血管緊張素原基因M235T多態性與胃癌的相關性

侯 波 趙敬秋 (吉林省人民醫院急診外科，吉林 長春 3002)

血管緊張素原(angiotensinogen，AGT)是一種球狀糖蛋白，主要在肝臟合成，作為腎素底物在調節血壓方面發揮重要作用。此外，體內體外實驗均證實AGT能夠抑制腫瘤細胞增殖、遷移和血管形成，基因導入 AGT能夠阻斷腫瘤生長和轉移〔1，2〕。以往多項研究調查了AGT基因M235T多態性與多種腫瘤的相關性〔3～7〕，然而，其與中國人群胃癌相關性未見報道。本研究采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCRRFLP)技術檢測中國人群胃癌患者AGT基因M235T多態性，旨在探索AGT基因M235T多態性與胃癌的關系，為探討胃癌發病機制提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 我院2008年1月至2010年12月收治胃癌患者168例，男101例，女67例，平均(58.9±13.5)歲，均經組織病理學確診。其中臨床Ⅰ～Ⅱ期97例，Ⅲ～Ⅳ期71例;高中分化104例，低分化64例;有遠處轉移71例，無轉移97例。對照組為健康體檢者211例，男137例，女74例，平均(56.5±11.6)歲，無腫瘤家族史，各項體檢指標均正常，所有個體均為無血緣關系漢族人群。

1.2 主要試劑 全血基因組DNA提取試劑盒購自北京百泰克生物科技公司。TaqDNA聚合酶，dNTP和MgCl2等購自北京天根生物科技有限公司。參照文獻〔8〕設計引物。上游引物：5'-CAGGGTGCTGTCCACACTGGACCCC -3'，下 游 引 物：5'-CCGTTTGTGCAGGGCCT GGCTCTCT-3'。引物由上海英駿生物技術有限公司合成。

1.3 PCR-RFLP分型 采集入選對象者外周靜脈血2 ml，采用全血基因組DNA提取試劑盒提取DNA。運用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)對AGT M235T進行分型。PCR 反應體系為 25 μl，含10 × 反應緩沖液3.0 μl，dNTP 2.5 μl，MgCl21.5 μl，上、下游引物各 0.25 μl，TaqDNA 聚合酶 1.0 U，基因組DNA 1.5 μl，用無菌去離子水補足至25 μl。PCR反應條件如下：94℃預變性4 min;94℃變性 30 s，67℃退火45 s，72℃延伸90 s，35個循環。擴增產物用限制性內切酶TthIII I酶切，酶切產物用6%聚丙烯酰胺凝膠電泳，硝酸銀染色，分析判讀結果。MM型有1條帶：165 bp;MT型3條帶：165、141和24 bp;TT型2條帶：141和24 bp，其中24 bp跑至膠外。

1.4 統計學方法 運用SPSS19.0統計軟件，計數法計算基因型和等位基因頻率，Hardy-Weinberg遺傳平衡定律用于檢測基因型的遺傳平衡狀態，兩組比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩組AGT M235T基因型和等位基因分布 兩組基因型頻率均符合Hardy-Weinberg平衡，表明入選對象具有較好的群體代表性，見表1。

2.2 兩組基因型和等位基因頻率比較 兩組基因型和等位基因頻率差異不顯著(P＞0.05)。根據臨床病理特征進行分層分析，發現低分化胃癌患者TT基因型頻率明顯高于高中分化(P=0.021);AGT M235T多態性與胃癌臨床分期及轉移狀態之間差異不顯著(P＞0.05)(見表2)。

表1 胃癌組與對照組AGT M235T多態性比較〔n(%)〕

表2 胃癌組臨床病理特征與AGT M235T多態性比較

3 討論

腎素-血管緊張素系統(RAS)是一個復雜的多層次內分泌系統，在調節血壓和穩定體液平衡方面發揮極為重要的作用。AGT作為RAS系統中第一步限速反應底物，不僅參與人體血壓調節，而且能夠抑制腫瘤細胞增殖、遷移和腫瘤血管形成〔1，2〕，導入AGT有望成為新的腫瘤基因治療方法。

鑒于AGT在抑制腫瘤生長方面的重要作用，多項研究分析了AGT基因M235T多態性與腫瘤相關性〔3～7〕。Gonzalez-Zuloeta等〔7〕報道在荷蘭人群中，AGT M235T多態性M等位基因增加了絕經后婦女乳腺癌發病風險。Mendizabal-Ruiz等〔5〕報道在墨西哥人群中，AGT M235T多態性與乳腺癌發病無關。Vairaktaris等〔3〕報道在德國和希臘人群中，導致AGT基因表達增加的235T等位基因與口腔癌發病無關。Shibata等〔4〕報道在日本人群中，AGT M235T多態性在胃癌組和對照組中分布無明顯差異。本研究未發現該多態性位點與胃癌存在明顯相關性，與Shibata等〔4〕結果一致，提示存在其他胃癌易感基因。本研究結果表明攜帶TT基因型胃癌患者惡性程度更高，預后更差。綜上，盡管AGT M235T多態性與中國人群胃癌發病風險無關，但其與胃癌分化程度密切相關。本研究尚存在一些局限，比如樣本量相對較少，尤其在分層分析中，而且局限于單一種族，有待于多中心、多種族、大樣本的病例-對照研究加以證實。

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7 Gonzalez-Zuloeta Ladd AM，Arias Vasquez A，Siemes C，et al.Differential roles of angiotensinogen and angiotensin receptor type 1 polymorphisms in breast cancer risk〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2007;101(3)：299-304.

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