梗阻性黃疸大鼠應(yīng)激時(shí)血漿表皮生長(zhǎng)因子變化與急性胃粘膜病變關(guān)系的研究

顧 煒,蔡 兵

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無(wú)錫市人民醫(yī)院肝膽外科,江蘇無(wú)錫,214023)

梗阻性黃疸(OJ)是肝膽外科常見(jiàn)的疾病之一,患者術(shù)后發(fā)生急性胃粘膜病變出血時(shí)死亡率可達(dá)到29.4%～48.1%。急性胃粘膜病變又稱(chēng)應(yīng)激性潰瘍,是術(shù)后導(dǎo)致梗阻性黃疸患者死亡的重要原因之一。其原因普遍認(rèn)為胃粘膜的損傷因素和保護(hù)因素失衡有關(guān)。而胃粘膜血流被認(rèn)為是胃粘膜保護(hù)機(jī)制的重要因素,胃粘膜的血流減少是發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的主要原因之一。表皮生長(zhǎng)因子(EGF)是一種含有53個(gè)氨基酸殘基的多肽激素,可增加胃粘膜血流量,并可促進(jìn)胃粘膜的增生及維持胃粘膜的完整性。因此,EGF對(duì)胃粘膜具有保護(hù)作用[1]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)梗阻性黃疸大鼠應(yīng)激狀態(tài)下血漿EGF水平測(cè)定并與對(duì)照組進(jìn)行比較,并同步觀察肉眼及光鏡下胃粘膜形態(tài)學(xué)改變,以探討EGF在梗阻性黃疸急性胃粘膜病變發(fā)病機(jī)制中的作用,為臨床防治工作提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型的制備

1.1.1 梗阻性黃疸模型的制備:將實(shí)驗(yàn)大鼠術(shù)前禁食水24 h,用1%戊巴比妥鈉按30 mg/kg的劑量進(jìn)行腹腔注射麻醉。腹部備皮,嚴(yán)格消毒后,取上腹部正中切口開(kāi)腹,在肝門(mén)部找到并游離膽總管,在十二指腸上方雙重結(jié)扎膽總管;假手術(shù)組僅游離膽總管,而不結(jié)扎膽總管。

1.1.2 應(yīng)激模型的制備:實(shí)驗(yàn)前禁食水24 h,于術(shù)后第14天用乙醚將大鼠麻醉后,將大鼠四肢束搏于木板上,待大鼠清醒后,將木板垂直浸入(水溫22～24℃)水浴中,水面至胸骨劍突,應(yīng)激3 h后取出。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組處理

選擇健康雄性Wistar大鼠40只,體質(zhì)量250～300 g,中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,隨機(jī)分成2大組,每組20只,即假手術(shù)組和梗阻性黃疸組,普通飼料飼養(yǎng)2周。2周后于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天各組再隨機(jī)分為2個(gè)小組,即對(duì)照組和應(yīng)激組。分組后成為4個(gè)小組(假手術(shù)組A組、假手術(shù)應(yīng)激組B組、梗阻性黃疸組C組、梗阻性黃疸應(yīng)激組D組),每組10只。應(yīng)激結(jié)束后處死動(dòng)物取標(biāo)本。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1 EGF測(cè)定:將大鼠仰臥位固定于固定板上,做胸腹聯(lián)合切口暴露胃和心臟,用注射器進(jìn)行心臟穿刺抽血,抽出的血用3500 r/min離心10 min,離心后取血漿2 mL,采用放射免疫分析法測(cè)定血漿EGF含量。EGF試劑盒購(gòu)自北京海科生物技術(shù)中心。

1.3.2 胃粘膜損傷指數(shù)(UI)的測(cè)定:取下的全胃沿大彎側(cè)剪開(kāi),用清水沖洗,在放大鏡下觀察胃粘膜表面,按Guth標(biāo)準(zhǔn)[2]計(jì)分:點(diǎn)狀出血為1分;線(xiàn)狀出血長(zhǎng)度<1 mm為2分,1～2 mm為3分,2～4 mm為4分,>4 mm 為5分,寬度>1 mm時(shí)加倍得分。每個(gè)胃所得分之總和即為該大鼠的胃粘膜損傷指數(shù)(UI)。

1.3.3 光鏡標(biāo)本的制備及觀察:將胃組織蠟塊用5 μ m厚度切片,常規(guī)脫蠟至水,制作成HE染色,觀察胃組織的一般形態(tài)學(xué)改變,用MpIAS-500多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 血漿EGF水平的變化

測(cè)定血漿表皮生長(zhǎng)因子水平可見(jiàn):B組、C組、D組與A組相比較均有顯著性差異(P<0.05);其中D組與B組比較有顯著性差異(P<0.01)。

2.2 胃黏膜損傷指數(shù)的變化

觀察胃黏膜損傷指數(shù)見(jiàn),A組未見(jiàn)胃粘膜損傷,與其他3組比較有顯著性差異(P<0.01),B組與C組相比較損傷指數(shù)增加明顯(P<0.05),D組與B組、C組相比較,損傷指數(shù)增加明顯,具有顯著性差異(P<0.01,表1)。

表1 各組血漿EGF及胃粘膜損傷指數(shù)變化

2.3 胃組織粘膜光鏡下組織學(xué)變化

顯微鏡下觀察各組HE染色之間一般形態(tài)學(xué)的改變?nèi)缦?A組胃壁各層結(jié)構(gòu)基本保持正常,粘膜未受到破壞(圖1);B組胃粘膜厚度變薄,部分腺體遭到破壞(圖2);C組胃粘膜厚度變薄,粘膜輕度破壞(圖3);D組胃粘膜的完整性遭到破壞,粘膜層部分細(xì)胞壞死,細(xì)胞核消失,粘膜下出血,血管擴(kuò)張,血流淤滯(圖4)。

3 討 論

通過(guò)對(duì)梗阻性黃疸大鼠及其應(yīng)激狀態(tài)下血漿EGF水平的測(cè)定發(fā)現(xiàn),梗阻性黃疸合并應(yīng)激時(shí)血漿EGF水平明顯下降,且與胃粘膜損傷指數(shù)呈負(fù)相關(guān)。其原因目前尚未完全清楚,可能與下術(shù)因素有關(guān):①膽管梗阻,EGF不能隨膽汁正常進(jìn)入腸道并返流入血。②并發(fā)內(nèi)毒素血癥,致EGF合成或分泌減少。③應(yīng)激致交感神經(jīng)興奮,EGF合成及分泌下降[3]。④外科手術(shù)方式通常選擇膽道外引流,致EGF隨膽汁丟失有關(guān)。

圖1 A組胃壁各層結(jié)構(gòu)基本保持正常,粘膜未受到破壞(HE 100倍)

圖2 B組胃粘膜厚度變薄,部分腺體遭到破壞(HE 100倍)

圖3 C組胃粘膜厚度變薄,粘膜輕度破壞(HE 100倍)

圖4 D組胃粘膜的完整性遭到破壞,粘膜層部分細(xì)胞壞死,細(xì)胞核消失,粘膜下出血,血管擴(kuò)張,血流淤滯(HE 100倍)

表皮生長(zhǎng)因子是一種含有53個(gè)氨基酸殘基的單鏈多肽激素,它主要來(lái)源于頜下腺、十二指腸Brunner腺、腎小管細(xì)胞、胰腺、甲狀腺及肝臟等組織,其中以頜下腺最多。正常情況下,EGF是通過(guò)與胃粘膜上皮細(xì)胞基底側(cè)膜上的EGF受體(EGFR)相結(jié)合后,發(fā)揮其損傷修復(fù)作用的。具體機(jī)制可能為:①改善胃粘膜微循環(huán),增加胃粘膜血流量,保護(hù)粘膜微血管,顯著降低缺血再灌注損傷[4];②促進(jìn)胃粘膜上皮的分化、增生、在體內(nèi)、體外均能刺激多種細(xì)胞DNA、RNA合成,從而促進(jìn)胃粘膜細(xì)胞的成熟,再生和修復(fù),保護(hù)胃粘膜免受損傷因子破壞,維持胃粘膜完整性;③抑制胃酸分泌,抗?jié)冏饔?④促進(jìn)胃粘膜粘液糖蛋白的合成和分泌[5];⑤促進(jìn)巰基化合物合成以及胃泌素分泌,后者對(duì)胃粘膜有營(yíng)養(yǎng)作用[6]。當(dāng)發(fā)生應(yīng)激時(shí),血漿EGF含量在胃粘膜受損初期有所升高,但隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng),胃粘膜損傷面的擴(kuò)大和加重而下降。

因此,梗阻性黃疸的患者,由于術(shù)前血漿EGF已有下降,所以患者已存在胃粘膜糜爛、出血的傾向。當(dāng)遭受手術(shù)應(yīng)激時(shí),EGF水平繼續(xù)下降,EGF的保護(hù)作用進(jìn)一步減弱,此時(shí)胃粘膜的持續(xù)性損害將失去內(nèi)源性EGF的保護(hù),導(dǎo)致?lián)p害性因素與保護(hù)性因素的平衡失調(diào)。是梗阻性黃疸患者術(shù)后易并發(fā)急性胃粘膜病變的重要因素之一。

事實(shí)上,目前許多臨床上使用的胃粘膜保護(hù)藥物如硫糖鋁、膠體次枸櫞酸鉍等,也正是通過(guò)刺激內(nèi)源性 EGF的分泌,增加潰瘍邊緣粘膜的EGF、EGFR的表達(dá)量,從而提高潰瘍的愈合質(zhì)量[7]。隨著對(duì)EGF研究的進(jìn)一步深入,尤其是EGF對(duì)胃粘膜保護(hù)作用的分子機(jī)制進(jìn)一步揭示,EGF類(lèi)藥物將廣泛應(yīng)用于臨床,有助于梗阻性黃疸患者術(shù)后并發(fā)應(yīng)激性潰瘍出血的防治。

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