覆盆子提取物祛黃褐斑作用研究

徐冰 張聰恪 王海玉 張炎 李立 陳東方

覆盆子為薔薇科植物華東覆盆子Rubus chingii Hu的果實，屬藥食兩用。作為中藥具有益腎助陽，固精縮尿的功效。現代藥理研究表明，覆盆子具有免疫增強、抗衰老、抗誘變等多種作用［1～3］。覆盆子提取物鞣花酸是其功效成分，鞣花酸具有美白、抗紫外線、促進彈性纖維生成的綜合祛斑效果，是皮膚科醫學公認可使用的有效美白成分之一。本試驗中的受試物是由覆盆子提取物、維生素C和維生素E為原料制成的保健食品。在動物毒性試驗已證明其是安全、無毒副作用的前提下，我們對覆盆子祛黃褐斑作用進行了人體試食試驗研究。

1 材料與方法

1.1 樣品 受試樣品由北京某生物科技發展有限公司提供。人群推薦量為2.08 g/d(0.52 g/片，2片/次，2次/d)。

1.2 受試者選擇

1.2.1 納入標準 經體檢符合下列條件的自愿受試者。面部淡褐色至深褐色，界限清楚的斑片，通常對稱性分布，無炎性表現及鱗屑;無明顯自覺癥狀;主要發生在青春期后，女性多發;病情有一定的季節性，夏重冬輕;無明顯內分泌疾病，并排出其他疾病引起的色素沉著。

1.2.2 排除標準 年齡在18歲以下或65歲以上者，妊娠或哺乳期婦女，過敏體質及對本保健食品過敏者;合并有心肝腎和造血系統等嚴重原發性疾病，精神病患者;嗜酒者或吸煙者;短期內服用與受試功能有關的物品，影響到對結果的判斷者;未按規定服用受試物，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。

1.3 試驗設計及分組 采用自身和組間兩種對照設計。按受試者的黃褐斑顏色、面積情況隨機分為試食組和對照組，盡可能考慮影響結果的主要因素如戶外活動情況、年齡等，進行均衡性檢驗，以保證組間的可比性。每組受試者不少于50例。

1.4 樣品的劑量和使用方法 試食組服用覆盆子提取物，2片/次，2次/d，服用量為2.08 g/d，連續30 d。對照組采用空白對照。受試者在試食期間停止使用有關養顏祛斑的藥物或其他保健品及化妝品。試驗期間不改變原來的飲食習慣，正常飲食。

1.5 儀器與試劑 意大利Autolab型全自動生化分析儀、日本CA-500型血球計數儀、美國BM-200尿十項分析儀、美國TH600型X透視儀、美國MAC5000型心電圖儀、Syneogy型B超診斷儀。中國科學院地理研究所設計研制，測繪出版社1992年出版《實用標準色卡》(第一版)，生化試劑盒全部由中生公司提供。

1.6 觀察指標

1.6.1 安全性指標 包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等一般狀況;血、尿、便常規檢查;肝、腎功能等生化指標檢查;胸透、心電圖、腹部B超檢查(僅試驗前檢查一次)

1.6.2 功效性指標 ①顏面部黃褐斑面積大小檢測:用標尺測量受試前后整個顏面部黃褐斑的面積(mm2)。②顏面部黃褐斑顏色深淺檢測:按照中國科學院地理研究所設計研制，測繪出版社1992年出版的《實用標準色卡》(第一版)中的棕色(Y+M+Bk即黃+品紅+黑的疊色)色卡為黃褐斑深淺的判斷標準:I度(15、20、5)，II度(30、40、10)，Ⅲ度(40、60、15)。

1.7 數據處理和結果判定

1.7.1 數據處理 對試食前后黃褐斑顏色積分和面積變化進行統計，同時計算有效率。色卡Ⅰ度、Ⅱ度和Ⅲ度分別計分為1分、2分和3分。結果用均值±標準差表示。計量資料用t檢驗，有效率用χ2檢驗。

1.7.2 功效判定標準 有效:黃褐斑顏色下降Ⅰ度，面積減少大于10%，且不產生新的黃褐斑。無效:黃褐斑顏色及面積無明顯變化。

1.7.3 結果判定 試食組黃褐斑面積平均減少，且≥10%，顏色積分明顯下降，自身前后比較及與對照組比較，差別均有顯著性，且不產生新的黃褐斑，判定該受試樣品具有祛黃褐斑功能。

2 結果

2.1 分組及入選情況 受試者108例，隨機分為試食組和對照組，每組各54例，均為女性。其中試食組試食結束時有2例未按規定服用受試物，2例未在規定時間復查;對照組有4例未復查。試食組與對照組各有4例被排除，有效病例共100例，每組50例，病例脫失率均為7.41%。試食組年齡最小30歲，最大65歲，平均(49.80±8.59)歲;對照組年齡27～60歲，平均(48.92±9.42)歲。

2.2 功效觀察

2.2.1 黃褐斑顏色深淺變化，見表1。

表1 試食前后黃褐斑顏色深淺度變化()

表1 試食前后黃褐斑顏色深淺度變化()

注:＊＊自身比較P＜0.01，##組間比較P＜0.01

組別 例數 試食前 試食后 差值試食組 50 2.44±0.41 2.24±0.35＊＊## 0.20±0.34##對照組50 2.48±0.36 2.47±0.37 0.01±0.12

2.2.2 黃褐斑面積大小變化，見表2。

表2 試食前后黃褐斑面積大小變化()

表2 試食前后黃褐斑面積大小變化()

注:*自身比較P＜0.05，##組間比較P＜0.01

組別 例數 試食前(mm2) 試食后(mm2) 差值(mm2) 減少百分比(%)試食組 50 5387±2196 4387±1703*##50 5584±1883 5406±1861 177±486 2.89±9.34 1000±840 17.14±10.52對照組

2.2.3 功效判定，見表3。

表3 試食前后功效判定結果(例，%)

由表1、2、3可見，試食組試食后黃褐斑顏色變淺，黃褐斑面積減少，自身比較及與對照組相比差異均有顯著性;試食組有效率與對照組比較差異有顯著性。

2.3 安全性觀察 試食組和對照組受試對象在試驗前、后的精神狀況、睡眠、飲食、大小便等情況無明顯改變。試驗過程中所有受試對象均未見不良反應及過敏反應。服用覆盆子提取物1個月，受試者肝功能、腎功能、血液生化等多項安全性指標均未見明顯變化。腹部B超、心電圖、X線胸部透視試食前試食組和對照組均未見明顯異常。

3 討論

黃褐斑是常見的色素代謝異常性疾病，多發于中青年女性。其產生是由于皮膚表皮基層的黑色素細胞生成的黑色素過多造成。研究發現，酪氨酸酶在黑素合成中起到關鍵作用［4］。人體內的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下轉化為多巴、多巴醌、多巴色素等，最終轉變為色素顆粒。在皮膚黃褐斑發生部位，酪氨酸酶活性增強，黑色素細胞活性增強，色素的產生與排泄失去了平衡，最終黑色素過剩聚集表皮細胞內，形成黃褐斑。

覆盆子的功效成分鞣花酸，能降低酪氨酸酶和過氧化氫酶的活性，從而減少黑色素細胞的代謝強度，減少黑色素的生成，而達到祛斑作用。鞣花酸在整個紫外線區域均有較強的吸收作用，可以通過吸收紫外線起防曬或清除自由基的作用。有報道，口服鞣花酸純品4周后可使受試者皮膚色素沉著得到明顯改善，紫外線照射引起的紅斑受到抑制［5］。此外，覆盆子含有豐富的類黃酮素和維生素C，能有效抑制黑色素的形成，不但對肌膚有活化和修復功效，還具有美白作用。

覆盆子提取物的人體試食觀察結果顯示，試食組按要求服用30 d后，黃褐斑面積減少(1000±840)mm2(自身前后比較P＜0.05)，面積減少百分比為(17.14±10.52)%;顏色積分下降(0.20±0.34)分(自身前后比較P＜0.01);且未產生新的黃褐斑。試食組有效34例，有效率68.00%。試食組試食后黃褐斑面積及顏色積分與對照組比較，差異均有顯著性(P＜0.01)。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003年版)中祛黃褐斑功能判定標準，可以認定該保健食品有祛黃褐斑的作用。

［1］陳坤華，方軍，宮斌，等.覆盆子提取成分促進淋巴細胞增殖作用及與環核苷酸的關系.上海免疫學雜志，1995，15(5):302-304.

［2］朱樹森，張炳烈，李文彬，等.覆盆子對衰老模型小鼠腦功能的影響.中醫藥學報，1998，26(4):42-43.

［3］付德潤，鐘承民，郭偉，等.覆盆子抗誘變作用的實驗研究.中國全科醫學雜志，1998，1(1):35-37.

［4］García-Molina F，Fenoll LG，Morote JC，et al.Opposite effects of peroxidase in the initial stages of tyrosinase-catalysed melanin biosynthesis.J Biochem Cell Biol，2005，37(6):1179-1196.

［5］Kouichi KASAI，Mineka YOSHIMURA，Takuro KOGA，et al.Effects of oral administration of ellagic acid-rich pomegranate extract on ultraviolet-induced pigmentation in the human skin.J Nutr Sci Vitaminol，2006，52(5):383-388.