肝硬化大鼠伴發的腸源性內毒素血癥通過直接或間接作用引起內質網應激和GRP78表達增加，后者可能是引起心肌重構、導致心臟功能變化的關鍵分子。

肝硬化； 腸源性內毒素血癥； 糖調節蛋白78； 心肌重構

葡萄糖調節蛋白78(78 kD glucose-regulated protein,GRP78)又稱為免疫球蛋白重鏈結合蛋白(immunoglobulin heavy chain-binding protein,BiP)，是位于內質網中重要的分子伴侶[1]。在發生內質網應激時，GRP78可以啟動未折疊蛋白反應(unfolded protein response，UPR)信號級聯，重建內質網功能的平衡，減輕各種應激原對細胞的損害作用，使細胞能夠在變化了的環境中較好地生存下來,因而通常把GRP78作為內質網應激的標志性蛋白[2]。但在持續而又嚴重的內質網應激過程中，GRP78又可通過誘導caspase-12、CHOP等促凋亡因子的表達和活化，導致細胞凋亡與組織損傷[3]。

由于肝臟代謝功能改變以及腸源性內毒素血癥(intestinal endotoxemia,IETM)形成，各種急、慢性肝功能不全往往不同程度地導致肝外組織的損傷，包括心、肺、腦、腎等。臨床研究發現，肝硬化患者的心臟常發生左房腔變大、壁變薄，左室腔擴大、壁肥厚等結構的改變；Valeriano等[4]利用二維多普勒超聲對肝硬化患者心臟功能進行的評價表明，患者的收縮及舒張功能均發生障礙。迄今為止，這些變化發生的病理生理機制仍不清楚。Han[5]提出的“腸源性內毒素血癥學說”中已經明確闡述腸源性內毒素血癥除了對肝臟本身形成“二次打擊”致使原有疾病加重以外，在肝硬化的各種并發癥發生發展中也發揮決定性作用。由此我們推測肝硬化時形成的IETM很可能是導致心臟病理改變的關鍵因素。心肌細胞具有豐富的肌漿網/內質網系統，內毒素可以通過直接或間接途徑引起內質網應激[6]，我們前期研究發現，內質網應激在復合致病因素誘導的動物肝硬化及其并發癥肝肺綜合征發病中發揮重要的作用，內質網應激的關鍵分子GRP78表達也顯著增高[7-8]。因此我們推測GRP78可能在腸源性內毒素血癥引發肝硬化合并的心臟病理變化中起作用。本項研究以復合致病因素誘導的肝硬化大鼠為研究對象，旨在探討GRP78在腸源性內毒素血癥引發肝硬化合并心臟病理改變中的作用，為臨床預防和治療肝硬化所致的心臟并發癥提供新思路和新途徑。

材 料 和 方 法

1材料

1.1試劑 CCl4(分析純)購自天津市富宇精細化工有限公司；膽固醇購自天津市化學試劑公司；丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase, ALT)活性測定試劑盒和丙二醛(malondialdehyde, MDA)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；內毒素顯色基質鱟試劑盒購自廈門鱟試劑實驗有限公司；TNF-α放射免疫分析藥盒購自北京普爾偉業生物科技有限公司；同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)ELISA檢測試劑盒購自上海門碟塔試劑公司；GRP78兔抗鼠抗體、缺氧誘導因子1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)兔抗鼠抗體、免疫組化染色SP試劑盒購自北京博奧森生物技術有限公司；市售品牌白酒；市售玉米面和豬油。

1.2模型建立 清潔級成年雄性Wistar大鼠，體重200～240 g。正常對照組動物飼以標準飼料和自來水，采用復合致病因素法復制大鼠肝硬化模型[9]。

2方法

2.1心功能檢測 大鼠飼養8周后，經10%水合氯醛腹腔麻醉(3 mL/kg)，經右側頸總動脈逆行插管至左心室腔內，使用多媒體生物信號記錄儀系統，分別測量左室收縮壓(left ventricular systolic pressure，LVSP)、左室舒張末期壓(left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP)及左室內壓最大上升和下降速率(±LV dp/dtmax)。

2.2心肌組織勻漿中指標檢測 采用超聲波細胞粉碎機制備10%組織勻漿，TBA法檢測勻漿中TNF-α和MDA含量，蛋白定量采用考馬斯亮藍法。

2.3心肌組織病理學觀察

2.3.1苦味酸-酸性品紅(van Giesan,VG)染色進行心肌膠原特異染色 石蠟包埋的心肌組織標本切片行VG染色，心肌細胞呈黃色，膠原呈紅色。光學顯微鏡下觀察心肌間質膠原纖維化變化并采用HPIAS-2000型圖像分析系統測量心肌組織膠原容積分數(collagen volume fraction,CVF)，計算方法：CVF(%)=膠原面積/圖像總面積×100%,每張切片隨機選擇10個視野取其平均值進行統計。

2.3.2甲苯胺藍染色法觀察心肌細胞數量的變化 切片脫蠟至水，甲苯胺藍染色20 min，常規脫水透明。光學顯微鏡下觀察心肌細胞數量變化，每張切片隨機取10個視野取其平均值進行統計。

2.4免疫組化法觀察GRP78和HIF-1α蛋白表達情況 取心肌組織石蠟切片常規脫蠟至水，3%H2O2室溫下15 min滅活內源性酶，蒸餾水沖洗后枸櫞酸緩沖液熱修復抗原，PBS沖洗，滴加血清封閉液室溫下封閉20 min，分別滴加兔源性抗GRP78(1∶100)多克隆抗體及兔源性抗HIF-1α(1∶300)濕盒內4 ℃過夜，PBS沖洗后滴加生物素化山羊抗兔IgG室溫下20 min，PBS沖洗，滴加鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶復合物(SABC)室溫下20 min，PBS沖洗后以DAB顯色劑進行顯色，蘇木素復染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。光鏡下觀察結果，陽性反應產物呈棕黃色顆粒，與背景同色為陰性。應用BI-2000醫學圖像彩色分析系統進行圖像分析，每張切片隨機選取10個高倍鏡視野(×400)，分別計算陽性染色指數(positive index, PI)。PI(%)=染色陽性細胞數/視野中總細胞數×100%，取平均值進行統計學分析。

3統計學處理

結 果

1肝硬化大鼠心臟功能的變化

心臟功能的檢測是通過反映心臟收縮和舒張功能的LVSP、LVEDP以及反映左室內壓變化速率的±dp/dtmax來判斷。從結果可知，肝硬化8周組大鼠LVEDP和±dp/dtmax均顯著低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 大鼠心臟功能的變化

*P<0.05vscontrol.

2心肌組織勻漿中TNF-α和MDA含量變化

肝硬化模型各組大鼠心肌組織勻漿TNF-α含量隨病程進展逐漸升高并顯著高于正常對照組(P<0.05)，8周組與6周組相比有顯著差異(P<0.05)。MDA濃度隨病程進展亦明顯升高(P<0.05)，模型各組間變化8周組 > 6周組 > 4周組(P<0.05)，見表2。

表2 大鼠心肌組織勻漿TNF-α和MDA含量的變化

*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsliver cirrhosis (4-week);△P<0.05vsliver cirrhosis (6-week).

3甲苯胺藍染色觀察心肌細胞數量變化

甲苯胺藍染色可見：正常對照組心肌細胞形態正常。肝硬化4周組心肌細胞出現灶狀病理改變，表現為輕度水腫，細胞間隙變小，邊界稍模糊；6周組心肌細胞嚴重水腫，形態大小不一；8周組呈現細胞大片溶解壞死，肌纖維斷裂明顯，邊界模糊。各組病變區域均可見程度不等的炎癥細胞浸潤，見圖1。使用BI-2000醫學圖像分析軟件進行心肌細胞計數，發現各組細胞數量隨病程進展逐漸下降，分別為4周組245.41±3.10、6周組113.84±2.77和8周組40.17±2.67，均顯著低于正常對照組(816.76±7.17)(P<0.05，n=10)，且模型8周組細胞數量顯著低于6周組(P<0.05)。

Figure 1. Comparison of the myocardial cell number(toluidine blue staining,×400). A：control；B：liver cirrhosis at the 4th week；C：liver cirrhosis at the 6th week；D：liver cirrhosis at the 8th week.

圖1肝硬化大鼠心肌細胞數量變化

4VG染色結果

VG染色后在普通光學顯微鏡下觀察:正常心肌間質膠原較少，模型4周組大鼠心肌細胞周圍可見少量被染成紅色的膠原纖維；6周組間質膠原含量明顯增加，壞死的心肌細胞周圍有大量縱橫交錯的膠原纖維，排列紊亂。8周組可清晰顯示心肌纖維膠原分布于心肌壞死灶周圍，向心肌細胞間質呈放射狀分布，見圖2。模型組的CVF分別為：4周組(5.83±0.93)%、6周組(7.47±1.04)%、8周組(12.56±2.88)%，均顯著高于正常對照組[(2.11±0.52)%](P<0.05，n=10)；模型8周組和6周組比較有顯著差異(P<0.05)。

Figure 2. Comparison of collagen in myocardial interstitium(van Giesan staining,×400).A：control；B：liver cirrhosis at the 4th week；C：liver cirrhosis at the 6th week；D：liver cirrhosis at the 8th week.

圖2肝硬化大鼠心肌間質膠原纖維化情況

5肝硬化大鼠心肌組織GRP78蛋白表達

免疫組化結果顯示：對照組心肌細胞胞漿內可見少量、分布均勻的淺棕色顆粒。模型組隨病程進展染色加深、數量增多，細胞漿內可見濃密的深棕色顆粒，見圖3。GRP78蛋白陽性染色指數分別為4周組(0.048±0.004)%、6周組(0.070±0.020)%和8周組(0.080±0.013)%，均顯著高于正常對照組[(0.031±0.006)%](P<0.05，n=10)，且模型8周組與6周組均高于4周組(P<0.05)。

Figure 3. The expression of GRP78 protein in myocardial tissues(×400).A：control；B：liver cirrhosis at the 4th week；C：liver cirrhosis at the 6th week；D：liver cirrhosis at the 8th week.

圖3肝硬化大鼠心肌組織GRP78蛋白表達變化

6肝硬化大鼠心肌組織HIF-1α蛋白表達

HIF-1α蛋白是一種核蛋白，在光學顯微鏡下觀察發現：棕色或棕褐色顆粒主要顯現在心肌細胞核上，呈彌散或顆粒狀或二者混合分布。著色較強的心肌細胞核中可見豐富的陽性反應顆粒，核周圍胞漿內亦有少量陽性表達，見圖4。陽性染色指數結果為：模型4周組(2.087±0.597)%、6周組(5.840±0.803)%和8周組(12.310±0.994)%，均顯著高于正常對照組[(0.929±0.171)%](P<0.05，n=10)，且模型8周組與6周組比較有顯著差異(P<0.05)。

Figure 4. The expression of HIF-1α protein in myocardial tissues(×400).A：control；B：liver cirrhosis at the 4th week；C：liver cirrhosis at the 6th week；D：liver cirrhosis at the 8th week.

圖4肝硬化大鼠心肌組織HIF-1α蛋白表達變化

7相關性分析

相關性分析可見：(1)血漿內毒素分別與心肌組織勻漿MDA(r=0.768，P<0.05)和GRP78蛋白陽性染色指數(r=0.861，P<0.01)呈正相關；(2)GRP78蛋白陽性染色指數分別與血漿Hcy(r=0.649，P<0.05)、ALT(r=0.691，P<0.05)、心肌勻漿MDA(r=0.794，P<0.01)、CVF(r=0.826，P<0.01)和HIF-1α蛋白陽性染色指數(r=0.618，P<0.05)呈正相關。

討 論

本研究采用復合致病因素法誘導大鼠肝硬化，與臨床多種病因導致的肝硬化相吻合，是對其發病原因以及并發癥研究的理想模型。心功能檢測發現肝硬化8周組大鼠心肌舒張功能出現明顯異常，與臨床患者的改變相吻合。同時我們觀察到在肝硬化發病過程中，隨病程進展心肌細胞水腫、脂肪樣變性、點灶狀壞死、心肌細胞數量減少、心肌纖維化漸趨明顯，說明肝硬化動物合并發生了心臟的病理改變。

肝臟功能障礙損傷腸屏障功能，致使腸道細菌易位及內毒素入血形成菌血癥和腸源性內毒素血癥(IETM)。前述研究我們已經證實腸源性內毒素血癥在肝性腦病[10]、肝腎綜合征[11]和肝肺綜合征[12]發病中發揮重要作用。鑒于臨床上肝硬化患者心臟功能發生的各種病理變化，因而有理由推測腸源性內毒素血癥在其中也起一定作用。內毒素可以直接或間接引起內質網應激[6-7]。

氧化應激是內毒素引起內質網應激的中間環節[7]。內質網含有大量脂質而且功能活躍，很容易受到ROS的攻擊，從而使其發生脂質過氧化，進一步激發內質網應激，嚴重時導致細胞功能受損[13]。也有學者認為，細胞發生脂質過氧化并超過其自身處理能力時，可能會首先攻擊內質網使其結構和功能受損，從而誘導內質網膜脂質過氧化，損傷內質網蛋白，激發內質網應激反應，繼而通過內質網應激的級聯反應，包括活化NF-κB信號通路引起心肌損傷[14]。我們認為，腸源性內毒素血癥發生以后，心肌組織中內毒素含量的增高，可以吸引和趨化大量炎癥細胞的聚集，產生氧化應激進而通過某種機制激發內質網應激。丙二醛是脂質過氧化的中間產物，可反映機體內脂質過氧化的程度，同時間接地反映出細胞損傷的程度。本項研究中肝硬化動物心肌組織丙二醛含量隨病程進展不斷升高，且較正常對照組升高顯著(P<0.05)，證實心肌組織發生了明顯的脂質過氧化。提示腸源性內毒素血癥引起氧化應激進而激發的內質網應激很可能在肝硬化并發的心臟病理變化中發揮重要作用。

肝臟代謝功能障礙可能是肝硬化合并心臟病理改變發生的重要基礎。當肝臟功能受損時，物質代謝障礙勢必會影響到甲硫氨酸代謝，導致高同型半胱氨酸血癥(HHcy)的發生。Ji等[15]發現乙醇可以引起肝內脂肪聚集、肝損傷和明顯的HHcy，同時伴有內質網應激反應基因的高表達，證實了HHcy是重要的內質網應激原，也是肝臟病變持續與發展的重要機制之一。同型半胱氨酸含有活潑的自由巰基，可改變細胞內的氧化還原狀態，使內質網微環境紊亂，影響蛋白質的折疊使其不能順利地從內質網轉運至高爾基體,繼而滯留在內質網中,啟動內質網應激信號通路。在我們建立的肝硬化模型中動物也存在高同型半胱氨酸血癥，所以有理由推測其在肝硬化并發的心臟病變中也是內質網應激發生的重要應激原之一。

肝臟疾病往往合并肝肺綜合征，而且發生時間較早，缺氧是其重要病理改變。缺氧激活的HIF-1α是維持細胞和全身氧穩態的重要調節因子，是缺氧發生的重要標志分子，也是缺氧狀態下發揮活性的轉錄因子。HIF-1α可上調糖酵解相關的己糖激酶、醛縮酶、烯醇化酶基因表達，有利于細胞在缺氧環境下通過增強糖酵解途徑產生能量、提供組織利用以維持正常的功能。已有研究表明：心肌缺血早期即有HIF-1α表達，是引發各種應激蛋白表達的轉錄因子，在缺血、缺氧的適應反應中起核心作用，被認為是內源性保護機制的始動因子和共同途徑。但是HIF-1α作用是兩面性的，其過度持續表達，則反而可以使乳酸生成過多，造成心肌細胞酸中毒，引起損傷。我們發現，隨肝硬化病程進展，(1)心肌細胞數量逐漸減少，同時間質纖維含量逐漸增加；(2)心肌組織中HIF-1α與GRP78蛋白表達呈顯著正相關。我們認為，肝硬化早期合并發生的肝肺綜合征所致缺氧誘導表達的HIF-1α可以引起內質網應激和其關鍵分子GRP78的高表達，繼而發生未折疊蛋白反應，對心肌細胞的缺氧起保護作用；但隨著病情加重，嚴重而持續的缺氧所導致的HIF-1α過度表達則會引起內質網應激的嚴重反應，通過GRP78啟動凋亡，引起心肌細胞的一系列損傷。因此認為缺氧可能是導致肝硬化合并心臟病理變化的又一重要因素。

綜上所述，在肝硬化發病過程中，多種因素參與了心臟病理改變的發生，導致心肌工作細胞數量減少、間質纖維化、心肌重塑，心臟功能逐漸衰退，極其容易在各種誘發因素下發生心力衰竭，危及患者生命，GRP78可能是在其中起關鍵作用的分子。因而針對GRP78對肝硬化合并心臟病變的深入研究，有利于揭示其發病機制，為臨床預防和治療提供新思路和新策略。

[1] Lee AS．The ER chaperone and signaling regulator GRP78/BiP as a monitor of endoplasmic reticulum stress [J]．Methods,2005, 35(4):373-381．

[2] Quinones QJ, de Ridder GG, Pizzo SV. GRP78: a chaperone with diverse roles beyond the endoplasmic reticulum[J].Histol Histopathol, 2008,23(11):1409-1416.

[3] Xu CY．Endoplasmic reticulum stress：cell life and death decisions [J]. J Clin Invest, 2005,115(10):2656-2664.

[4] Valeriano V, Funaro S, Lionetti R, et al. Modification of cardiac function in cirrhotic patients with and without ascites [J]. Am J Gastroenterol, 2000, 95(11): 3200 - 3205.

[5] Han DW. Intestinal endotoxemia as a pathogenetic mechanism in liver failure [J]. World J Gastroenterol, 2002,8(6):961-965.

[6] Liu YC, Chang AY, Tsai YC,et al.Differential protection against oxidative stress and nitric oxide overproduction in cardiovascular and pulmonary systems by propofol during endotoxemia [J]. J Biomed Sci, 2009, 16(1):8-21.

[7] 冀菁荃,張慧英,賈建桃，等.糖調節蛋白78在大鼠腸源性內毒素血癥促進肝硬化形成中的作用[J]. 中國病理生理雜志, 2010,26(12):2447-2452.

[8] 賈建桃,張慧英,田曉霞，等.葡萄糖調節蛋白78在復合致病因素誘導的大鼠肝肺綜合征中的作用[J]. 中國病理生理雜志, 2011,27(8):1580-1585.

[9] Zhang HY, Han DW, Zhao ZF, et al. Multiple pathogenic factor induced complications of cirrhosis in rats: a new model of hepatopulmonary syndrome with intestinal endotoxemia [J]. World J Gastroenterol, 2007,13(25):3500-3507.

[10]韓德五.腸源性內毒素血癥與肝病：肝衰竭的IETM學說[M].第1版.北京: 中國科學技術出版社，2004.

[11]李夏青,韓德五,趙元昌，等.內毒素誘發肝硬化大鼠發生肝性腦病的實驗研究[J]. 中國病理生理雜志, 1999,15(2):151-153.

[12]張慧英,韓德五,王新國，等.脂多糖在肝肺綜合征發生中的作用[J]. 中國病理生理雜志，2005,21(11):2238-2242.

[13]Martinelli GP, Friedrich VL Jr, Holstein GR. L-Citrulline immunostaining identifies nitric oxide production sites within neurons [J]. Neuroscience,2002,114(1): 111-122.

[14]Hong RT, Xu JM, Mei Q. Melatonin ameliorates experimental hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats [J]. World J Gastroenterol,2009, 15(12):1452-1458.

[15]Ji C, Kaplowitz N. Betaine decreases hyperhomocysteinemia, endoplasmic reticulum stress, and liver injury in alcohol-fed mice [J]. Gastroenterology, 2003,124(5):1488-1499.

RoleofGRP78inalterationofmyocardiuminducedbyintestinalendotoxemiaincirrhoticrats

ZHANG Li-li1, LV Min-li2, ZHANG Hui-ying1, WANG Li-min3, TIAN Xiao-xia1, JIA Jian-tao1, JI Jing-quan1, LAI Li-na4, SONG Li-hua4, HAN De-wu5, JI Cheng6

(1DepartmentofPathophysiology,3FunctionalIntegrativeLaboratory,4DepartmentofPharmacology,ChangzhiMedicalCollege,Changzhi046000,China;2NeurologyDepartmentofTheFirstAffiliatedClinicalMedicalCollege,5InstituteofHepatology,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China;6ResearchCenterforLiverDisease,KeckSchoolofMedicine,UniversityofSouthernCalifornia,LosAngeles,CA90089,USA.E-mail:zhanghy2001@163.com)

AIM: To explore the role of glucose-regulated protein 78 (GRP78) in the alteration of myocardium induced by intestinal endotoxemia in cirrhotic rats.METHODSFifty-one male Wistar rats were randomly divided into liver cirrhosis groups of 4-week, 6-week and 8-week, and normal control groups at corresponding time points. The cardiac functions of the 8-week rats were measured. Tumor necrosis factor α(TNF-α) and malondialdehyde(MDA) in myocardial tissues were detected. The number of myocardial cells and the collagen volume fraction (CVF) were determined with toluidine blue and van Giesan staining, respectively. The expression of GRP78 and hypoxia-inducible facotr 1α(HIF-1α) was analyzed by the method of immnunohistochemistry.RESULTSCompared with normal control group at corresponding time point, left ventricular end-diastolic pressure(LVEDP) and ±LV dp/dtmaxin 8-week group were significantly decreased (P<0.05). The levels of TNF-α, MDA and CVF, the protein expression of GRP78 and HIF-1α in the myocardial tissues were significantly increased in every model group (P<0.05), and the number of myocardial cells was gradually decreased (P<0.05). Elevated levels of endotoxin in plasma were positively correlated with the levels of alanine aminotransferase (ALT),homocysteine (Hcy) and TNF-α in plasma, the levels of TNF-α, MDA and CVF, and protein levels of GRP78 and HIF-1α in the myocardial tissues (P<0.05). Elevated protein expression of GRP78 in the myocardial tissues was positively correlated with the levels of ALT, Hcy in plasma and MDA, CVF, HIF-1α protein in the myocardial tissues (P<0.05).CONCLUSIONIntestinal endotoxemia induced by liver cirrhosis may directly or indirectly lead to endoplasmic reticulum stress and overexpression of GRP78. GRP78 may be a key molecule in the pathogenesis of myocardial remodeling and functional alteration induced by liver cirrhosis.

Liver cirrhosis; Intestinal endotoxemia; Glucose-regulated protein 78; Myocardial remodeling

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2012.04.001