傣藥“雅解沙把”抗變態(tài)反應的實驗研究*

張 婷，葉建州，唐浩然，駱始華，張 超，淤澤溥

(云南中醫(yī)學院，云南昆明 650500)

“雅解”為傣語，意譯為解藥，是在傣族地區(qū)廣為使用的民族藥物。傣醫(yī)“雅解”理論和“雅解” (解藥)是傣醫(yī)藥最具特色的理論和方藥之一。傣醫(yī)“雅解”理論強調疾病的發(fā)生與體內各種毒有關。其核心內容是“未病先解、先解后治”防治疾病思想和治療原則及方法。認為在疾病尚未發(fā)生之前，通過采取“雅解”(解藥)的預防及治療措施，調節(jié)人體生理功能、解除人體的各種毒素，以保持體內四塔、五蘊功能的平衡和協(xié)調，防止疾病的發(fā)生;或當人體發(fā)病后應先服用“雅解”(解藥)，以解除導致人體發(fā)病的各種毒素;或患病日久或久治不愈者，可服用“雅解”(解藥)以解除失治、誤治或用藥不當所造成的毒副作用，以解除人體的各種毒素，調節(jié)人體生理功能，保持體內“四塔五蘊”和臟腑功能的平衡和協(xié)調［1］。

“雅解沙把”是云南西雙版納傣族自治州傣醫(yī)醫(yī)院創(chuàng)制的院內制劑，由百樣解、傣百解、定心藤、奶子藤、白花臭牡丹根等藥物組成，是傣醫(yī)解藥的代表方藥。全方具有調平四塔的功能，能解熱毒及其多種毒。根據(jù)其臨床常用于解濕疹、動物叮咬及多種藥物、食物等引起軀體不適之毒的經驗，筆者認為“雅解沙把”的解毒作用可能與其具有抗變態(tài)反應的作用有關。

本實驗通過建立Ⅰ、Ⅳ型變態(tài)反應動物模型來研究傣藥“雅解沙把”的抗變態(tài)反應作用，為闡明傣醫(yī)的“雅解”理論的科學內涵及“雅解沙把”的“解毒”本質提供實驗依據(jù)，以期進一步豐富、深化和完善傣醫(yī)“雅解”理論，指導傣醫(yī)解藥的臨床合理應用。

1 實驗材料

1.1 動物

昆明種小白鼠，清潔級，雌雄各半，體重18-22g。購自四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所，許可證號:SCXK(川)2008-24;合格證號:0013106。Wistar大鼠，體重180～200g，雌雄各半，健康豚鼠，雌雄各半，由昆明醫(yī)學院動物室提供，許可證號:SCXK(滇)2005-0008;合格證號:0021861。

1.2 藥品與試劑

“雅解沙把” (百解膠囊)，滇藥制字 (Z)20082252K，0.2g×60粒/瓶，5粒/次，每日3次;云南省西雙版納州傣醫(yī)院院內制劑，由云南省西雙版納州傣醫(yī)院提供。將膠囊內容物用水煎煮、濃縮成稠浸膏。置于-18℃冰箱冷藏備用，給藥前配制所需濃度;低劑量為臨床用量的等效量，即0.39g生藥/kg體重，高劑量為臨床等效量的9倍，即3.51g生藥/kg體重。氫化可的松注射液:規(guī)格:5mL∶25mg天津金耀氨基酸有限公司，批號:H12020886。2，4-二硝基氟苯 (DNFB):瑞士(adamas-beta)，批號:CAS號:97-00-7。磷酸組胺:上海生物試劑廠生產，批號:909035。馬來酸氯苯那敏片 (撲爾敏片):江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司，批號:H32023645。卵白蛋白:Sigma，批號:A-5378。百白破疫苗，成都生物制品研究所，批號:S10970013。

1.3 儀器

XS125A電子分析天平:瑞士 Precisa公司;Infinite M200 PRO酶標儀:瑞士Tecan公司。

2 方法與結果

2.1 “雅解沙把”對小鼠耳異種被動皮膚過敏反應 (PCA)的影響

參照文獻［2-3］制備大鼠抗卵白蛋白血清:取大鼠6只，雌雄各半，肌肉注射卵白蛋白25mg∕kg，同時腹腔注射免疫佐劑百日咳疫苗2×1 010∕只，12d后處死動物采血，血液低速離心，分離血清并混合置低溫冰箱備用，用時按1∶10(抗血清:生理鹽水)稀釋。

另取小鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，各組小鼠按表1劑量連續(xù)灌胃給藥或蒸餾水4d后，小鼠兩只耳廓各注射大鼠抗血清20μl，48h后抗原攻擊，尾靜脈注射0.5%伊文思藍溶液0.25mL內含卵白蛋白0.25mg，30min后，將小鼠頸椎脫臼處死，剪下耳廓 (藍染部位均剪下)。兩只耳廓置于試管中，加入0.75mL、1mol/L的氫氧化鉀溶液浸泡，37℃恒溫過夜消化，次日加 3.5mL(0.6mol/L)的磷酸與丙酮混合液 (5∶13，v/v)，經漩渦振蕩混勻，再以2 500r/min離心15min，取上清液在Infinite M200 PRO酶標儀610nm處測定光密度 (OD)［4］。結果見表1。

表1 “雅解沙把”小鼠異種被動皮膚過敏反應的影響 (±s)

表1 “雅解沙把”小鼠異種被動皮膚過敏反應的影響 (±s)

注:與模型組對比＊＊P＜0.01.

組別 劑量(g/kg) 例數(shù) OD值 抑制率(%)模型組 —— 14 0.0998±0.0074——撲爾敏組 0.004 14 0.0244 ±0.0029＊＊ 75.60高劑量組 3.51 13 0.0313 ±0.0267＊＊ 68.60低劑量組 0.39 14 0.0537 ±0.0045＊＊46.20

從表1可看出:撲爾敏組、“雅解沙把”高、低劑量組對小鼠異種被動皮膚過敏反應均有顯著抑制作用。

2.2 “雅解沙把”對磷酸組織胺致癢作用的影響

參照文獻［5］，取豚鼠40只，雌雄各半，隨機分組同前。每天灌胃一次，連續(xù)5d;第4天，給各組豚鼠右后足背剃毛;第5天，末次給藥1h后，用砂紙擦傷右后足背剃毛處，面積約1cm2，并在創(chuàng)面處滴0.01%磷酸組織胺0.05mL/只，此后每隔3min依0.02%，0.03%，0.04%……，遞增濃度，每次均為0.05mL/只，直至出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足，以最后出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足時所給予的磷酸組織胺總量微克 (μg)為致癢閾，結果見表2。

表2 “雅解沙把”磷酸組織胺累計用量 (致癢閾)±s)

表2 “雅解沙把”磷酸組織胺累計用量 (致癢閾)±s)

注:與模型組對比，＊＊P＜0.01.

組別 劑量(g/kg)給藥途徑 例數(shù) 癢閾值(μg)模型組 ——Ig 10 6.15±2.53撲爾敏組 0.004 Ig 10 58.30±25.21＊＊高劑量組 2.097 Ig 10 54.00±34.28＊＊低劑量組 0.232 Ig 10 35.61±23.49＊＊

從表2可看出，撲爾敏組、“雅解沙把”高、低劑量組均能夠增加組織胺涂抹次數(shù)及組織胺累計用量。

2.3 “雅解沙把”對DNFB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應的影響

參照文獻［6］方法，健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機分成5組，見表3。致敏期灌藥自第一次涂藥前2h開始，連續(xù)用藥5d(第0，1，2，3，4天)。誘發(fā)期灌藥時間為誘發(fā)前2h及誘發(fā)后6h。實驗前一天在腹部固定部位3cm×3cm用剪刀及剃須刀去毛。實驗第1、2天致敏期于去毛部位涂0.5%DNFB，每天1次，每次25μl，第3，4，5天不涂藥。第6天 (誘發(fā)期)在小鼠左耳背涂0.2%DNFB20μl，誘發(fā)皮炎，右耳背涂4:1丙酮橄欖油20μl作對照。于誘發(fā)后24h，用直徑0.9cm的金屬打孔器在耳中部打孔，取下相同大小的耳片，稱取其重量。用分析天平稱得每個耳片的重量。計算誘發(fā)后左右耳腫脹度。結果見表3。

表3 雅解沙把DNFB所致小鼠遲發(fā)型超敏反應的影響 ?±s)

表3 雅解沙把DNFB所致小鼠遲發(fā)型超敏反應的影響 ?±s)

注:與正常組比較，*P＜0.05，與模型組比較，△P＜0.05.

組別 劑量 (g/kg) 例數(shù) 耳片重量差值 (g)正常組 ——10 0.0013±0.0009模型組 —— 10 0.0050±0.0043*氫化可的松 0.024 10 0.0008±0.0005△高劑量組 3.51 10 0.0012±0.0014△低劑量組0.39 10 0.0025±0.0019

從表3可看出:模型組與正常組比較，兩組耳片重量差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05);雅解沙把高劑量組、陽性藥組耳片重量與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。

2.4 統(tǒng)計方法

計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)x±標準差 (s)表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布、方差齊的數(shù)據(jù)進行方差分析;計量資料不符合正態(tài)分布，則用秩和檢驗。

3 討論

傣醫(yī)學認為，疾病的發(fā)生與體內各種毒素有關。機體內的臟腑功能代謝失調而內生毒素，導致體內“四塔五蘊”功能失調，風塔、火塔過剩，水塔不足，不能制火滋潤肌膚，風熱濕邪藴積于肌膚、皮下而發(fā)病［7］。傣醫(yī)“解藥”產生的理論基礎是“毒”害人體論［8］。傣藥“雅解沙把”是以傣醫(yī)“雅解”理論為指導，以解藥為主配伍，方中百樣解，傣百解，定心藤，具有調平四塔，除風止癢，消疔瘡之功，用于各種皮膚瘙癢、疔癤瘡癰。白花臭牡丹根，奶子藤，性涼具有清火解毒，補氣活血，養(yǎng)容顏之功，助主藥增強療效［9］。

小鼠異種被動皮膚過敏 (PCA)是由IgE類抗體介導引起的I型變態(tài)反應。IgE類抗體與肥大細胞表面特異受體結合形成IgE復合物，當受同種或異種抗原攻擊時，引起肥大細胞脫顆粒，釋放過敏介質 (組胺、慢反應物質等)，使局部皮膚血管通透性增加［10］。表明“雅解沙把”對I型變態(tài)反應有抑制作用，其作用主要與抗I型變態(tài)反應介質有關，其對IgE生成的影響值得進一步探索。

組胺為一種重要的炎癥介質，并參與I型變態(tài)反應等引起皮膚瘙癢［11］。可能抑制抗原與IgE結合，抑制肥大細胞釋放組胺等炎癥介質，減少機體瘙癢，具有抗瘙癢、抗過敏的作用。遲發(fā)型超敏反應為Ⅳ型變態(tài)反應，由T淋巴細胞介導。本實驗結果表明“雅解沙把”對DNFB誘發(fā)的小鼠遲發(fā)型超敏反應引起的耳腫脹具有抑制作用，提示“雅解沙把”能抑制細胞免疫功能，具有抗IV型變態(tài)反應的作用。

綜上所述，本實驗結果表明“雅解沙把”具有抗I、Ⅳ型變態(tài)反應及止癢的作用，為傣醫(yī)解藥治療過敏性疾病提供了實驗依據(jù)。

［1］林艷芳，鄭進，等.傣醫(yī)基礎理論［M］北京:中國中醫(yī)藥出版社，2007:56-57.

［2］李靜平，李慶生，陳海豐.膚敏水煎劑抗過敏的實驗研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2005，16(3):182-185.

［3］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學 (第3版)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1430.

［4］李秀芳，金若敏，符勝光，等.不同品系大鼠對天花粉蛋白誘導被動皮膚過敏差異性的比較研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2010，21(4):382-385.

［5］朱曉燕.三物黃芩顆粒治療急性濕疹的抗過敏機制研究［D］.四川:成都中醫(yī)藥大學，2005:1-7.

［6］宋智琦，林熙然.某些驗證介質拮抗劑抗過敏作用的實驗研究［J］.中國皮膚性病學雜志，1998，12(5):266-268.

［7］玉臘波.傣藥“雅解” (解藥)臨床應用舉隅［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2008，7:25-29.

［8］玉波罕，林艷芳.傣醫(yī)雅解 (解藥)理論在臨床中的應用研究［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2009，10(10):27-29.

［9］林艷芳.傣醫(yī)臨床學［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2007:56-57.

［10］佟巖，王淑君，周曉棉，等.楊梅素對小鼠被動皮膚過敏反應的影響［J］.沈陽藥科大學學報，2009，26(10):822-825.

［11］樊永蓉，羅文輝.二甲克癢丸抗變態(tài)反應作用的實驗研究［J］.湖南中醫(yī)藥導報，2003，12(9):63-64.