超聲檢測老年膀胱癌患者血流分級與術后組織中血管內皮生長因子表達的關系

魏蘭萍 任長慶 陳 靜 范曉燕 于鵬玉 (空軍航空醫學研究所附屬醫院特診科，北京 00089)

病理圖像顯示膀胱癌在腫瘤形成過程中新生血管數量多，壁薄，這為癌細胞侵襲、轉移提供了重要基礎〔1，2〕。超聲檢測作為術前診斷的重要技術，具有無創，操作簡單的特點，而且超聲檢測可以有效判斷血流。血管內皮生長因子(VEGF)是重要的血管形成促進因子，可以激活血管新生，促進腫瘤進展。本文通過超聲檢測老年膀胱癌患者血流分級，觀察其與術后癌組織中VEGF表達關系，探討術前超聲檢測價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2006年1月至2010年12月我院確診為膀胱癌并需要進行手術治療的老年患者96例。其中男50例，女46例，年齡60～79〔平均(68.9±4.9)〕歲。納入標準均按照WHO泌尿系統疾病腫瘤的診斷標準，并由兩位病理主治醫師再次確診。排除標準:①合并其他系統惡性腫瘤患者;②術前進行放化療患者。

1.2 超聲檢測方法 使用日立6500及6000超聲診斷儀分析膀胱腫瘤血流，選擇腫瘤內血流信號最豐富區域，根據檢查標準制訂血流分級。具體標準:0級:腫瘤內無血流顯示;Ⅰ級:腫瘤內1～2處點狀或條狀血流顯示;Ⅱ級:3～4條彩色血流顯示;Ⅲ級:5條以上彩色血流顯示〔3〕。

1.3 VEGF檢測 VEGF濃縮液購自北京中杉金橋生物技術有限公司，依不同配比稀釋，選擇最合適的稀釋比例。應用免疫組織化學SP法:①將5 μm切片脫蠟水化后，用PBS沖洗3次，每次3 min。②用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復及EDTA抗原熱修復。③每張切片加1滴過氧化物阻斷溶液(試劑A)，以阻斷內源性過氧化物酶活性，室溫下孵育10 min。④PBS沖洗3次，每次3 min。⑤甩去PBS液，每張切片加1滴非免疫性動物血清(試劑B)，室溫下孵育10 min。⑥甩去血清，每張切片加1滴第一抗體，室溫下孵育60 min或4℃過夜。⑦PBS沖洗3次，每次3 min。⑧甩去PBS液，每張切片加1滴生物素標記的第二抗體(試劑C)，室溫下孵育10 min。⑨PBS沖洗3次，每次3 min。⑩甩去PBS液，每張切片加1滴鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液(試劑D)，室溫下孵育10 min。PBS沖洗3次，每次3 min。甩去PBS液，每張切片加2滴新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察3～10 min，陽性顯色為棕色。自來水沖洗，蘇木素復染，0.1%鹽酸分化，PBS沖洗反藍。切片經梯度酒精脫水干燥，中性樹膠封固。VEGF陽性染色均位于細胞質之中，呈棕黃色為陽性細胞，合并計算高倍鏡下(×400)隨機選擇的5個視野中陽性細胞占全部計數腫瘤細胞的百分率。

1.4 統計學分析 應用SAS6.12統計學軟件，兩組間定量資料采用t檢驗，多組間定量資料采用方差分析，并應用SNK法進行兩兩比較，同時進行線性相關分析。

2 結果

2.1 膀胱癌中不同血流分級與VEGF表達陽性率的關系 膀胱癌超聲檢測血流分級0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級VEGF表達陽性率〔分別為(45.46% ±9.92%)(n=13)、(53.43% ±9.37%)(n=30)、(68.06% ±11.57%)(n=30)、(88.65% ±14.54%)(n=23)〕差別顯著(F=11.93，P=0.009 0)。

2.2 膀胱癌不同臨床病理特征中血流分級及VEGF表達陽性率差別 有無浸潤性、不同級別膀胱癌中血流分級及VEGF表達有顯著差別(P＜0.000 1)。見表1。

表1 膀胱癌不同臨床病理特征中血流分級及VEGF表達陽性率的差別

2.3 膀胱癌中血流分級與VEGF表達相關性 經線性相關分析，膀胱癌中血流分級與VEGF表達呈正相關性(r=0.41，P=0.021 5)。

3 討論

現代各種醫學影像技術不僅可以宏觀顯示腫瘤的聲像改變，而且可以定量分析腫瘤血流特點。與其他影像學技術相比，超聲具有快速方便、操作簡單及無輻射的優點，并能提供有關腫瘤血管生長程度、分布、血流性質、數量、血流率、血流動力學參數等信息，被認為是觀察腫瘤內血管最方便、最先進的研究技術〔4〕。腫瘤生長依賴于血管生成，而且血管增生程度反映腫瘤生成能力，在一定程度上決定了腫瘤生物學行為〔5〕。當有新生血管長入腫瘤組織，則腫瘤會呈迅速生長，且腫瘤細胞可侵入血管或淋巴管，發生轉移〔6〕。VEGF是目前研究最多的促血管生成因子，對腫瘤基質血管形成及腫瘤生物學行為均有重要影響〔7〕，它在胚胎發育，創傷修復等情況下起重要作用，而且相關研究證實檢測VEGF與腫瘤預后有重要關系〔8〕。術前檢測血流分級可能對判斷患者預后有一定價值。超聲檢查方法簡單、實用，能提供血流圖像，臨床診斷和治療中可以積極應用〔9〕。膀胱癌的癌組織中血管及血流均很豐富，因此，觀察其血流分級，有助于術前深入了解腫瘤發生發展及轉移。綜上，超聲檢測血流分級對老年膀胱癌患者具有較高的術前診斷價值，術前檢測血流分級可以反映膀胱癌中VEGF表達情況，可能對于術前判斷腫瘤預后和指導治療有重要價值。

1 羅紅纓，李 微，謝艷霞.彩色多普勒超聲檢測膀胱癌血流及其MVD、VEGF表達的關系〔J〕.中國現代醫生，2009;47(11):17-9.

2 Yang S，Wu X，Luo C，et al.Expression and clinical significance of hepaCAM and VEGF in urothelial carcinoma〔J〕.World J Urol，2010;28(4):473-8.

3 張瑞虹，趙 杰，李向沛，等.三維彩色超聲檢測腎透明細胞癌中血流分級與血管密度的關系〔J〕.西南國防醫藥，2011;21(7):737-8.

4 肖際東，沈守榮，朱文暉，等.彩色多普勒超聲檢測肝癌血流及其與MVD、VEGF表達的關系〔J〕.中國醫學影像技術，2007;23(6):884-6.

5 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(7):886-7.

6 劉愛東.CD105在胃癌中的表達及意義探討〔J〕.臨床合理用藥，2011;4(6A):92-3.

7 Donmez G，Sullu Y，Baris S，et al.Vascular endothelial growth factor(VEGF)，matrix metalloproteinase-9(MMP-9)，and thrombospondin-1(TSP-1)expression in urothelial carcinomas〔J〕.Pathol Res Pract，2009;205(12):854-7.

8 Nakanishi R，Oka N，Nakatsuji H，et al.Effect of vascular endothelial growth factor and its receptor inhibitor on proliferation and invasion in bladder cancer〔J〕.Urol Int，2009;83(1):98-106.

9 肖際東，沈守榮，李瑞珍，等.造影增強能量多普勒超聲評價肝癌血管生成的臨床應用〔J〕.中南大學學報(醫學版)，2007;32(5):840-2.