攻擊行為測試:大鼠怒情緒評價方法的復測信度檢驗

薄純光 魏 盛 高興笑 張惠云

情志與健康和疾病的關系，尤其是不良情緒對健康和疾病的影響已成為當今全社會關注的焦點。中醫七情中怒是不良情緒中最不可忍受、對人際關系與社會影響最大、與疾病發生關系最為密切的情緒反應之一［1］。動物的攻擊行為(aggressive behavior)多是由于動物個體之間爭奪領域、食物或巢區而發生的相互攻擊，任何動物都有這種行為［2］。攻擊行為測試目前已作為評價大鼠怒情緒經典方法得到廣泛應用，但是關于怒情緒在攻擊行為中表達參數的穩定性考察卻未見報道。本研究利用國內外醫學界廣泛應用的居住入侵配合社會隔離慢性應激造成大鼠出現典型“怒”情緒，通過組內相關系數(intraclass correlation coefficient，ICC)和一致性系數(agreement index，Kappa)兩個統計參數對怒情緒大鼠攻擊行為表達參數進行復測信度檢驗，以確定較可信的怒情緒大鼠攻擊行為評價方法［3～5］。

材料與方法

1．實驗動物:健康雄性 Wistar大鼠，180～220g，20只。SPF級，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，(許可證編號為SCXK11－00－0008)。另準備120～150g Wistar大鼠若干作為入侵鼠。

2．實驗步驟及方法:(1)居住入侵配合社會隔離慢性應激造模:實驗大鼠于室溫20±2℃，12h/12h明暗周期環境(8:00～20:00)晝夜顛倒，自由進水飲食飼養;預適應環境2周。居住鼠每籠5只飼養1周，然后單籠飼養1周，進入實驗。所有實驗操作均為暗淡燈光(＜2lux)下進行［6］。居住鼠與入侵鼠隔開單獨的房間另養，飼養條件相同。篩選體重200±5g大鼠20只進入實驗。居住入侵實驗時，將入侵鼠轉移引入居住鼠籠中15min。開始5min為雙方互相適應期，攻擊行為測定從第6min開始。入侵實驗共進行2次，間隔1周。實驗結束后由不熟悉實驗設計人員進行數據提取錄入。(2)攻擊行為測定:攻擊行為含兩種類型:正面攻擊(當入侵鼠試圖逼進時躍起)和側旁攻擊(弓背從斜地里竄出將入侵者推出)。觀測者記錄攻擊行為不同方面得分:潛伏期(latent time)、攻擊次數(number of attacks)、攻擊持續時間(attack durations)、撕咬次數(number of bites)、攀壓持續時間(on－top durations)、混和攻擊行為得分(composite aggression)，另外還記錄豎毛次數(piloerection)。混和攻擊行為得分計算公式如下:混和攻擊行為得分=攻擊次數+0．2×［攻擊持續時間(s)］+撕咬次數 +0．2 ×［攀壓持續時間(s)］+ 豎毛次數(Albert，et al．1991)［7］。

3．統計學方法:使用SPSS 17．0軟件進行統計分析，運用GraphPad Prism 5．0軟件進行統計作圖。Kappa參數由Analyze→ Descriptive statistics→ Crosstabs statistics→ Kappa過程完成得到;ICC參數由Analyze→Scale→Reliability Analysis過程完成得到。Kappa參數分析前，先用分位數法將實驗所得的數據分為以下4組:①高分組(＞75%分位數，計4分);②偏高分組(75%分位數～中位數，計3分);③偏低分組(中位數～25%分位數，計2分);④低分組(＜25%分位數，計1分)。當參數ICC和Kappa:①0．81～1．00認為可信度極高;②0．61～0．80認為可信度高;③0．41 ～0．60 認為可信度中;④0．21 ～0．40 認為可信度為弱;⑤ ＜0．20 認為可信度為極弱［8］。

結 果

1．大鼠攻擊行為不同實驗參數分類(高、偏高、偏低、低)一致性檢驗(Kappa):在大鼠攻擊行為不同實驗參數中，僅混和攻擊行為得分(Kappa=0．662，p＜0．001)具有高度的可信度，攻擊持續時間(Kappa=0．533，P ＜0．001)具有中等的可信度，其余參數可信度較弱(表1、表2)。

表1 不同實驗參數分類初測與復測Kappa比較，n=40)

表1 不同實驗參數分類初測與復測Kappa比較，n=40)

與初測相比較，a P ＜0．05，b P ＜0．01，c P ＜0．001

實驗參數可信度潛伏期 23．25 35．75 48．75 24．75 35．50 57．25 0．333b初測 復測25%分位數 50%分位數 75%分位數 25%分位數 50%分位數 75%分位數 Kappa弱攻擊次數 16．50 20．50 38．50 21．50 25．00 43．75 0．267a 弱攻擊持續時間 6．15 10．35 17．88 7．55 11．50 14．88 0．533c 中撕咬次數 3．00 8．00 12．75 1．25 5．00 7．75 0．130 極弱攀壓持續時間 18．38 42．00 56．50 15．50 24．50 45．25 0．133 極弱混和攻擊行為得分 27．93 46．45 80．36 33．60 42．30 69．36 0．662c 高

表2 混和攻擊行為得分參數分類一致性情況(Kappa=0．662)

2．大鼠攻擊行為不同實驗參數一致性檢驗(ICC):ICC結果表明:攻擊次數(ICC=0．834，p＜0.001)，攻擊持續時間(ICC=0．898，P ＜0．001)、混和攻擊行為得分(ICC=0．910，P ＜0．001)具有極高的可信度，潛伏期(ICC=0．671，P ＜0．001)具有高度的可信度，其余參數可信度一般(表3)。

表3 大鼠攻擊行為不同實驗參數初測與復測ICC比較，n=40)

表3 大鼠攻擊行為不同實驗參數初測與復測ICC比較，n=40)

與初測相比較，a P ＜0．001，b P ＜0．05

可信度潛伏期(s) 41．20 ±30．02 40．35 ±20．89 0．671a實驗參數 初測 復測 ICC高攻擊次數 29．75 ±22．31 33．25 ±18．09 0．834a 極高攻擊持續時間(s)12．20 ±7．10 11．67 ±5．72 0．898a 極高撕咬次數 10．50±9．90 4．95±3．98 0．149 極弱攀壓持續時間(s)41．52 ±29．81 33．25 ±22．24 0．407b 中混和攻擊行為得分 50．99 ±26．56 47．19 ±21．62 0．910a 極高

另外，混和攻擊行為得分參數初測與復測具有較好相關性(圖1)。

圖1 混和攻擊行為得分參數初測與復測相關性

討 論

居住入侵配合社會隔離慢性應激造成大鼠出現典型“怒”情緒改變，已在國內外醫學界得到廣泛應用，且一般認為攻擊行為是怒情緒的核心表現［9］。但是關于攻擊行為測試本身方法學穩定性考察則一直未見相關報道。因此，本文擬對攻擊行為測試中幾個關鍵參數指標進行復測信度考察，進而篩選出可穩定反應大鼠怒情緒的核心參數，為攻擊行為測試方法的穩定性提供第一手實驗數據支撐。

信度是指多次測量結果的一致程度，其反映了一種測量方法或工具的穩定性或可靠性［10］。復測信度是信度的評價分析方法之一，它考察的是經過一段時間后，前后兩次測量結果的穩定程度，復測信度越高，測量結果越一致，這也表明評價方法或工具越穩定，可信度越高。常用的統計評價參數有兩種:ICC和Kappa［11］。ICC又稱組內相關系數，是最先由Bartko于1966年提出的，用于評價連續變量或等級變量的可信度大小［10，12，13］。Kappa 又稱一致性系數，是由 Cohen于1960年提出的，用于評價分類變量的可信度大小。不僅能檢驗兩種方法或兩次調查之間是否有一致性，而且能給出一個反映一致性大小的“量”值［14］。

通過本研究結果，系數Kappa值顯示，在大鼠攻擊行為不同實驗參數中，僅混和攻擊行為得分(Kappa=0．662，P ＜0．001)具有高度的可信度，攻擊持續時間(Kappa=0．533，P ＜0．001)的可信度尚可考慮，其余參數可信度較弱;而系數ICC值結果顯示，攻擊次數(ICC=0．834，P ＜0．001)，攻擊持續時間(ICC=0．898，P ＜0．001)、混和攻擊行為得分(ICC=0．910，P ＜0．001)均具有極高的可信度，潛伏期(ICC=0.671，p＜0．001)具有高度的可信度，其余參數可信度一般。而攻擊次數和攻擊持續時間前后兩次實驗中kappa系數沒有保持高度的一致性，這可能和環境因素和怒情緒本身分為兩種亞型:憤怒和郁怒有關［15］。環境方面，可能是由于前后兩次攻擊行為測定實驗中，入侵鼠的改變可能同時會引起攻擊環境的改變，進而影響大鼠的攻擊行為;怒情緒的兩種亞型在試驗的過程中，是不是存在著變化或彼此轉化現象，從而導致大鼠攻擊行為有關參數的不穩定，有待于進一步的研究論證。綜上所述，混和攻擊行為得分可作為怒情緒大鼠攻擊行為實驗中一個較穩定的參數，具有較高的可信度。

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