烏魯木齊無償獻血者HBsAg陰性HBV DNA陽性的追蹤分析①*

周麗君 姚華 郭偉鵬 文國新 李旭 馬紅 段蕾

(1.新疆醫科大學公共衛生學院; 2.新疆醫科大學第一附屬醫院;3.烏魯木齊市血液中心 烏魯木齊 830054)

我國是HBV感染高流行區,約9.7%的人群為HBV攜帶者[1],新疆是乙肝高發區。目前我國針對獻血者乙型肝炎感染特異性檢測為EIA檢測HBsAg,有效降低了血制品中傳染性病毒的傳播,但由于窗口期、基因變異及檢測靈敏度不夠高等因素,發現確有HBsAg檢測為陰性的乙型肝炎感染者存在,給安全輸血帶來極大威脅[2～3],輸血傳播并感染HBV潛在的風險仍然存在,因而在采供血機構實施核酸檢測技術(NAT)對獻血者進行核酸檢測顯得尤為重要。為了解烏魯木齊地區無償獻血者人群HBV經病毒血清學篩查后的輸血傳播HBV的風險,在EIA檢測HBsAg陰性樣本采用NAT進行HBV DNA檢測,現將研究結果報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象

2011年3～10月烏魯木齊市無償獻血者14696例,年齡范圍18～55歲,NAT檢測采用EDTA-K3抗凝管留取全血5mL于4h之內離心分離出血漿,并凍存在2～8℃冰箱,24h內檢測。

1.2 方法

1.2.1 試劑 EIA檢測試劑,HBsAg(上海科華、北京金豪),抗-HCV(北京萬泰、北京金豪)抗-HIV(梅里埃、北京萬泰)、抗TP(北京金豪、北京萬泰),乙肝五項標志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb(上海科華);NAT檢測試劑。乙型肝炎PCR定性試劑盒(上?？迫A),試劑盒均有中國生物制品研究所批批檢及防偽標簽。

1.2.2 儀器 ELI檢測儀器。全自動加樣設備(STAR),全自動酶免設備(FAME);NAT檢測儀器。自動化ABI 7500實時熒光PCR分析儀。

1.2.3 HBV的NAT檢測 采用單樣本檢測,將4～8℃運送的標本4000轉離心20min,用開蓋機去蓋,吸取100uL血漿,裂解、磁分離、純化和PCR反應液分配、核酸提取模板、上樣;提取用磁珠法,擴增檢測用實時熒光PCR,內對照全程質控,自動化ABI 7500實時熒光定量PCR儀和結果分析軟件。

1.2.4 追蹤分析 HBsAg陰性NAT陽性樣本對獻血者進行定期采樣追蹤,檢測乙肝五項、ALT、NAT,分析血清學的轉換。

2 結果

共檢驗樣本14696份,HBsAg陰性14607份,HBsAg陰性HBV DNA陽性2份,分別進行定期追蹤,獻血者1在第14天HBsAg轉換為陽性,并且ALT為46U/L,第21天轉換為“小三陽”,ALT為98U/L,是“窗口期”;獻血者2沒有血清學轉換,但是乙肝核心抗體(HBcAb)為陽性,追蹤結果為隱匿性乙型肝炎。結果見表1。

表1 HBsAg陰性HBV DNA陽性乙肝五項標志物、ALT、NAT追蹤檢測結果

3 討論

輸血安全已經成為患者、患者家屬以及醫務工作者們的共同關注的一個重大公共衛生問題,我國HBV感染普遍存在,對獻血者的血液進行HBsAg篩查是預防HBV經血傳播的重要措施。目前,對無償獻血者HBV的檢測水平已經有很大提高,一步法改為兩步法,第3、4代HBsAg EIA試劑靈敏度可達0.05～0.5ng/mL,經輸血傳播HBV得到明顯控制,但輸注經EIA HBsAg陰性血液后,仍有輸血后乙型肝炎(PTHB)的發生。據報道,輸注HBsAg陰性血液血液后,PTHB的發生率為0.3%～1.7%,占輸血后肝炎病例總數的7%～17%[4]。本研究采用2種不同廠家ELISA試劑的篩查模式對本地區獻血者血液進行檢測后,在一定程度上保證了血液的安全,但該模式下輸血感染HBV的風險仍然存在,本試驗在8個月期間對合格獻血者NAT檢測出2例HBsAg陰性HBV DNA陽性,獻血者1為“窗口期”,輸注該血液制品有輸血傳染性已經成為共識,很多國內文獻表明HBV“窗口期”感染可能是輸血傳播HBV風險的主要原因[5]、獻血者2為隱匿性乙型肝炎,有研究證實隱匿性HBV所輸的血液制品有HBV傳染性[6]。

NAT自20世紀90年代末開始,逐步應用于獻血者血液病毒感染篩查,研究顯示NAT可使HBV檢測的窗口期縮短為34d,能夠降低輸血傳播病毒的殘余危險度50%以上[7]。目前,歐美等一些發達國家已將NAT常規用于血液的篩查,在降低輸血傳播HBV病毒風險方面取得良好的效果[8～11]。地區本次的NAT篩查結果顯示,HBV的殘余風險高達1/7303,明顯高于這些歐美等HBV非流行國家的研究報道。

本研究表明烏魯木齊輸血傳播HBV風險比較高,控制輸血傳播HBV任重而道遠。本研究為日后的本地區的NAT試點工作提供了良好的平臺,考慮到本地區獻血者的特點和HBV流行情況,關注獻血者健康,增加NAT篩查血液對減少輸血傳播病毒感染的風險意義重大。

[1] 莊輝.加強對新生兒以外人群乙型肝炎疫苗免疫[J].中華流行病學雜志,2004,25(5):376.

[2] Allain JP.Occult hepatitis B virus infection:impli-cation in transfusion[J].VoxSang,2004,86:83～91.

[3] 黃呈輝,陳宇光,黃建國,等.核酸擴增檢測在血液篩查的初步應用[J].中華檢驗醫學雜志,2001,24(3):141.

[4] 龐啟迪,張明良,樊少勇,等.抗-HBc陽性HBsAg陰性獻血者乙型肝炎病毒感染性分析[J].中國輸血雜志,2001,14(3):164～165.

[5] 黃建國,謝秀華.HBsAg陰性獻血者人群HBV感染的檢測和輸血殘余風險分析[J].檢驗醫學與臨床,2011,8(7):774～776.

[6] 黎蕾.獻血者中的隱匿性HBV感染[J].中國輸血雜志,2010,23(10):905～906.

[7] Muller-Breitkreutz K.Results of viral marker screening of unpaid blood donations and probability of window period donations in 1997.EPFA Working Group on Quality Assurance[J].Vox Sang,2000,78(3):149～157.

[8] Stramer SL,Glynn SA,Kleinman SH,et al.Detection of HIV-1 and HCV infections among antibody negative blood donors by nucleic acids amplification testing[J].N Engl J Med,2004,351(8):760～768.

[9] Seed CR,Cheng A,Ismay AL,et al.Assessing the accuracy of three viral risk models in predicting the outcome of implementing HIV and HCV RNA donor screening in Austra1ia and the implications for future HBV NAT[J].Tran sfusion,2002,42(10):1365～1372.

[10] Ofergeld R,Faensen D,Ritter S,et al.Human immuno deficiency virus,hepatitis C and hepatilis B infections among blood donors in Germany 2000-2002:risk of virus transmission and the impact of nucleic aid amplification testing[J].Euro Surveill,2005,10(2):8～11.

[11] Li L,Chen PJ,Chen MH,et al.A pilot study for screening blood donors in Taiwan by nucleic acid amplification technology:detecting occult hepatitis B virus infections and closing the serologic window period for hepatitis C virus[J].Tra nsfusion,2008,48(6):1198～1206.