宮頸上皮內(nèi)瘤變累腺組織中MMP-7的表達(dá)及意義

周曉景 王芳 牛吉峰

宮頸上皮內(nèi)瘤變累腺組織中MMP-7的表達(dá)及意義

周曉景①王芳①牛吉峰①

目的：檢測基質(zhì)降解素(MMP-7)在宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)累腺組織中的表達(dá)，探討其對CIN發(fā)生、發(fā)展以及對CIN預(yù)后的影響。方法：采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫組化分別檢測30例CIN累腺組織、40例CIN非累腺組織、15例正常宮頸組織中MMP-7 mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果：累腺CIN組MMP-7 mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著高于未累腺CIN組和正常組(P<0.05)；MMP-7 mRNA及蛋白無論在CIN累腺組還是非累腺組Ⅲ期中的表達(dá)顯著高于Ⅱ期中的表達(dá)，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，在CINⅡ期和正常宮頸組織中的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：累腺CIN中MMP-7高表達(dá)可能與宮頸錐切術(shù)后復(fù)發(fā)及發(fā)展為浸潤性宮頸癌傾向密切相關(guān)；MMP-7可作為預(yù)測CIN預(yù)后的指標(biāo)。

宮頸上皮內(nèi)瘤變累腺； MMP-7； 預(yù)后

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是與宮頸癌密切相關(guān)的一組癌前病變，對于CINⅡ~Ⅲ期，目前主要治療方法是宮頸錐切術(shù)，而CIN累腺與宮頸錐切術(shù)后復(fù)發(fā)及預(yù)后相關(guān)[1]。MMP-7在許多上皮性腫瘤中高表達(dá)，并且與生存率密切相關(guān)。本研究通過檢測MMP-7在CIN累腺組織中核酸和蛋白表達(dá)情況，探討MMP-7對CIN累腺預(yù)后的影響和意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集CIN組織標(biāo)本70例，均為Ⅱ~Ⅲ期。CIN累腺組30例，Ⅱ期12例，Ⅲ期18例，年齡26~56歲，平均年齡(36.52±3.81)歲。CIN非累腺組40例，Ⅱ期24例，Ⅲ期16例，年齡25~58歲，平均年齡(37.16±4.20)歲。取標(biāo)本前未經(jīng)冷凍、激光及藥物治療，標(biāo)本在陰道鏡下活檢取材、病理學(xué)確診。取15例正常宮頸組織作對照，對照組年齡30~52歲，平均年齡(36.90±3.45)歲。新鮮組織離體后迅速放入RNAguard中，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 RT-PCR法 總RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄成cDNA、擴(kuò)增，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。以GAPDH為內(nèi)參照。MMP-7引 物 序 列：上 游 5’GTGGTCACCTACAGGATCGT3’， 下游 5’ACCATCCGTCCAGCGTTCAT3’(282 bp)；GAPDH引物序列：上游5’TGGGTGTGAACCACGAGAA3’，下游5’GGAATGGACTGTGGTCATGA3’(143 bp)。MMP-7 和GAPDH的PCR反應(yīng)條件：94 ℃熱變性5 min，以94 ℃變性30 s，59 ℃復(fù)性30 s，72 ℃延伸1 min順序共循環(huán)38次，72 ℃延伸5 min。反應(yīng)產(chǎn)物在1.5%瓊脂糖凝膠上電泳(90 V，30 min)，EB染色。用Bandscan 5.0生物電泳分析軟件進(jìn)行分析。所測指標(biāo)均與GAPDH灰度值比值作為基因水平相對值進(jìn)行比較。

1.3 免疫組化S-P法 鼠抗人MMP-7單克隆抗體，S-P免疫組化試劑盒，實驗步驟按試劑說明書進(jìn)行，石蠟切片標(biāo)本厚度小于4 μm，切片脫蠟染色后，于光學(xué)顯微鏡下觀察切片顯色反應(yīng)。結(jié)果判定：以細(xì)胞膜或(和)胞漿呈棕黃色染色為陽性著色。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采取字檢驗，計量資料以(±s)表示，采取t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMP-7在CIN累腺組、CIN非累腺組及正常宮頸組中檢測結(jié)果 MMP-7mRNA在CIN累腺組中的表達(dá)顯著高于未累腺CIN組及正常組(P<0.05)；MMP-7蛋白主要定位于上皮細(xì)胞及腺細(xì)胞胞漿，間質(zhì)細(xì)胞中無表達(dá)，在CIN累腺組中的陽性表達(dá)率顯著高于未累腺CIN組及正常組(P<0.05)；MMP-7 mRNA及蛋白在未累腺CIN組及正常組中的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 MMP-7在CIN不同分期中的表達(dá) 無論累腺組還是非累腺組，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅢ期中的表達(dá)顯著高于Ⅱ期，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅡ期和正常宮頸組織中的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 MMP-7mRNA及蛋白在不同宮頸組織中的表達(dá)

3 討論

宮頸癌的癌前病變CINⅡ~Ⅲ期患者，若不及時有效治療，約66%可發(fā)展為宮頸原位癌，2%進(jìn)展為浸潤癌[2]。宮頸錐切術(shù)是目前治療CINⅡ~Ⅲ期的主要手段，尤其適用于生育期患者。但即使有效治療，CIN宮頸錐切術(shù)后復(fù)發(fā)率為3.03%~47.30%[3]。而宮頸管腺體受累是術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險因素[4]。MMP-7即基質(zhì)溶素，具有強(qiáng)大的基質(zhì)降解活性和廣泛的底物特異性，在腫瘤血管的生成和腫瘤的免疫逃避中發(fā)揮重要作用[5]。MMP-7在腫瘤中的高表達(dá)及其生物學(xué)的特異性使其可能成為預(yù)測、判斷腫瘤生物學(xué)行為的新指標(biāo)。

本研究中，MMP-7 mRNA及蛋白在累腺CIN組織中表達(dá)顯著高于非累腺CIN組織及正常宮頸組織，正常宮頸上皮細(xì)胞有弱表達(dá)或不表達(dá)；MMP-7蛋白在CIN上皮細(xì)胞及腺細(xì)胞胞漿表達(dá)，基質(zhì)不表達(dá)，表明MMP-7在核酸和蛋白水平表達(dá)一致，提示MMP-7在CIN累腺組織中的高表達(dá)，使不典型上皮細(xì)胞具有浸潤的傾向。MMP-7 mRNA及蛋白在累腺CIN組織中的高表達(dá)也證明了MMP-7在CIN細(xì)胞表達(dá)具有相對特異性，因此推斷，MMP-7陽性的累腺CIN是錐切術(shù)后易于復(fù)發(fā)的原因之一，且進(jìn)展為浸潤性宮頸癌的幾率也相對升高。本研究中，無論累腺組還是非累腺組，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅢ期中的表達(dá)顯著高于Ⅱ期中的表達(dá)，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅡ期中的表達(dá)顯著高于正常宮頸組織中的表達(dá)，提示MMP-7可能為CIN發(fā)生、發(fā)展以及進(jìn)展為宮頸癌的始動原因之一。MMP-7可作為預(yù)測CIN預(yù)后的指標(biāo)。臨床上通過應(yīng)用蛋白酶抑制劑阻斷MMP-7活性，可能在一定程度上改善累腺CIN患者的預(yù)后。

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Expression and Clinic Significance of MMP-7 in Cervical Intraepithelial Neoplasia Glandular Involvement

ZHOU Xiao-jing，WANG Fang，NIU Ji-feng.

Objective:To investigate the expression and the significance of MMP-7 in cervical intraepithelial neoplasia(CIN)glandular involvement.Method:MMP-7 was examined by immunohistochemical SP method and semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) in 70 cases of CIN and 15 cases of normal cervical tissue.Result:The mRNA and protein level of MMP-7 were all significantly higher in CIN glandular involvement group than that in CIN without glandular involvement group and normal group(P<0.05).Either in CIN glandular involvement group or in CIN without glandular involvement group，MMP-7 mRNA and protein level were all notedly higher in CIN Ⅲ group than that in CIN Ⅱgroup(P<0.05).Conclusion:MMP-7 is highly expressed in CIN glandular involvement and it may be relate to cervical squamous cell carcinoma，and may be served as a new marker in predicting the prognosis in CIN.

Cervical intraepithelial neoplasia glandular involvement; MMP-7; Prognosis

Affiliated Luoyang Central Hospital of Zhengzhou University，Luoyang 471000，China

Medical Innovation of China，2012，9(22):014-015

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.22.007

①鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院 河南 洛陽 471000

周曉景

2012-05-21) (本文編輯：李靜)