變應(yīng)性鼻炎中血紅素氧合酶1與嗜酸性粒細(xì)胞的關(guān)系

周立勇，羅德生，劉 陽

(1.武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部，湖北武漢430072;2.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;3.武漢同濟(jì)醫(yī)院耳鼻咽喉科)

氣道炎性細(xì)胞產(chǎn)生的大量細(xì)胞因子和炎癥蛋白參與了變態(tài)反應(yīng)疾病的形成。血紅素氧合酶(HO)是一種血紅素降解的催化酶。已發(fā)現(xiàn)HO有3 種同工酶，分別為 HO－1、HO－2 及 HO－3。HO－1為誘導(dǎo)型，HO－2和HO－3為結(jié)構(gòu)型，它們是不同基因編碼的產(chǎn)物?，F(xiàn)已證實(shí)HO－1是一種應(yīng)激蛋白，HO－1適量表達(dá)可以減輕細(xì)胞損傷、蛋白質(zhì)氧化及脂質(zhì)過氧化［1］。但是HO－1在變態(tài)反應(yīng)性疾病中還鮮有研究，本文旨在探討HO－1在變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中與嗜酸性粒細(xì)胞的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源及試劑

變應(yīng)性鼻炎組:為2009年7月至2009年12月在同濟(jì)醫(yī)院接受鼻內(nèi)鏡下鼻中隔偏曲矯正術(shù)的常年性、持續(xù)性，中、重度變應(yīng)性鼻炎患者。共12例，男5例，女7例;年齡17～55歲，平均40歲。患者不合并哮喘及阿司匹林耐受不良。依照2009年武夷山會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診［2］。對(duì)照組:為同一時(shí)期在我院接受鼻內(nèi)鏡手術(shù)的單純性鼻中隔偏曲患者。共11例，男8例，女3例;年齡16～57歲，平均36歲。所有患者1個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行激素和抗組胺藥物治療。術(shù)中取下鼻甲黏膜行PCR。引物由上海生物工程公司合成。

1.2 方法

1.2.1 HE染色

組織經(jīng)脫水、透明后，進(jìn)行石蠟包埋、切片，按常規(guī)蘇木精－伊紅染色。

1.2.2 PCR鼻竇黏膜總RNA提取及HO－1 mRNA半定量檢測(cè)

采用 RT－PCR方法測(cè)定HO－1的表達(dá)，以甘油醛－3－磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參照。HO－1上游引物:5＇－CGG GCC AGC AAC AAA GTG－3＇，下游引物 5＇－AGT GTA AGG ACC CAT CGG AGA A－3＇;GAPDH 上游引物 5＇－ACCCAGAAGACTGTGGATGG－3＇，下 游 引 物:5＇－TTCTAGACGGCAGGTCAGGT－3＇。計(jì)算 HO－1 相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 定量分析

采用HMIAS2－1000高清晰度醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)(武漢千屏醫(yī)學(xué)影像技術(shù)公司)進(jìn)行定量組織病理學(xué)分析;鼻黏膜固有層內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤以每平方毫米黏膜固有層細(xì)胞個(gè)數(shù)表示(個(gè)/mm2)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 HO－1 mRNA 表達(dá)水平

變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜HO－1 mRNA表達(dá)水平增高。實(shí)時(shí)定量RT－PCR檢測(cè)顯示變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中HO－1mRNA相對(duì)表達(dá)水平(8±1)顯著高于對(duì)照組(2±0.5)，兩組有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)(見圖1)。

圖1 正常對(duì)照組和變應(yīng)性鼻炎組的HO－1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較

2.2 嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目

變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目增多。計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量(40±3.11個(gè)/mm2)顯著高于對(duì)照組(1±0.3個(gè)/mm2)，統(tǒng)計(jì)有顯著性差異(P＜0.001)(見表1)。

表1 正常對(duì)照組和變應(yīng)性鼻炎組嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)比較

2.3 相關(guān)性分析

相關(guān)性分析表明，變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜固有層HO－1mRNA水平與鼻黏膜中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目(40±3.1)成明顯負(fù)相關(guān)(r=－0.647，P＜0.01)。

3 討論

變應(yīng)性鼻炎是嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，加重社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的全球性問題。美國變應(yīng)性鼻炎最新調(diào)查報(bào)告顯示14%患者曾被診斷患有變應(yīng)性鼻炎［2］。我國11個(gè)城市中變應(yīng)性鼻炎自報(bào)患病率達(dá)8% ～21.4%［3］。目前認(rèn)為變應(yīng)性鼻炎是鼻黏膜組織的一種非感染性炎癥，它的發(fā)生系由外界變應(yīng)原與位于鼻黏膜的特殊炎癥性或免疫防御性細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)。目前認(rèn)為變應(yīng)性鼻炎是由大量的炎性細(xì)胞和細(xì)胞因子介導(dǎo)的，由變應(yīng)原引起的炎性反應(yīng)。它們參與了變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜上皮的杯狀細(xì)胞的增生，黏膜的重塑等病理過程。

HO是一種血紅素降解的催化酶。已發(fā)現(xiàn)HO 有 3 種同工酶，分別為 HO－1、HO－2 及 HO－3。HO－1 為誘導(dǎo)型，HO－2 和 HO－3 為結(jié)構(gòu)型，它們是不同基因編碼的產(chǎn)物。現(xiàn)已證實(shí)HO－1是一種應(yīng)激蛋白，HO－1適量表達(dá)可以減輕細(xì)胞損傷、蛋白質(zhì)氧化及脂質(zhì)過氧化［1］。

在呼吸道疾病中，既往研究主要集中在哮喘和慢性阻塞性肺疾病中，研究表明在肺組織中HO－1具有抑制疾病發(fā)生和發(fā)展的作用［1］。而HO－1在變應(yīng)性鼻炎中還沒有研究，本研究通過PCR方法顯示在變態(tài)反應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中HO－1 mRNA水平顯著增高，提示HO－1可能在變應(yīng)性鼻炎中起重要作用。Lee IT等［4］研究表明HO－1可能通過下調(diào)TNFR1介導(dǎo)的氧化應(yīng)激來調(diào)控呼吸道的炎癥反應(yīng)。Xia ZW等［5］通過研究小鼠的呼吸道變態(tài)反應(yīng)性炎癥表明HO－1可能通過上調(diào)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平來抑制呼吸道的炎癥反應(yīng)，但具體的分子和細(xì)胞機(jī)制還不清楚。我們通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)鼻黏膜中HO－1水平與鼻黏膜中浸潤的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目成明顯負(fù)相關(guān)，表明HO－1可能抑制以嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為主的變態(tài)反應(yīng)性疾病的炎癥。

綜上所述，HO－1可能抑制變應(yīng)性鼻炎發(fā)病的發(fā)展，它可能是通過嗜酸性粒細(xì)胞來起作用的，但其具體的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步探討。

［1］Tsoumakidou M，Tzanakis N，Chrysofakis G，et al.Nitrosative stress，heme oxygenase－1 expression and airway inflammation during severe exacerbations of COPD［J］.Chest，2005，127(6):1911

［2］中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編輯委員會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉科學(xué)分會(huì).變應(yīng)性鼻炎的診治原則和推薦方案(2009年，武夷山)［J］.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2009，40(3):947

［3］韓德民，張羅，黃丹，等.我國11個(gè)城市變應(yīng)性鼻炎自報(bào)患病率調(diào)查［J］.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2006，42:378

［4］Lee IT，Luo SF，Lee CW，et al.Overexpression of HO－1 protects against TNF－alpha－mediated airway inflammation by down－regulation of TNFR1－dependent oxidative stress［J］.Am J Pathol，2009，175(2):519

［5］Xia ZW，Zhong WW，Xu LQ，et al.Heme oxygenase－1－mediated CD4+CD25high regulatory T cells suppress allergic airway inflammation［J］.J Jmmund，2006，177(9):5936